Usp8基因检测物在制备acth型垂体腺瘤分子病理诊断及分型产品中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物技术领域，尤其涉及USP8基因检测物在制备ACTH型垂体腺瘤分 子病理诊断及分型产品中的应用。
【背景技术】
[0002] 垂体瘤（Pituitaryadenomas)是人体最常见的神经内分泌性肿瘤，也是最常见的 脑肿瘤之一（发病率占第2位）。按其不同的内分泌特性，可分为泌乳素型、生长激素型、促 肾上腺皮质激素型，促甲状腺激素型、无激素型以及混合型等若干亚型。肿瘤通过异常分泌 各种激素，导致患者出现不孕不育、肢端肥大、Cushing综合症、甲亢等显著的内分泌紊乱症 状。垂体瘤发病隐匿，生长缓慢，当患者出现临床症状前往就诊时，肿瘤往往已体积巨大，呈 侵袭性生长，压迫邻近重要解剖结构，导致患者出现垂体功能低下、双眼视力下降和颅神经 麻痹等神经功能缺失症状，严重影响患者的生活质量，甚至危及生命。
[0003] 促肾上腺皮质激素（ACTH)型垂体腺瘤系由垂体腺中的促肾上腺皮质激素细胞分 泌大量的ACTH，促进肾上腺分泌大量的皮质醇，最终导致内源性血皮质醇增多症，继而产生 一系列的代谢紊乱和病理变化，特称之为库欣病（Cushing's diease)，数量占ACTH依赖性 库欣综合征的85%。库欣病是一种严重的内分泌疾病，极少自行缓解，若不及时诊治，病死 率很高。该病患者主要表现为向心性肥胖，高血压，心血管疾病，代谢紊乱综合征，骨质疏松 等。虽然库欣病的分子发病机制已被广泛研究，但ACTH产生过剩的致病遗传机制仍然不明 确。目前垂体瘤的临床治疗以手术切除为主，药物和立体定向放疗为辅，但只有少数患者通 过这些方法获得治愈！大多数经治病例在较短的症状缓解期后出现肿瘤复发。因此临床 上噬待新的治疗方法。此外，发现ACTH型垂体腺瘤可呈现截然不同的影像学表现及临床 表型：部分肿瘤体积微小，且病灶呈弥散状分布，手术前定位非常困难；而部分肿瘤体积巨 大，同时向周边侵袭性生长，手术中极难获得肿瘤全切除。推测它们可能分属于ACTH型垂 体瘤两种不同的亚型，对其应该采取不同的临床治疗策略。目前尚无特异性的分子诊断标 记物可将它们进行鉴别诊断。
【发明内容】
[0004] 本发明的一个目的是提供用于检测待测ACTH型垂体腺瘤患者肿瘤亚型的试剂 盒。
[0005] 本发明提供的试剂盒，包括记载检测标准的比对卡和测序仪；
[0006] 所述检测标准如下：
[0007] 若待测ACTH型垂体腺瘤患者肿瘤中USP8基因全长或其部分片段序列与USP8基 因野生型全长序列或对应部分片段序列不一致，则待测ACTH型垂体腺瘤患者肿瘤为或候 选为ACTH型垂体腺瘤突变型；若待测ACTH型垂体腺瘤患者肿瘤中USP8基因全长或其部分 片段序列与所述USP8基因野生型全长序列或对应部分片段序列一致，则待测ACTH型垂体 腺瘤患者肿瘤为或候选为ACTH型垂体腺瘤野生型；
[0008] 所述USP8基因野生型序列为序列表中序列1。
[0009] 上述试剂盒还包括用于扩增USP8基因全长或其部分片段的成套引物；
[0010] 所述成套引物由引物对1、引物对2和引物对3组成；
[0011] 上述引物或引物对或其中各条引物均独立包装，各个引物对单独使用。
[0012] 所述引物对1由序列表中序列2所示的单链DNA分子和序列表中序列3所示的单 链DNA分子组成；
[0013] 所述引物对2由序列表中序列4所示的单链DNA分子和序列表中序列5所示的单 链DNA分子组成；
[0014] 所述引物对3由序列表中序列6所示的单链DNA分子和序列表中序列7所示的单 链DNA分子组成。
[0015] 本发明另一个目的是提供一种用于助检测待测ACTH型垂体腺瘤患者肿瘤亚型的 成套引物。
[0016] 本发明提供的成套引物，由引物对1、引物对2和引物对3组成；
[0017] 所述引物对1由序列表中序列2所示的单链DNA分子和序列表中序列3所示的单 链DNA分子组成；
[0018] 所述引物对2由序列表中序列4所示的单链DNA分子和序列表中序列5所示的单 链DNA分子组成；
[0019] 所述引物对3由序列表中序列6所示的单链DNA分子和序列表中序列7所示的单 链DNA分子组成。
[0020] 上述试剂盒或上述的成套引物在制备检测或辅助检测待测ACTH型垂体腺瘤患者 肿瘤亚型的产品中的应用也是本发明保护的范围。
[0021] 本发明的第三个目的是提供用于辅助检测待测垂体腺瘤患者肿瘤是否为ACTH型 的试剂盒。
[0022] 本发明提供的试剂盒，包括记载检测标准的比对卡和测序仪；
[0023] 所述检测标准如下：
[0024] 若待测垂体腺瘤患者肿瘤中USP8基因全长或其部分片段序列与USP8基因野生型 全长序列或对应部分片段序列不一致，则待测垂体腺瘤患者肿瘤候选为ACTH型垂体腺瘤； 若待测垂体腺瘤患者肿瘤中USP8基因全长或其部分片段序列与所述USP8基因野生型全长 序列或对应部分片段序列一致，则待测垂体腺瘤患者肿瘤候选为非ACTH型垂体腺瘤；
[0025] 所述USP8基因野生型序列为序列表中序列1。
[0026] 上述试剂盒还包括用于扩增USP8基因全长或其部分片段的成套引物；
[0027] 所述成套引物由引物对1、引物对2和引物对3组成；
[0028] 所述引物对1由序列表中序列2所示的单链DNA分子和序列表中序列3所示的单 链DNA分子组成；
[0029] 所述引物对2由序列表中序列4所示的单链DNA分子和序列表中序列5所示的单 链DNA分子组成；
[0030] 所述引物对3由序列表中序列6所示的单链DNA分子和序列表中序列7所示的单 链DNA分子组成。
[0031] 本发明第四个目的是提供一种辅助检测待测垂体腺瘤患者肿瘤是否为ACTH型的 成套引物。
[0032] 本发明提供的辅助检测待测垂体腺瘤患者肿瘤是否为ACTH型的成套引物，由引 物对1、引物对2和引物对3组成；
[0033] 所述引物对1由序列表中序列2所示的单链DNA分子和序列表中序列3所示的单 链DNA分子组成；
[0034] 所述引物对2由序列表中序列4所示的单链DNA分子和序列表中序列5所示的单 链DNA分子组成；
[0035] 所述引物对3由序列表中序列6所示的单链DNA分子和序列表中序列7所示的单 链DNA分子组成。
[0036] 上述试剂盒或上述的成套引物在制备辅助检测待测垂体腺瘤患者肿瘤是否为 ACTH型的产品中的应用也是本发明保护的范围。
[0037]ACTH垂体腺瘤的两种亚型：肿瘤直径大于等于1cm为野生亚型，肿瘤直径小于1cm 为突变亚型，突变亚型为USP8基因野生型发生突变得到的基因，具体突变方式如表3所示 17种。
[0038] 本发明的实验证明，USP8基因突变为ACTH型垂体腺瘤所特有，其他类型的垂体腺 瘤中未见该基因突变。ACTH垂体腺瘤可进一步分为两种亚型，即突变型（发生USP8基因突 变）和野生型（USP8基因无突变），前者平均体积偏小，侵袭度小；后组平均体积偏大，侵袭 度大。可以通过检测USP8基因是否突变判断AC