TH垂体腺瘤的不同亚型，也可以通过USP8 基因是否突变辅助判断垂体腺瘤是否为ACTH亚型，从而及时采取不同的临床治疗策略。
【具体实施方式】
[0039] 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0040] 下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0041] 实施例1、USP8基因是否突变在辅助鉴定ACTH型垂体腺瘤亚型中的应用
[0042] 对12例ACTH型垂体腺瘤的肿瘤与自身血样本DNA进行全外显子测序对比分析 (测序仪为IlluminaHiseq2500)，结果在8例肿瘤中出现USP8基因突变，肿瘤体积小，4 例肿瘤中USP8基因为野生型，肿瘤体积大；因此将ACTH垂体腺瘤分为两种亚型：直径大于 等于为野生亚型ACTH垂体腺瘤亚型，直径小于为突变亚型ACTH垂体腺瘤亚型。
[0043] 将12例样本经Sanger验证排除假阳性后，在另外108例ACTH型垂体腺瘤中进行 USP8基因基因型检测，共120例样本的检测方法具体如下：
[0044] 首先根据USP8基因（核苷酸序列为序列表中序列1)设计用于扩增其的引物对， 共3对引物对，每对引物对均能扩增USP8基因部分片段，引物对具体序列如下：
[0045] 引物对1:
[0046]IPrimerForward5,-ATTCACCCACCAACACTGTTCATA-3'（序列 2)
[0047]IPrimerReverse5,-TTGTTTTCCCGATTAACTGTTGGA-3'（序列 3)
[0048] 弓丨物对2:
[0049] 2PrimerForward5，-TCCATCTAAGTTTCTTGACCCAA-3'（序列 4)
[0050] 2PrimerReverse5,-TCCAACTCCCTGACACTAACA-3,（序列 5)
[0051] 引物对3:
[0052] 3PrimerForward5, -ATGTACCCACCGGAAATGGC-3,（序列 6)
[0053] 3Primer Reverse5，-CCTCAAAGGGAGATTCCGGG-3'（序列 7)
[0054] 以上述120例肿瘤患者肿瘤的基因组DNA为模板，分别用上述引物对1、引物对2 和引物对3进行PCR扩增，得到PCR扩增产物。
[0055] PCR扩增体系如表1所示：
[0056] 表1为扩增体系
[0057]
【主权项】
1. 用于检测待测ACTH型垂体腺瘤患者肿瘤亚型的试剂盒，包括记载检测标准的比对 卡和测序仪； 所述检测标准如下： 若待测ACTH型垂体腺瘤患者肿瘤中USP8基因全长或其部分片段序列与USP8基因野 生型全长序列或对应部分片段序列不一致，则待测ACTH型垂体腺瘤患者肿瘤为ACTH型垂 体腺瘤突变型或候选为ACTH型垂体腺瘤突变型；若待测ACTH型垂体腺瘤患者肿瘤中USP8 基因全长或其部分片段序列与所述USP8基因野生型全长序列或对应部分片段序列一致， 则待测ACTH型垂体腺瘤患者肿瘤为ACTH型垂体腺瘤野生型或候选为ACTH型垂体腺瘤野 生型； 所述USP8基因野生型序列为序列表中序列1。
2. 根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括用于扩增USP8基因 全长或其部分片段的成套引物； 所述成套引物由引物对1、引物对2和引物对3组成； 所述引物对1由序列表中序列2所示的单链DNA分子和序列表中序列3所示的单链 DNA分子组成； 所述引物对2由序列表中序列4所示的单链DNA分子和序列表中序列5所示的单链 DNA分子组成； 所述引物对3由序列表中序列6所示的单链DNA分子和序列表中序列7所示的单链 DNA分子组成。
3. -种用于辅助检测待测ACTH型垂体腺瘤患者肿瘤亚型的成套引物，由引物对1、引 物对2和引物对3组成； 所述引物对1由序列表中序列2所示的单链DNA分子和序列表中序列3所示的单链 DNA分子组成； 所述引物对2由序列表中序列4所示的单链DNA分子和序列表中序列5所示的单链 DNA分子组成； 所述引物对3由序列表中序列6所示的单链DNA分子和序列表中序列7所示的单链 DNA分子组成。
4. 权利要求1或2所述试剂盒或权利要求3所述的成套引物在制备检测或辅助检测待 测ACTH型垂体腺瘤患者肿瘤亚型的产品中的应用。
5. 用于辅助检测待测垂体腺瘤患者肿瘤是否为ACTH型的试剂盒，包括记载检测标准 的比对卡和测序仪； 所述检测标准如下： 若待测垂体腺瘤患者肿瘤中USP8基因全长或其部分片段序列与USP8基因野生型全长 序列或对应部分片段序列不一致，则待测垂体腺瘤患者肿瘤候选为ACTH型垂体腺瘤；若待 测垂体腺瘤患者肿瘤中USP8基因全长或其部分片段序列与所述USP8基因野生型全长序列 或对应部分片段序列一致，则待测垂体腺瘤患者肿瘤候选为非ACTH型垂体腺瘤； 所述USP8基因野生型序列为序列表中序列1。
6. 根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括用于扩增USP8基因 全长或其部分片段的成套引物； 所述成套引物由引物对1、引物对2和引物对3组成； 所述引物对1由序列表中序列2所示的单链DNA分子和序列表中序列3所示的单链 DNA分子组成； 所述引物对2由序列表中序列4所示的单链DNA分子和序列表中序列5所示的单链 DNA分子组成； 所述引物对3由序列表中序列6所示的单链DNA分子和序列表中序列7所示的单链 DNA分子组成。
7. -种辅助检测待测垂体腺瘤患者肿瘤是否为ACTH型的成套引物，由引物对1、引物 对2和引物对3组成； 所述引物对1由序列表中序列2所示的单链DNA分子和序列表中序列3所示的单链 DNA分子组成； 所述引物对2由序列表中序列4所示的单链DNA分子和序列表中序列5所示的单链 DNA分子组成； 所述引物对3由序列表中序列6所示的单链DNA分子和序列表中序列7所示的单链 DNA分子组成。
8. 权利要求4或5所述试剂盒或权利要求7所述的成套引物在制备辅助检测待测垂体 腺瘤患者肿瘤是否为ACTH型的产品中的应用。
【专利摘要】本发明公开了USP8基因检测物在制备ACTH型垂体腺瘤分子病理诊断及分型产品中的应用。本发明提供了用于检测待测ACTH型垂体腺瘤患者的ACTH型垂体腺瘤亚型的试剂盒，包括记载检测标准的比对卡和测序仪。本发明的实验证明，USP8基因突变为ACTH型垂体腺瘤所特有，其他类型的垂体腺瘤中未见该基因突变，故其可作为ACTH型垂体腺瘤一个特异性的分子病理诊断标记物。ACTH垂体腺瘤可进一步分为两种亚型，即突变型(发生USP8基因突变)和野生型(USP8基因无突变)，从而及时采取个体化的临床治疗策略。
【IPC分类】C12Q1-68, C12N15-11
【公开号】CN104593490
【申请号】CN201410831608
【发明人】赵曜, 师咏勇, 黄传新, 陈剑华, 马增翼, 宋智健, 王镛斐, 李士其, 周良辅, 张朝云, 叶红英, 寿雪飞, 沈明
【申请人】复旦大学附属华山医院, 上海交通大学
【公开日】2015年5月6日
【申请日】2014年12月23日