基于毛细管电泳片段分析检测白血病融合基因的引物组合、试剂盒及方法与流程

文档序号:37126013发布日期:2024-02-22 21:37阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种基于毛细管电泳片段分析检测白血病融合基因的引物组合,其特征在于:所述引物组合由四个引物大组组成:第一引物大组包括seq id no.1-seq id no.48所示的引物序列;第二引物大组包括seq id no.47-seq id no.84所示的引物序列;第三引物大组包括seq id no.85-seq id no.134所示的引物序列;第四引物大组包括seq id no.47-seq idno.48以及seq id no.135-seq id no.189所示的引物序列,所述引物组合可检测白血病的121种融合基因的291种融合亚型,所述融合基因还包括监测表达量的融合基因类型。

2.根据权利要求1所述的一种基于毛细管电泳片段分析检测白血病融合基因的引物组合,其特征在于:所述引物组合中的各引物大组分别由两个引物小组组成:第一引物大组包括由seq id no.1-seq id no.24所示的引物序列组成的第一引物小组和seq id no.25-seq id no.48所示的引物序列组成的第二引物小组;第二引物大组包括由seq id no.47-seq id no.64所示的引物序列组成的第一引物小组和seq id no.65-seq id no.84所示的引物序列组成的第二引物小组;第三引物大组包括由seq id no.85-seq id no.116所示的引物序列组成的第一引物小组和seq id no.117-seq id no.134所示的引物序列组成的第二引物小组;第四引物大组包括由seq id no.135-seq id no.164所示的引物序列组成的第一引物小组和seq id no.165-seq id no.189以及seq id no.47-seq id no.48所示的引物序列组成的第二引物小组,其中seq id no.47-seq id no.48为第一引物大组、第二引物大组和第四引物大组的质控引物,seq id no.133-seq id no.134为第三引物大组的质控引物。

3.根据权利要求2所述的一种基于毛细管电泳片段分析检测白血病融合基因的引物组合,其特征在于:所述第一引物大组、第二引物大组、第三引物大组、第四引物大组的不同引物小组中的引物序列,分别采用不同的荧光标记;所述荧光标记的荧光基团选自fam、hex、vic、tamra、rox、texred中的任意一种。

4.根据权利要求3所述的一种基于毛细管电泳片段分析检测白血病融合基因的引物组合,其特征在于:所述第一引物大组中seq id no.5、seq id no.15、seq id no.22、seq idno.27、seq id no.43、seq id no.46、seq id no.47所示的引物序列5’端进行荧光标记;所述第二引物大组中seq id no.49、seq id no.59、seq id no.62、seq id no.64、seq idno.65、seq id no.67、seq id no.70、seq id no.72、seq id no.74、seq id no.77、seq idno.79、seq id no.80、seq id no.83所示的引物序列5’端进行荧光标记;所述第三引物大组中seq id no.85、seq id no.115、seq id no.116、seq id no.117、seq id no.124、seqid no.125、seq id no.128、seq id no.132、seq id no.133所示的引物序列5’端进行荧光标记;所述第四引物大组中seq id no.135、seq id no.137、seq id no.147、seq idno.154、seq id no.156、seq id no.163、seq id no.165、seq id no.168、seq id no.175、seq id no.181、seq id no.182、seq id no.183、seq id no.184、seq id no.47、seq idno.186、seq id no.188所示的引物序列5’端进行荧光标记,位于同一小组的引物序列荧光标记相同。

5.一种基于毛细管电泳片段分析检测白血病融合基因的试剂盒,其特征在于:包括权利要求1-4任一项所述的引物组合。

6.根据权利要求5所述的一种基于毛细管电泳片段分析检测白血病融合基因的试剂盒,其特征在于:还包括扩增酶混合液、阳性分型参考标准物质、阴性对照,毛细管电泳内标试剂。

7.根据权利要求6所述的一种基于毛细管电泳片段分析检测白血病融合基因的试剂盒,其特征在于:所述阳性分型参考标准物质由白血病121种融合基因291种融合亚型的阳性质粒用引物组合:seq id no.1至seq id no.189的引物分别进行pcr扩增得到阳性片段,并按照四个引物大组分别进行混合后制备而成。

8.根据权利要求6所述的一种基于毛细管电泳片段分析检测白血病融合基因的试剂盒,其特征在于:所述扩增酶混合液为pcr扩增缓冲液,mg+,热启动酶混合液,所述阴性对照为正常人血液rna反转录得到的cdna。

9.一种基于毛细管电泳片段分析检测白血病融合基因的方法,其特征在于,包括如下步骤:

10.根据权利要求9所述的一种基于毛细管电泳片段分析检测白血病融合基因的方法,其特征在于,所述引物组合在扩增体系中,seq id no.1-24的引物浓度均为1pmol/μl,seqid no.25-48的引物浓度均为1.5pmol/μl;seq id no.47-64的引物浓度均为1.5pmol/μl,seq id no.64-84的引物浓度均为1pmol/μl;seq id no.85-116的引物浓度为1pmol/μl,seq id no.117-134的引物浓度为1.5pmol/μl;seq id no.135-164的引物浓度为1pmol/μl,seq id no.165-189的引物浓度为1.5pmol/μl。


技术总结
本发明公开了基于毛细管电泳片段分析检测白血病融合基因的引物组合、试剂盒及方法,检测白血病融合基因的引物组合由四个引物大组组成:第一引物大组包括SEQ ID NO.1‑SEQ ID NO.48所示的引物序列;第二引物大组包括SEQ ID NO.47‑SEQ ID NO.84所示的引物序列;第三引物大组包括SEQ ID NO.85‑SEQ ID NO.134所示的引物序列;第四引物大组包括SEQ ID NO.47‑SEQ ID NO.48以及SEQ ID NO.135‑SEQ ID NO.189所示的引物序列,所述引物组合可检测白血病的121种融合基因的291种融合亚型,所述融合基因还包括监测表达量的融合基因类型。本发明方法利用4个多重复合PCR扩增体系,位点涵盖全面,一管可检测多种融合亚型,并且检测灵敏度高、分辨率高,可有效地区分1bp的差异,检测速度快,特异性强、成本低,具有极高的临床应用价值。

技术研发人员:金芬芬,李璐,杨亚萍,王雪,任云飞
受保护的技术使用者:杭州宏望医学检验实验室有限公司
技术研发日:
技术公布日:2024/2/21
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