一种南极假丝酵母脂肪酶B突变体蛋白及其应用

文档序号:43732978发布日期:2025-11-14 21:12阅读:58来源:国知局
技术特征:

1.一种南极假丝酵母脂肪酶b的突变体蛋白,其序列包含位于原calb的如seq id no.1所示的氨基酸序列从n端到c端的第195位s与f的突变、第195位s与y的突变、第283位a与y的突变中的一个或几个。

2.根据权利要求1所述的南极假丝酵母脂肪酶b的突变体蛋白,其特征在于,

3.一种编码权利要求1或2中所述的突变体蛋白的核苷酸分子,其序列中包含位于编码原calb的如seq id no.1所示的氨基酸序列的如seq id no.7所示的核苷酸序列中的从5′端到3′端方向的第584位c与t的突变、第584位c与a的突变、第847位g与t的突变、第848位c与a的突变、第849位a与c的突变中的一个或几个。

4.根据权利要求3所述的核苷酸分子,其特征在于,

5.根据权利要求4所述的核苷酸分子,其特征在于,所述核苷酸分子为如下dna分子:

6.一种含有权利要求3-5中任意一项所述的核苷酸分子的表达盒。

7.一种含有权利要求3-5中任意一项所述的核苷酸分子的重组载体;优选地,所述重组载体为pgapz(mα)a。

8.一种含有权利要求3-5中任意一项所述的核苷酸分子的重组微生物;优选地,所述重组微生物的宿主细胞为毕赤酵母。

9.一种如权利要求1或2所述的突变体蛋白的制备方法,其包括将权利要求8中的所述的重组微生物进行发酵培养,获得南极假丝酵母脂肪酶b的突变体蛋白;

10.如权利要求1或2所述的突变体蛋白或由权利要求3-5中任意一项所述的核苷酸分子或如权利要求6所述的表达盒如权利要求7所述的重组载体或如权利要求8所述的重组微生物或如权利要求9所述制备方法制得的突变体蛋白在生物化工领域中的应用;优选地,所述生物化工领域包括食品、制药、生物能源或化工领域;进一步优选地,所述应用包括合成dha甘油酯和提高calb的催化效率。


技术总结
本发明属于酶的定向进化改造和生物催化应用技术领域,涉及一种南极假丝酵母脂肪酶B突变体蛋白及其应用,该突变体蛋白序列包含位于原CALB的如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列从N端到C端的第195位S与F的突变、第195位S与Y的突变、第283位A与Y的突变中的一个或几个;本发明在野生型脂肪酶基因序列的基础上,通过理性设计和定点突变,最终获得了Tm值和最适反应温度明显提高,且催化活力提高了1~2倍的突变体S195F、S195Y、A283Y、S195F‑A283Y和S195Y‑A283Y;将该突变体用于催化二十二碳六烯酸(DHA)甘油酯合成时,展现出更高催化效率,有效提高了DHA甘油酯的产量。

技术研发人员:陈必强,逯新坤,张慧,沈小伟,龙烨
受保护的技术使用者:北京化工大学
技术研发日:
技术公布日:2025/11/13
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