)。在由所述寡核苷酸约束的（bound by)、杂交和/或革巴向的一 部分第一外显子中，寡核苷酸的有效性和SF2/ASF、SC35、SRp40和SRp55结合位点的存在/ 不存在之间存在相关性。在优选的实施方式中，本发明因此提供寡核苷酸，其结合于、杂交 于、靶向和/或反向互补于用于SR蛋白质的结合位点。优选地，所述SR蛋白质是SF2/ASF 或SC35，SRp40或SRp55。在一个实施方式中，寡核苷酸结合于、杂交于、革El向和/或反向互 补于第一外显子中用于SF2/ASF、SC35、SRp40或SRp55蛋白质的结合位点和第二外显子中 用于不同的SF2/ASF、SC35、SRp40或SRp55蛋白质的结合位点。在更优选的实施方式中，寡 核苷酸结合于、杂交于、革G向和/或反向互补于第一外显子中用于SF2/ASF、SC35、SRp40或 SRp55蛋白质的结合位点和第二外显子中用于类似的SF2/ASF、SC35、SRp40或SRp55蛋白 质的相应结合位点。
[0052] 在一个实施方式中，通过使用能够结合、革El向存在于第一和/或第二外显子中 的调控RNA序列（需要其用于使转录本中的一个或多个所述外显子正确剪接）的寡核 苷酸，为患者提供功能性或半功能性蛋白质。需要几个顺式作用RNA序列用于转录本中 外显子的正确剪接。特别地，补充元件如外显子剪接增强子（ESE)被确定为调控组成型 (constitutive)和可替代的外显子的特异的和有效的剪接。使用包含结合到或能够结合 到所述第一和/或第二外显子中的补充元件之一的寡核苷酸的化合物，它们的调控功能受 到干扰使得外显子被跳读。因此，在一个优选的实施方式中，本发明的寡核苷酸能够结合到 来自前体mRNA的第一外显子的区域和相同前体mRNA内的第二外显子的区域，其中所述第 二外显子的所述区域具有与所述第一外显子的所述区域至少50%的同一性，其中所述寡核 苷酸能够诱导所述前体mRNA的所述第一和第二外显子的跳读；其中所述第一外显子的所 述区域和/或所述第二外显子的所述区域包括外显子剪接增强子（ESE)、外显子识别序列 (ERS)和/或剪接增强子序列（SES)，和/或其中所述寡核苷酸能够结合于、靶向、能够抑制 和/或反向互补于所述外显子剪接增强子（ESE)、外显子识别序列（ERS)和/或剪接增强子 序列（SES)。
[0053] 以下公开本发明的寡核苷酸的优选化学作用。
[0054] 寡核苷酸通常被称为具有类似于天然核酸的基本杂交特征的寡聚物。已在本发明 说明书的末尾处专用于限定的部分中限定杂交。在本申请中，可互换地使用术语寡核苷酸 和寡聚物。不同类型的核苷可以被用于产生本发明的所述寡核苷酸。相比于天然存在的基 于核糖核苷酸或脱氧核糖核苷酸的寡核苷酸，寡核苷酸可以包括至少一个修饰的核苷间键 和/或至少一种糖修饰和/或至少一种碱基修饰。
[0055] "修饰的核苷间键"是指存在RNA和DNA中天然存在的磷酸二酯的修饰版本。与 本发明相容的核苷间键修饰的实例是硫代磷酸酯（PS)、手性纯硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯 (PS2)、勝酰基乙酸醋（phosphonoacetate，PACE)、勝酰基乙酰胺（phosphonoacetamide， PACA)、硫代膦酰基乙酸酯、硫代膦酰基乙酰胺、硫代磷酸酯前药、H-膦酸酯、膦酸甲 酯、硫代膦酸甲酯、磷酸甲酯、硫代磷酸甲酯、磷酸乙酯、硫代磷酸乙酯、硼化磷酸酯 (boranophosphate)、硼化硫代磷酸醋（boranophosphorothioate)、硼化磷酸甲醋、硼化硫 代磷酸甲酯、硼化膦酸甲酯、硼化硫代膦酸甲酯和它们的衍生物。另一个修饰包括亚磷酰胺 (卩1108。110四111丨(1；^6)、氨基磷酸醋（磷酰胺41108。1101'03111丨(^七6)、吧'一？5'氨基磷酸醋、二 氨基磷酸醋（磷二酰胺，phosphorodiamidate)、硫代氨基磷酸醋、硫代二氨基磷酸醋、氨基 磺酸醋、二亚甲基砜、磺酸醋、亚甲基亚胺（methyleneimino, MMI)、草酰和硫代乙酰胺核酸 (TANA);和它们的衍生物。取决于它的长度，本发明的寡核苷酸可以包含1、2、3、4、5、6、7、 8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、 34、35、36、37、38或39个骨架修饰。在所述寡核苷酸中引入一个以上不同的骨架修饰也包 括在本发明内。
[0056] 还包括在本发明内的是包含核苷间键的寡核苷酸，当相比于天然存在的核苷间键 时，其关于彼此连接的核苷原子可以是不同的。在这方面，本发明的寡核苷酸可以包括至少 一个解释为3' -3'、5' -5'、2' -3'、2' -5'、2' -2'连接单体的核苷间键。位置编号可不同于其 他化学体，但该想法保持在本发明的范围内。
[0057] 在一个实施方式中，本发明的寡核苷酸包含至少一个硫代磷酸酯修饰。在更优选 的实施方式中，本发明的寡核苷酸是完全硫代磷酸酯修饰的。
[0058] "糖修饰"是指存在RNA和DNA中作为天然存在的核糖基部分的修饰版本（即呋 喃糖基部分），如二环糖、四氢吡喃、吗啉代、2' -修饰的糖、3' -修饰的糖、4' -修饰的糖、 5' -修饰的糖和4' -取代的糖。合适的糖修饰的实例包括但不限于，2' -0-修饰的RNA核 苷酸残基、如2' -O-烷基或2' -0-(取代的）烷基，例如2' -O-甲基、2' -0-(2-氰基乙基）、 2'-0-(2-甲氧基）乙基（2'-]\1(^)、2'-0 -(2-硫甲基）乙基、2'-0-丁醜基、2'-0 -块丙基、 2'-〇_條丙基、2'-〇-(2_氛基）丙基、2'-〇-(2_(二甲基氛基）丙基）、2'-〇-(3_氛基）丙 基、2'-〇-(3_(二甲基氛基）丙基）、2'-〇-(2_氛基）乙基、2'-〇-(3_狐基）丙基（如在专 利申请WO 2013/061295 中所描述的，金山大学（University of the Witwatersrand)，通过 引用将其全文结合于此），2'-0-(2-(二甲基氨基）乙基）；2'-0-(卤代烷氧基）甲基（Arai K.等人），例如2'-0-(2-氯乙氧基）甲基（MCEM)，2'-0-(2,2-二氯乙氧基）甲基（DCEM); 2'-0-烷氧基羰基，例如2'-0-[2-(甲氧羰基）乙基](MOCE)，2'-0-[2-(N-甲基氨基甲酰 基）乙基](MCE)，2'-0-[2-(N，N-二甲基氨基甲酰基）乙基](DMCE) ;2'-0_[甲基氨基羰 基]甲基；2'-叠氮基；2'-氨基和2'-取代的氨基；2'-卤基，例如2'-F，FANA (2'-F阿拉伯 糖基核酸）；碳环糖和氮杂糖修饰；3' -0-烷基，例如3' -0-甲基，3' -0- 丁酰基，3' -0-炔丙 基；2'，3' -二脱氧基；和它们的衍生物。
[0059] 另一种糖修饰包括"桥接"或"双环"核酸（BNA)修饰的糖部分，如在以下物质 中发现的：例如锁核酸（LNA)、xylo-LNA、a -L-LNA、β -D-LNA、cEt (2, -0, 4' -C 受限乙 基）LNA、cMOEt (2' -0, 4' -C受限甲氧基乙基）LNA、乙烯桥接核酸（ΕΝΑ)、BNANG[N-Me](如 在 Chem. Commun. 2007, 3765_3767Kazuyuki Miyashita 等人中所描述的，通过引用将其 全文结合于此）、CRN(如在专利申请WO 2013/036868 (Marina Biotech，通过引用将其 全文结合于此）中所描述的）；解锁核酸（UNA)或其他无环核苷（如在美国专利申请US 2013/0130378 (Alnylam Pharmaceuticals)中所描述的，通过引用将其全文结合于此）； 5'-甲基取代的BNA(如在美国专利申请13/530218中所描述的，其通过引用将其全文结 合于此）；环己烯基核酸（CeNA)、阿卓糖醇（altriol)核酸（ANA)、己糖醇核酸（HNA)、氟化 HNA (F-HNA)、吡喃-RNA (p-RNA)、3' -脱氧吡喃-DNA (p-DNA);或其他修饰的糖部分，如吗啉 代（PMO)、阳离子吗啉代（PMOPlus)、PM〇-X ;三环DNA ;三环-PS-DNA ;和它们的衍生物。BNA 衍生物是例如在WO 2011/097641中描述的，通过引用将其全文结合于此。PMO-X的实例是 在W02011150408中描述的，通过引用将其全文结合于此。取决于它的长度，本发明的寡核 苷酸可以包含 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、 25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39 或 40 个糖修饰。在所述寡核苷酸中引 入一个以上不同的糖修饰也包括在本发明中。
[0060] 在一个实施方式中，根据本发明的寡核苷酸包含选自以下的至少一种糖修饰： 2' -0-甲基、2' -0-(2-甲氧基）乙基、2' -F、吗啉代、桥接核苷酸或BNA，或者寡核苷酸包含桥 接核苷酸和2' -脱氧核糖核苷酸二者（BNA/DNA混合聚体（mixmers))。已示出包含2' -氟 代（2'-F)核苷酸的寡核苷酸能招募白细胞介素增强子结合因子2和3(ILF2/3)并且从而 能在被靶向的前体mRNA中诱导外显子跳读（Rigo F等人，W02011/097614)。
[0061] 在另一个实施方式中，如本文所限定的寡核苷酸包含LNA或其衍生物或由LNA或 其衍生物组成。更优选地，用选自以下的糖修饰在其全长上进行根据本发明的寡核苷酸： 2'-0-甲基、2'-0-(2-甲氧基）乙基、吗啉代、桥接核酸（BNA)或BNA/DNA混合聚体。在更 优选的实施方式中，本发明的寡核苷酸是被完全2' -0-甲基修饰的。
[0062] 在优选的实施方式中，本发明的寡核苷酸包含至少一种糖修饰和至少一个修饰的 核苷间键。此类修饰包括基于肽的核酸（肽核酸，PNA)、硼簇修饰的PNA、基于吡咯烷的氧 基肽核酸（POPNA)、基于乙二醇或丙三醇的核酸（GNA)、基于苏糖的核酸（TNA)、基于无环 苏氨醇的核酸（aTNA)、基于吗啉代的寡核苷酸（?1?、？?1?、？1?)4)、基于阳离子吗啉代的寡 聚物（PM0Plus、PM0_X)、具有整合的碱基和骨架的寡核苷酸（ONIB)、吡咯烷酰胺寡核苷酸 (POM);和它们的衍生物。在优选的实施方式中，本发明的寡核苷酸包含肽核酸骨架和/或 吗啉代二氨基磷酸酯骨架或它们的衍生物。在更优选的实施方式中，根据本发明的寡核苷 酸是2'-〇-甲基硫代磷酸醋（2' -〇-methyl phosphorothioate)修饰的，即包含至少一个 2' -0-甲基硫代磷酸酯修饰，优选地，根据本发明的寡核苷酸是完全被2' -0-甲基硫代磷酸 酯修饰的。优选地，2' -0-甲基硫代磷酸酯修饰的寡核苷酸或完全2' -0-甲基硫代磷酸酯修 饰的寡核苷酸是RNA寡核苷酸。
[0063] 如本文所确定的，术语"碱基修饰"或"修饰的碱基"是指RNA和/或DNA中天然 存在的碱基（即嘧啶或嘌呤碱基）或从头合成的碱基的修饰。此类从头合成碱基通过相较 于现有的碱基可描述为"修饰的"。
[0064] 除了上述修饰，本发明的寡核苷酸可以包含进一步的修饰如以下所描述的不同类 型的核酸核苷酸残基或核苷酸。不同类型的核酸核苷酸残基可以用于产生本发明的寡核苷 酸。相比于基于RNA或DNA的寡核苷酸，所述本发明的寡核苷酸可具有至少一个骨架和/ 或糖修饰和/或至少一种碱基修饰。
[0065] 寡核苷酸可以包含天然碱基嘌呤（腺嘌呤、鸟嘌呤）或嘧啶（胞嘧啶、胸腺嘧啶、 尿嘧啶）和/或如下所限定的修饰的碱基。在本发明的背景中，可以由胸腺嘧啶替代尿嘧 啶。
[0066] 碱基修饰包括天然嘌呤和嘧啶碱基（例如腺嘌呤、尿嘧啶、鸟嘌呤、胞嘧啶和胸 腺喃啶）的修饰版本，如次黄嗓呤、乳清酸、agmatidine、赖西丁、假尿喃啶、假胸腺喃啶、 Nl-甲基假尿嘧啶、2-硫代嘧啶（例如2-硫代尿嘧啶、2-硫代胸腺嘧啶）、2, 6-二氨基嘌 呤、G-钳及其衍生物、5-取代的嘧啶（例如5-卤代尿嘧啶、5-甲基尿嘧啶、5-甲基胞嘧啶、 5_丙炔基尿喃啶、5-丙炔基胞喃啶、5-氨基甲基尿喃啶、5-羟基甲基尿喃啶、5-氨基甲基 胞嘧啶、5-羟基甲基胞嘧啶、超级T)、5_辛基嘧啶、5-噻吩嘧啶、5-辛炔-1-基嘧啶、5-乙 炔基嘧