一种富含γ-氨基丁酸的红曲醋制备方法_2

文档序号:8453980阅读:来源:国知局
.8-2.0 (g/100mL),氨基酸态氮(以氮计)0.08-0.12 (g/100mL),总糖(以葡萄糖计)1.8-2.5(g/100mL)。采用高效液相色谱法定量分析本发明方法制备得到的富含γ_氨基丁酸的红曲醋中γ-氨基丁酸含量,其含量达到0.15?0.28 g/L,与采用传统方法制备得到的红曲醋相比提高了 120?230%。本发明采用聚丙烯中空纤维膜反应器技术,固定化菌体增殖与发酵过程在两个膜生物反应器中进行,酿造红曲醋方法简单,工艺可控,缩短发酵周期,节能降耗。
[0023]所述的植物乳杆菌i LactobaciIIus plantarum) CICC 20766 ;巴氏醋杆菌(Ace tobac terpas teuri anus) CICC 21899均购自中国工业微生物菌种保藏管理中心(CICC)0
[0024]所述的平板式膜生物反应器可购杭州凯洁膜分离技术有限公司。
【附图说明】
[0025]图1是本发明所述的一种富含Y-氨基丁酸的红曲醋制备方法工艺流程图。
【具体实施方式】
[0026]为了对本发明更好的理解,现结合附图以实施例的方式对发明做进一步的说明。
[0027]实施例1
1、植物乳杆菌的载体吸附与增殖
刮下经MRS固体斜面培养基上培养的植物乳杆菌菌体细胞,用无菌水配成菌体细胞数为5X 16IiiI/1的植物乳杆菌悬浮液。
[0028]取植物乳杆菌悬浮液接种于装有MRS液体培养基三角瓶,接种量为10% MRS液体培养基体积量,培养温度28°C,在摇床上转速为200r / min,振荡培养2天,培养成植物乳杆菌种子液。
[0029]将把上一步制备好的植物乳杆菌种子液注入平板式膜生物反应器1,注入量以液面超过载体高度4cm标识处为止。打开1/4进气阀门,通入无菌空气,气泡驱动植物乳杆菌种子液回流循环,植物乳杆菌的菌体细胞被聚丙烯中空纤维载体所吸附,而余下液体进入膜元件内部经过排液口抽出。此时吸附在载体上的植物乳杆菌的菌体细胞数较低,必经过活化增殖,提高菌体代谢活力。
[0030]用不锈钢泵以2L / min的流量将增殖培养基液注入膜生物反应器I内,注入量以液面超过载体高度4cm标识处为止,控制品温在30°C之间,聚丙烯中空纤维载体所吸附的植物乳杆菌的菌体细胞进行24小时增殖培养,期间每隔5 h通入无菌空气曝气5 min,通气量为0.01?0.03m3/ Cm3.min)即每I立方米培养基液每分钟通入无菌空气0.01?0.03立方米。经上述增殖培养后吸附在载体上的植物乳杆菌的菌体细胞数将达到6X 101(lm g—1菌泥。而膜生物反应器I的余下液体进入膜元件内部经过排液口抽出。
[0031]2、植物乳杆菌发酵醪液的制备
将50 L红曲醋液与100 L红曲黄酒混合组成150 L醋酒混合液,调整醋酒混合液pH值为5.4之间,用不锈钢泵以2L / min的流量,将醋酒混合液注入平板式膜生物反应器1,注入量以液面超过载体高度4cm标识处为止。平板式膜生物反应器I内醋酒混合液控制品温30°C,进行48 h发酵,发酵结束得到150 L植物乳杆菌发酵醪液。
[0032]3、巴氏醋杆菌的载体吸附与增殖
刮下经MRS固体斜面培养基上培养的取巴氏醋杆菌的菌体细胞,用无菌水配成菌体细胞数为5 X 10?!/1悬浮液。
[0033]取巴氏醋杆菌悬浮液接种于装有MRS液体培养基三角瓶,接种量为10% MRS液体培养基体积量,培养温度28°C,在摇床上转速为200r / min,振荡培养2天,培养成巴氏醋杆菌种子液备用。
[0034]将上一步制备好的巴氏醋杆菌种子液注入平板式膜生物反应器2,注入量以液面超过载体高度4cm标识处为止。打开1/4进气阀门,通入无菌空气,气泡驱动巴氏醋杆菌种子液回流循环,巴氏醋杆菌细胞被聚丙烯中空纤维载体所吸附,而余下液体进入膜元件内部经过排液口抽出。此时吸附在载体上的巴氏醋杆菌的菌体细胞数较低,必经过活化增殖,提尚菌体代谢活力。
[0035]用不锈钢泵以2L / min的流量,将150 L红曲黄酒输入平板式膜生物反应器2进行增殖培养,注入量以液面超过载体高度4cm标识处为止。控制品温在32?34°C之间,进行24小时增殖培养,期间每隔3 h通入无菌空气曝气10 min,通气量为0.03m3/ (m3 ?min)即每I立方米红曲黄酒每分钟通入无菌空气0.03立方米。经上述增殖培养后吸附在载体上的巴氏醋杆菌的菌体细胞数将达到6X 101(lm g—1菌泥。而平板式膜生物反应器2的余下液体进入膜元件内部经过排液口抽出。
[0036]4、富含Y-氨基丁酸的红曲醋制备
将90L植物乳杆菌发酵醪液注入贮液罐内,并加入60L 25%voL酒精度的米烧酒混合成红曲醋发酵混合液。用不锈钢泵以2L / min的流量,将贮液罐中红曲醋发酵混合液泵入平板式膜生物反应器2,注入量以液面超过载体高度4cm标识处为止,打开1/4进气阀门,通入无菌空气,气泡驱动膜生物反应器2红曲醋发酵混合液回流循环,控制品温34°C之间,进行76h发酵,得到富含γ-氨基丁酸的红曲醋。其理化指标:总酸(以乙酸计)6.4(g/100mL),可溶性无盐固形物2.0 (g/100mL),氨基酸态氮(以氮计)0.10 (g/100mL),总糖(以葡萄糖计)2.1 (g/100mL)。采用高效液相色谱法定量分析本发明方法制备得到的富含γ_氨基丁酸的红曲醋中γ-氨基丁酸含量,其含量达到0.23 g/L ο
[0037]所述红曲醋液;红曲黄酒;MRS液体培养基;MRS固体培养基;植物乳杆菌增殖培养基是制备或外购均见本发明的技术方案。
[0038]所述的植物乳杆菌i LactobaciIIus plan tarum) CICC 20766 ;巴氏醋杆菌(Ace tobac terpas teuri anus) CICC 21899均购自中国工业微生物菌种保藏管理中心(CICC)0
[0039]所述的平板式膜生物反应器可购杭州凯洁膜分离技术有限公司。
[0040]实施例2
1、植物乳杆菌的载体吸附与增殖
刮下经MRS固体斜面培养基上培养的植物乳杆菌菌体细胞,用无菌水配成菌体细胞数为2X 16IiiI/1的植物乳杆菌悬浮液。
[0041 ] 取植物乳杆菌悬浮液接种于装有MRS液体培养基三角瓶,接种量为10% MRS液体培养基体积量,培养温度28°C,在摇床上转速为200r / min,振荡培养2天,培养成植物乳杆菌种子液。
[0042]将把上一步制备好的植物乳杆菌种子液注入平板式膜生物反应器1,注入量以液面超过载体高度4cm标识处为止。打开1/4进气阀门,通入无菌空气,气泡驱动植物乳杆菌种子液回流循环,植物乳杆菌的菌体细胞被聚丙烯中空纤维载体所吸附,而余下液体进入膜元件内部经过排液口抽出。此时吸附在载体上的植物乳杆菌的菌体细胞数较低,必经过活化增殖,提高菌体代谢活力。
[0043]用不锈钢泵以2L / min的流量将增殖培养基液注入膜生物反应器I内,注入量以液面超过载体高度4cm标识处为止,控制品温在28°C之间,聚丙烯中空纤维载体所吸附的植物乳杆菌的菌体细胞进行24小时增殖培养,期间每隔5 h通入无菌空气曝气5 min,通气量为0.0lm3/ (m3 ?min)即每I立方米培养基液每分钟通入无菌空气0.01立方米。经上述增殖培养后吸附在载体上的植物乳杆菌的菌体细胞数将达到3X 101(lm g—1菌泥。而膜生物反应器I的余下液体进入膜元件内部经过排液口抽出。
[0044]2、植物乳杆菌发酵醪液的制备将50 L红曲醋液与100 L红曲黄酒混合组成150 L醋酒混合液,调整醋酒混合液pH值为5.0之间,用不锈钢泵以2L / min的流量,将醋酒混合液注入平板式膜生物反应器1,注入量以液面超过载体高度4cm标识处为止。平板式膜生物反应器I内醋酒混合液控制品温28°C,进行48 h发酵,发酵结束得到150 L植物乳杆菌发酵醪液。
[0045]3、巴氏醋杆菌的载体吸附与增殖
刮下经MRS固体斜面培养基上培养的取巴氏醋杆菌的菌体细胞,用无菌水配成菌体细胞数为3 X 10?!/1悬浮液。
[0046]取巴氏醋杆菌悬浮液接种于装有MRS液体培养基三角瓶,接种量为10% MRS液体培养基体积量,培养温度28°C,在摇床上转速为200r / min,振荡培养2天,培养成巴氏醋杆菌种子液备用。
[0047]将上一步制备好的巴氏醋杆菌种子液注入平板式膜生物反应器2,注入量以液面超过载体高度4cm标识处为止。打开
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