专利名称:一种高纯度硫酸软骨素的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种制备高纯度硫酸软骨素的方法，具体涉及到一种直接从软骨酶解液中分离纯化硫酸软骨素的方法。
背景技术：
硫酸软骨素(Chondroitin Sulfate, CS)是广泛分布于动物软骨组织中的一类酸性黏多糖。其分子结构为由D-葡萄糖醛酸和N-乙酰氨基半乳糖构成的重复二糖单位组成的多糖。临床上主要用于防治神经痛、神经性偏头痛 、关节炎、肩关节痛、腹腔手术后疼痛、冠心病、心绞痛和心肌梗塞等，对于链霉素引起的听觉障碍和各种噪声引起的听觉困难、耳鸣等症的预防和治疗也有良好的疗效。
我国是一个农业大国，畜牧业发达，生产硫酸软骨素的原料来源广泛、种类丰富。传统的生产工艺主要采用酶解法或碱提酶解法提取硫酸软骨素，经乙醇沉淀得到硫酸软骨素粗品。然后，再采用氧化水解法(张志斌，硫酸软骨素生产新酶解法工艺，2010，27(4) :98)、乙醇分级沉淀法(刘安军等，牛喉管软骨多糖的提取及其化学组成分析，2009，25(11) :1315-1319)、等电点法(陈丹青，黄鳝骨硫酸软骨素提取纯化的初步研究，2008，20 =1075-1079,1034)、树脂吸附法(张国志，200810000635. 6)等对粗品进行纯化；最后，经第二次醇沉，得到硫酸软骨素。其中，前三种精制方法操作繁琐，产品收率较低，产品中杂蛋白的含量较高；而树脂吸附法虽然产品质量较好，但仍以硫酸软骨素粗品为原料，存在乙醇消耗量大，生产成本较高等缺点。宋加宾等则采用强碱性阴离子交换树脂从酶解液中分离纯化硫酸软骨素(200510085564. O)，由于硫酸软骨素分子量大(10000-50000D)，要求吸附树脂具有特殊的大孔结构，选择性较差，洗脱也困难，因此，产品的纯度和收率均不高，而且洗脱使用的NaCl用量大，污染较严重，不适于工业化大生产。
离子交换技术是利用离子交换剂与不同离子之间结合能力的差异，将溶液中的某些离子吸附在交换剂上，而不能被吸附的物质被直接洗脱下来，从而达到分离、提纯的目的。离子交换树脂无毒性且可反复使用，该方法少用或不用有机溶剂，具有选择性好、设备简单、操作方便等优点。超滤技术是通过膜表面的微孔结构实现对大、小分子的分离、浓缩和净化。操作条件温和、无成分破坏、能耗低、操作简便。以上两种技术已广泛应用于生物活性成分的分离。
采用阳离子交换树脂，并结合超滤可实现从软骨酶解液中直接分离纯化硫酸软骨素，经一步醇沉，即可得到高纯度的硫酸软骨素。此法目前还未见报道，是一种分离纯化硫酸软骨素的新方法，将有利于促进传统生产工艺的改造，并推动我国动物提取物行业的可持续性发展。
发明内容
本发明的目的在于解决传统硫酸软骨素生产工艺中存在的乙醇用量大、产品纯度不高、杂蛋白含量较高等问题，提供一种高收率、低能耗、操作简便的高纯度硫酸软骨素的制备方法。
为实现上述发明目的，本发明具体采用如下技术方案
一种硫酸软骨 素的制备方法，包括如下步骤将动物软骨煮软、酶解，过滤得到酶解液；酶解液经超滤浓缩得到一次浓缩液，将一次浓缩液通过阳离子交换树脂，收集流出液，然后用水洗涤阳离子交换树脂，收集并合并流出液，流出液经超滤浓缩得到二次浓缩液，二次浓缩液经醇沉、脱水、干燥得硫酸软骨素。
进一步，本发明所述的阳离子交换树脂选自下列之一 DK110，D113，732，HD_8，HZ-016, DOOI, D061, D152, PCR642Ca 或 C150s,优选下列之一 DK110, D113, HD-8，PCR642Ca或 C150s。
进一步，所述的阳离子交换树脂的体积为一次浓缩液体积的O. I 10倍，优选为I 5倍。所述的一次浓缩液通过阳离子交换树脂的流速为O. I 10BV/h，优选为I 6BV/h0
进一步，所述的水通过阳离子交换树脂的流速为O. I 15BV/h，优选为I IOBV/h ;所需水量为2 10倍的阳离子交换树脂体积。
进一步，所述的酶解液经超滤浓缩至硫酸软骨素的质量浓度为I 20%，优选为5 15% ;所用超滤膜的截留分子量为3000-8000。
进一步，所述的流出液经超滤浓缩至硫酸软骨素的质量浓度为I 30%，优选为5 20% ;所用超滤膜的截留分子量为1000-3000。
进一步，所述的醇沉中，优选使用体积分数为95%的乙醇，体积分数为95%的乙醇与二次浓缩液的混合体积比为2 10 I，优选为2 5 I。
本发明所述的酶解过程中使用的酶为胰蛋白酶。
本发明所述的超滤采用中空纤维超滤器和卷式超滤器。
本发明具体推荐所述的硫酸软骨素的制备方法按照以下步骤进行将动物软骨煮软后，用胰蛋白酶酶解，过滤得到酶解液；用截留分子量为3000-8000的超滤膜将酶解液超滤浓缩至硫酸软骨素的质量浓度为I 20%，将所得的一次浓缩液以O. I 10BV/h的流速通过阳离子交换树脂，收集流出液，所述的阳离子交换树脂的体积为一次浓缩液体积的O. I 10倍；然后用2 10倍于阳离子交换树脂体积的水以O. I 15BV/h的流速洗涤树脂，收集并合并流出液；用截留分子量为1000-3000的超滤膜将流出液超滤浓缩至硫酸软骨素的质量浓度为I 30%，得二次浓缩液，再加入二次浓缩液体积的2 10倍的体积分数95%的乙醇进行醇沉、脱水、干燥后得硫酸软骨素；所述的阳离子树脂为下列之一DK110, D113, HD-8,732, HZ-016, DOOI, D061, D152, PCR642Ca 或 C150s。
本发明采用阳离子交换树脂，并结合超滤技术高效分离硫酸软骨素，与现有技术相比，其有益效果体现在
(I)可实现从软骨酶解液中直接高效分离硫酸软骨素，替代了传统工艺中一次乙醇沉淀粗多糖和氧化水解或吸附除杂蛋白的生产工序，简化了生产流程，大大削减了乙醇
消耗量。
(2)工艺条件温和，有效提高了产品的纯度和收率。例如以猪喉骨为原料，采用本发明方法制备硫酸软骨素，与酶解-氧化水解法(张志斌，2010)相比，可使产品含量从98. 2%提高至98. 5%，杂蛋白含量从2. 6%降低至2. I %，收率从16. 6%提高至17. 5%。以猪鼻骨为原料，采用本发明方法制备硫酸软骨素，与酶解-阴离子交换树脂法(宋加宾等，200510085564. O)相比，可使产品含量从87. 5 %提高至99 %，杂蛋白含量仅为2.0%。
(3)树脂脱色效果良好，革除了过氧化氢等脱色剂的使用，产品更安全。
(4)能耗低，并降低了生产成本，操作简单，便于大规模工业化生产。
综上，本发明方法具有选择性好、产品纯度和收率高、能耗和乙醇消耗量低、工艺条件温和、操作简单等优点。硫酸软骨素能广泛应用于医药、食品和化妆品等领域，具有良好的市场应用前景。
具体实施方式
以下以具体实施例来说明本发明的技术方案，但本发明的保护范围不限于此。
以下实施例中所述硫酸软骨素的检测条件及计算方法为
产品的定性和定量分析以市售的硫酸软骨素标准品为对照，进行高效液相色谱分析，出峰时间与标准品基本一致。产品中硫酸软骨素的质量是以硫酸软骨素标准品绘制的标准曲线(峰面积与浓度之间的关系)计算。
以下实施例中所述产品中硫酸软骨素的收率)=产品中硫酸软骨素的质量/动物软骨的质量Xioo ;所述产品中硫酸软骨素的含量)=产品中硫酸软骨素的质量/广品质量(干品)X100 ;所述广品中杂蛋白的含量(*% )=广品中蛋白质的质量/广品质量(干品)X100。
实施例I
I)取20Kg猪鼻骨(含水量12%)，加400L水，4KgNaCl，升温至100°C，保温2h;自然冷却至45°C _48°C，用质量浓度为40%的NaOH溶液调节pH至9.0，加300g胰蛋白酶酶解6h，酶解结束后升温至70°C，搅拌30min，过滤，得400L酶解液；
2)将酶解液自然降温至40°C，用6mol/L的盐酸溶液调节pH至7. 0-8. 0，在工作压力O. 15MPa下，用中空纤维超滤器进行超滤浓缩，截留分子量为3000，得68L浓缩液；
3)将68L浓缩液以I. OBV/h的流速通过体积为68L的DKllO型阳离子交换树脂，收集流出液；然后用272L水以2. OBV/h的流速洗涤阳离子交换树脂；
4)合并流出液，用质量浓度为40%的NaOH溶液调节pH至7. 0-8.0，在工作压力O. 5MPa下，用卷式超滤器进行超滤浓缩，截留分子量为3000，得34L 二次浓缩液；
5)往34L二次浓缩液中加入102L 95%的乙醇，边搅拌边醇沉，然后，用20L95%的乙醇脱水两次，80°C真空干燥4h，得硫酸软骨素产品3. 38Kg。经检测，产品中硫酸软骨素的含量为97%，杂蛋白的含量为2.5%，收率为16.4%。
实施例2
I)同实施例I
2)将酶解液自然降温至40°C，用6mol/L的盐酸溶液调节pH至7. 0-8. 0，在工作压力O. 15MPa下，用中空纤维超滤器进行超滤浓缩，截留分子量为5000，得33L浓缩液；
3)将33L浓缩液以2. OBV/h的流速通过体积为66L的HD_8型阳离子交换树脂，收集流出液；然后用132L水以3. OBV/h的流速洗涤阳离子交换树脂；
4)合并流出液，用质量浓度为40%的NaOH溶液调节pH至7. 0-8.0，在工作压力O. 5MPa下，用卷式超滤器进行超滤浓缩，截留分子量为2000，得22L 二次浓缩液；[0039]5)往22L 二次浓缩液中加入66L 95%的乙醇，边搅拌边醇沉，然后，用20L95%的乙醇脱水两次，80°C真空干燥4h，得硫酸软骨素产品3. 30Kg。经检测，产品中硫酸软骨素的含量为97%，杂蛋白的含量为2.2%，收率为16.0%。
实施例3
I)同实施例I
2)将酶解液自然降温至40°C，用6mol/L的盐酸溶液调节pH至7. 0-8. 0，在工作压力O. 15MPa下，用中空纤维超滤器进行 超滤浓缩，截留分子量为6000，得41L浓缩液；
3)将41L浓缩液以O. 5BV/h的流速通过体积为123L的C150s型阳离子交换树脂，收集流出液；然后用492L水以O. lBV/h的流速洗涤阳离子交换树脂；
4)合并流出液，用质量浓度为40%的NaOH溶液调节pH至7. 0-8.0，在工作压力O. 5MPa下，用卷式超滤器进行超滤浓缩，截留分子量为3000，得22L 二次浓缩液；
5)往22L二次浓缩液中加入IlOL 95%的乙醇，边搅拌边醇沉，然后，用20L95%的乙醇脱水两次，80°C真空干燥4h，得硫酸软骨素产品3. 27Kg。经检测，产品中硫酸软骨素的含量为99%，杂蛋白的含量为2.0%，收率为16.2%。
实施例4
I)同实施例I
2)将酶解液自然降温至40°C，用6mol/L的盐酸溶液调节pH至7. 0-8. 0，在工作压力O. 15MPa下，用中空纤维超滤器进行超滤浓缩，截留分子量为3000，得43L浓缩液；
3)将43L浓缩液以6BV/h的流速通过体积为22L的HZ-016型阳离子交换树脂，收集流出液；然后用132L水以5BV/h的流速洗涤阳离子交换树脂；
4)合并流出液，用质量浓度为40%的NaOH溶液调节pH至7. 0-8.0，在工作压力O. 5MPa下，用卷式超滤器进行超滤浓缩，截留分子量为1000，得35L 二次浓缩液；
5)往35L二次浓缩液中加入280L 95%的乙醇，边搅拌边醇沉，然后，用20L95%的乙醇脱水两次，80°C真空干燥4h，得硫酸软骨素产品3. 48Kg。经检测，产品中硫酸软骨素的含量为95%，杂蛋白的含量为2.8%，收率为16.5%。
实施例5
I)同实施例I
2)将酶解液自然降温至40°C，用6mol/L的盐酸溶液调节pH至7. 0-8. 0，在工作压力O. 15MPa下，用中空纤维超滤器进行超滤浓缩，截留分子量为5000，得172L浓缩液；
3)将172L浓缩液以8BV/h的流速通过体积为344L的DOOl型阳离子交换树脂，收集流出液；然后用1376L水以10BV/h的流速洗涤阳离子交换树脂；
4)合并流出液，用质量浓度为40%的NaOH溶液调节pH至7. 0-8.0，在工作压力O. 5MPa下，用卷式超滤器进行超滤浓缩，截留分子量为2000，得69L 二次浓缩液；
5)往69L二次浓缩液中加入345L 95%的乙醇，边搅拌边醇沉，然后，用20L95%的乙醇脱水两次，80°C真空干燥4h，得硫酸软骨素产品3. 44Kg。经检测，产品中硫酸软骨素的含量为94%，杂蛋白的含量为2.9%，收率为16.2%。
实施例6
I)同实施例I
2)将酶解液自然降温至40°C，用6mol/L的盐酸溶液调节pH至7. 0-8. 0，在工作压力O. 15MPa下，用中空纤维超滤器进行超滤浓缩，截留分子量为7000，得68L浓缩液；
3)将68L浓缩液以I. OBV/h的流速通过体积为204L的D061型阳离子交换树脂，收集流出液；然后用408L水以I. OBV/h的流速洗涤阳离子交换树脂；
4)合并流出液，用质量浓度为40%的NaOH溶液调节pH至7. 0-8.0，在工作压力O. 5MPa下，用卷式超滤器进行超滤浓缩，截留分子量为3000，得23L 二次浓缩液；
5)往23L 二次浓缩液中加入69L 95%的乙醇，边搅拌边醇沉，然后，用20L95%的乙醇脱水两次，80°C真空干燥4h，得硫酸软骨素产品3. 41Kg。经检测，产品中硫酸软骨素的含量为94%，杂蛋白的含量为2.5%，收率为16. I %。
实施例7
I)同实施例I
2)将酶解液自然降温至40°C，用6mol/L的盐酸溶液调节pH至7. 0-8. 0，在工作压力O. 15MPa下，用中空纤维超滤器进行超滤浓缩，截留分子量为6000，得183L浓缩液；
3)将183L浓缩液以10BV/h的流速通过体积为18L的732型阳离子交换树脂，收集流出液；然后用146L水以15BV/h的流速洗涤阳离子交换树脂；
4)合并流出液，用质量浓度为40%的NaOH溶液调节pH至7. 0-8.0，在工作压力O. 5MPa下，用卷式超滤器进行超滤浓缩，截留分子量为1000，得12L 二次浓缩液；
5)往12L二次浓缩液中加入120L 95%的乙醇，边搅拌边醇沉，然后，用20L95%的乙醇脱水两次，80°C真空干燥4h，得硫酸软骨素产品3. 65Kg。经检测，产品中硫酸软骨素的含量为92%，杂蛋白的含量为3. 1%，收率为16.8%。
实施例8
I)取20Kg猪喉骨(含水量10% )，加400L水，4KgNaCl，升温至100°C，保温2h ;自然冷却至45°C _48°C，用质量浓度为40%的NaOH溶液调节pH至9.0，加300g胰蛋白酶酶解6h，酶解结束后升温至70°C，搅拌30min，过滤，得400L酶解液；
2)将酶解液自然降温至40°C，用6mol/L的盐酸溶液调节pH至7. 0-8. 0，在工作压力O. 15MPa下，用中空纤维超滤器进行超滤浓缩，截留分子量为7000，得24L浓缩液；
3)将24L浓缩液以2. OBV/h的流速通过体积为120L的D152型阳离子交换树脂，收集流出液；然后用720L水以I. OBV/h的流速洗涤阳离子交换树脂；
4)合并流出液，用质量浓度为40%的NaOH溶液调节pH至7. 0-8.0，在工作压力0. 5MPa下，用卷式超滤器进行超滤浓缩，截留分子量为2000，得71L 二次浓缩液；
5)往71L二次浓缩液中加入284L 95%的乙醇，边搅拌边醇沉，然后，用20L95%的乙醇脱水两次，80°C真空干燥4h，得硫酸软骨素产品3. 55Kg。经检测，产品中硫酸软骨素的含量为98. 5%，杂蛋白的含量为2. 1%，收率为17.5%。
实施例9
I)取20Kg鲨鱼骨(含水量7%),JjP 400L水，4KgNaCl，升温至100。。，保温2h ；自然冷却至45°C _48°C，用质量浓度为40%的NaOH溶液调节pH至9.0，加300g胰蛋白酶酶解6h，酶解结束后升温至70°C，搅拌30min，过滤，得400L酶解液；
2)将酶解液自然降温至40°C，用6mol/L的盐酸溶液调节pH至7. 0-8. 0，在工作压力0. 15MPa下，用中空纤维超滤器进行超滤浓缩，截留分子量为8000，得40L浓缩液；
3)将40L浓缩液以0. 5BV/h的流速通过体积为120L的HD-8型阳离子交换树脂，收集流出液；然后用1200L水以2. OBV/h的流速洗涤阳离子交换树脂；
4)合并流出液，用质量浓度为40%的NaOH溶液调节pH至7. 0-8.0，在工作压力O. 5MPa下，用卷式超滤器进行超滤浓缩，截留分子量为3000，得60L 二次浓缩液；
5)往60L二次浓缩液中加入240L 95%的乙醇，边搅拌边醇沉，然后，用20L95%的乙醇脱水两次，80°C真空干燥4h，得硫酸软骨素产品5. 96Kg。经检测，产品中硫酸软骨素的含量为99%，杂蛋白的含量为1.2%，收率为29.5%。
实施例10
I)同实施例9
2)将酶解液自然降温至40°C，用6mol/L的盐酸溶液调节pH至7. 0-8. 0，在工作压
力O. 15MPa下，用中空纤维超滤器进行超滤浓缩，截留分子量为5000，得77L浓缩液；
3)将77L浓缩液以2. OBV/h的流速通过体积为77L的PCR642Ca型阳离子交换树月旨，收集流出液；然后用154L水以3. OBV/h的流速洗涤阳离子交换树脂；
4)合并流出液，用质量浓度为40%的NaOH溶液调节pH至7. 0-8.0，在工作压力O. 5MPa下，用卷式超滤器进行超滤浓缩，截留分子量为2000，得31L 二次浓缩液；
5)往31L二次浓缩液中加入124L 95%的乙醇，边搅拌边醇沉，然后，用20L95%的乙醇脱水两次，80°C真空干燥4h，得硫酸软骨素产品6. 12Kg。经检测，产品中硫酸软骨素的含量为97%，杂蛋白的含量为1.7%，收率为29.7%。
实施例11
I)同实施例9
2)将酶解液自然降温至40°C，用6mol/L的盐酸溶液调节pH至7. 0-8. 0，在工作压力O. 15MPa下，用中空纤维超滤器进行超滤浓缩，截留分子量为6000，得31L浓缩液；
3)将31L浓缩液以I. OBV/h的流速通过体积为310L的C150s型阳离子交换树脂，收集流出液；然后用1240L水以5. OBV/h的流速洗涤阳离子交换树脂；
4)合并流出液，用质量浓度为40%的NaOH溶液调节pH至7. 0-8.0，在工作压力0. 5MPa下，用卷式超滤器进行超滤浓缩，截留分子量为1000，得31L 二次浓缩液；
5)往31L二次浓缩液中加入248L 95%的乙醇，边搅拌边醇沉，然后，用20L95%的乙醇脱水两次，80°C真空干燥4h，得硫酸软骨素产品6. 19Kg。经检测，产品中硫酸软骨素的含量为97%，杂蛋白的含量为1.8%，收率为30.0%。
实施例12
I)取20Kg牛气管(含水量18%)，加400L水，4KgNaCl，升温至100°C，保温2h;自然冷却至45°C -48°C，用质量浓度为40%的NaOH溶液调节pH至9.0，加300g胰蛋白酶酶解6h，酶解结束后升温至70°C，搅拌30min，过滤，得400L酶解液；
2)将酶解液自然降温至40°C，用6mol/L的盐酸溶液调节pH至7. 0-8. 0，在工作压力0. 15MPa下，用中空纤维超滤器进行超滤浓缩，截留分子量为8000，得51L浓缩液；
3)将5IL浓缩液以0. lBV/h的流速通过体积为255L的PCR642Ca型阳离子交换树月旨，收集流出液；然后用1530L水以0. 5BV/h的流速洗涤阳离子交换树脂；
4)合并流出液，用质量浓度为40%的NaOH溶液调节pH至7. 0-8.0，在工作压力0. 5MPa下，用卷式超滤器进行超滤浓缩，截留分子量为2000，得51L 二次浓缩液；
5)往51L二次浓缩液中加入153L 95%的乙醇，边搅拌边醇沉，然后，用20L95%的乙醇脱水两次，80°C真空干燥4h，得硫酸软骨素产品2. 57Kg。经检测，产品中硫酸软骨素的含量为94%，杂蛋白的含量为2.4%，收率为12. I %。
实施例13
I)取20Kg牛鼻骨(含水量25% )，加400L水，4KgNaCl，升温至100°C，保温2h;自然冷却至45°C _48°C，用质量浓度为40%的NaOH溶液调节pH至9.0，加300g胰蛋白酶酶解6h，酶解结束后升温至70°C，搅拌30min，过滤，得400L酶解液；
2)将酶解液自然降温至40°C，用6mol/L的盐酸溶液调节pH至7. 0-8. 0，在工作压力O. 15MPa下，用中空纤维超滤器进行超滤浓缩，截留分子量为7000，得42L浓缩液；
3)将42L浓缩液以2. OBV/h的流速通过体积为336L的C150s型阳离子交换树脂，收集流出液；然后用1344L水以2. OBV/h的流速洗涤阳离子交换树脂；
4)合并流出液，用质量浓度为40%的NaOH溶液调节pH至7. 0-8.0，在工作压力O. 5MPa下，用卷式超滤器进行超滤浓缩，截留分子量为2000，得33L 二次浓缩液；
5)往33L 二次浓缩液中加入66L 95%的乙醇，边搅拌边醇沉，然后，用20L95%的乙醇脱水两次，80°C真空干燥4h，得硫酸软骨素产品3. 33Kg。经检测，产品中硫酸软骨素的含量为98%，杂蛋白的含量为2.2%，收率为16.3%。
实施例14
I)同实施例13
2)将酶解液自然降温至40°C，用6mol/L的盐酸溶液调节pH至7. 0-8. 0，在工作压力O. 15MPa下，用中空纤维超滤器进行超滤浓缩，截留分子量为3000，得34L浓缩液；
3)将34L浓缩液以6. OBV/h的流速通过体积为68L的D113型阳离子交换树脂，收集流出液；然后用680L水以3. OBV/h的流速洗涤阳离子交换树脂；
4)合并流出液，用质量浓度为40%的NaOH溶液调节pH至7. 0-8.0，在工作压力O. 5MPa下，用卷式超滤器进行超滤浓缩，截留分子量为1000，得34L 二次浓缩液；
5)往34L二次浓缩液中加入102L 95%的乙醇，边搅拌边醇沉，然后，用20L95%的乙醇脱水两次，80°C真空干燥4h，得硫酸软骨素产品3. 41Kg。经检测，产品中硫酸软骨素的含量为98%，杂蛋白的含量为2.2%，收率为16.7%。
实施例15
I)取20Kg鸡胸骨(含水量43% )，加400L水，4KgNaCl，升温至100°C，保温2h;自然冷却至45°C _48°C，用质量浓度为40%的NaOH溶液调节pH至9.0，加300g胰蛋白酶酶解6h，酶解结束后升温至70°C，搅拌30min，过滤，得400L酶解液；
2)将酶解液自然降温至40°C，用6mol/L的盐酸溶液调节pH至7. 0-8.0，在工作压力O. 15MPa下，用中空纤维超滤器进行超滤浓缩，截留分子量为5000，得206L浓缩液；
3)将206L浓缩液以2. OBV/h的流速通过体积为206L的DK110型阳离子交换树月旨，收集流出液；然后用1236L水以2. 0BV/h的流速洗涤阳离子交换树脂；
4)合并流出液，用质量浓度为40%的NaOH溶液调节pH至7. 0-8.0，在工作压力0. 5MPa下用卷式超滤器进行超滤浓缩，截留分子量为3000，得206L 二次浓缩液；
5)往206L 二次浓缩液中加入412L 95%的乙醇，边搅拌边醇沉，然后，用20L95%的乙醇脱水两次，80°C真空干燥4h，得硫酸软骨素产品2. 06Kg。经检测，产品中硫酸软骨素的含量为98%，杂蛋白的含量为1.9%，收率为10. I %。
权利要求
1.一种硫酸软骨素的制备方法，包括如下步骤将动物软骨煮软、酶解，过滤得到酶解液；酶解液经超滤浓缩得到一次浓缩液，将一次浓缩液通过阳离子交换树脂，收集流出液，然后用水洗涤阳离子交换树脂，收集并合并流出液，流出液经超滤浓缩得到二次浓缩液，二次浓缩液经醇沉、脱水、干燥得硫酸软骨素。
2.如权利要求
I所述的硫酸软骨素的制备方法，其特征在于所述的阳离子交换树脂为下列之一 DK110, D113，732，HD-8，HZ-016, D001, D061, D152, PCR642Ca 或 C150s。
3.如权利要求
I或2所述的硫酸软骨素的制备方法，其特征在于所述的阳离子交换树脂的体积为一次浓缩液体积的0. rio倍。
4.如权利要求
3所述的硫酸软骨素的制备方法，其特征在于所述的一次浓缩液通过阳离子交换树脂的流速为0. f 10BV/h。
5.如权利要求
I所述的硫酸软骨素的制备方法，其特征在于所述的水通过阳离子交换树脂的流速为0. ri5BV/h ;所需水量为2 10倍阳离子交换树脂体积。
6.如权利要求
I所述的硫酸软骨素的制备方法，其特征在于所述的酶解液经超滤浓缩至硫酸软骨素的质量浓度为广20% ;所用超滤膜的截留分子量为3000-8000。
7.如权利要求
I所述的硫酸软骨素的制备方法，其特征在于所述的流出液经超滤浓缩至硫酸软骨素的质量浓度为广30% ;所用超滤膜的截留分子量为1000-3000。
8.如权利要求
I所述的硫酸软骨素的制备方法，其特征在于所述的醇沉中，体积分数为95%的乙醇与二次浓缩液的混合体积比为2 10 :1。
9.如权利要求
I所述的硫酸软骨素的制备方法，其特征在于所述的方法按照以下步骤进行将动物软骨煮软后，用胰蛋白酶酶解，过滤得到酶解液；用截留分子量为3000-8000的超滤膜将酶解液超滤浓缩至硫酸软骨素的质量浓度为广20%，将所得的一次浓缩液以·0.riOBV/h的流速通过阳离子交换树脂，收集流出液，所述的阳离子交换树脂的体积为一次浓缩液体积的0. no倍；然后用2 10倍于阳离子交换树脂体积的水以0. ri5BV/h的流速洗涤树脂，收集并合并流出液；用截留分子量为1000-3000的超滤膜将流出液超滤浓缩至硫酸软骨素的质量浓度为广30%，得二次浓缩液，再加入二次浓缩液体积的2 10倍的体积分数95%的乙醇进行醇沉、脱水、干燥后得硫酸软骨素；所述的阳离子树脂为下列之一DK110, D113, HD-8,732, HZ-016, D001, D061, D152, PCR642Ca 或 C150s。
专利摘要
本发明公开了一种硫酸软骨素的制备方法，包括如下步骤将动物软骨煮软、酶解，过滤得到酶解液；酶解液经超滤浓缩得到一次浓缩液，将一次浓缩液通过阳离子交换树脂，收集流出液，然后用水洗涤阳离子交换树脂，收集并合并流出液，流出液经超滤浓缩得到二次浓缩液，二次浓缩液经醇沉、脱水、干燥得硫酸软骨素。本发明方法具有选择性好、产品纯度和收率高、能耗和乙醇消耗量低、工艺条件温和、操作简单等优点。
文档编号C08B37/08GKCN102093490 B发布类型授权 专利申请号CN 201010607145
公开日2012年11月14日 申请日期2010年12月27日
发明者刘文明, 朱兴一, 王平, 王清荣, 罗小芳, 苏为科, 谢捷 申请人:嘉兴恒杰生物制药有限公司, 浙江工业大学导出引文BiBTeX, EndNote, RefMan专利引用 (1),