一种聚丙烯酸酯胶粘剂键合的生物芯片及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于基因领域，具体设及一种聚丙締酸醋胶粘剂键合的生物巧片及其制备 方法。
【背景技术】
[0002] 生物巧片作为一种高通量、大规模、高效率获取生物信息的技术手段，已经开始广 泛应用于基因组学研究、蛋白质组学研究、单核巧酸多态性分析、临床医学检验等方面。生 物巧片一般来说选择经过相应处理的玻璃、石英、金属等作为载体。玻璃片由于具有廉价、 低巧光背景及性能稳定等优点，已经被广泛应用于DNA巧片的制作。
[0003] 自生物巧片问世W来，巧片键合就一直是巧片设计过程中的关键步骤。目前生物 巧片在国内外比较常用的键合方式主要包括热压法、封合法、表面活化辅助键合法和有机 溶剂辅助键合法等。传统的封合法是使用与基片材质不同的粘性乳胶对巧片进行简单的胶 粘封合，不经过升温热烙，容易造成巧片密封不严密，反应腔漏液。常规的热压法是利用高 温使基底材料自身热烙进行键合，容易造成微流道形状和容积的改变，并且极易导致微流 道阻塞。面活化辅助键合法和有机溶剂辅助键合法需要真空密闭环境，依赖大型键合设备， 成本昂贵，不适宜商品化、规模化生产。总之，上述生物巧片的键合方法在实际应用过程中 存在各种实际问题，限制了生物巧片技术在各个领域的推广和应用。
[0004] 聚丙締酸醋是W丙締酸醋类为单体的均聚物或共聚物。丙締酸醋在光、热或是引 发剂作用下非常容易聚合。聚丙締酸醋能形成光泽好而耐水的膜，粘合牢固，不易剥落，在 室温下柔初而有刚性，不易形变，有优异的光稳定性和耐候性，良好的耐水、耐碱、耐化学品 性能和粘接性能，是金属、玻璃、皮革、木材等的良好胶粘剂，被广泛的应用于生物医学。
【发明内容】
[0005] 发明目的；为了克服现有技术的不足，本发明所要解决的第一个技术问题是提供 了一种聚丙締酸醋胶粘键合的生物巧片。
[0006] 本发明所要解决的第二个技术问题是提供了上述生物巧片的制备方法。
[0007] 技术方案；为了解决上述目的，本发明所采用的技术方案为；一种聚丙締酸醋胶 粘键合的生物巧片，巧片分为=层结构，上层为带有进液孔的基片，中层为缕刻有微流道的 聚丙締酸醋胶条，下层为不带孔基片，=层结构键合形成具有微流道生化反应腔的封闭式 生物巧片。
[000引其中，上述基片的材料为透明玻璃、石英、娃、金属、巧龙膜、陶瓷、塑料中的一种或 几种。
[0009] 其中，上述聚丙締酸醋的材料为聚丙締酸己醋、a-氯代丙締酸醋、其他W丙締酸 醋类为单体的均聚物或共聚物中一种或几种。
[0010] 上述的聚丙締酸醋胶粘键合的生物巧片的制备方法，包括W下步骤：
[0011] (1)将上下两层基片用去离子水和少量洗漆剂清洗干净，放入体积比为 =1:1的36~38%盐酸和甲醇混合溶液中25°C浸泡洗漆0. 5~比，然后用去离子水冲洗 干净；
[0012] (2)将步骤（1)获得的基片采用物理化学修饰法，将生物活性探针固定在基片表 面上，被修饰的基片是上层基片或下层基片，或上下两层基片均被修饰；
[0013] (3)将步骤（2)获得的上下两层基片用缕刻有微流道的聚丙締酸醋类胶粘剂进行 热压键合，键合温度为70~200°C，键合时间为1~lOmin，键合压力为0. 1~3MPa。
[0014] 其中，上述的物理化学修饰法为氨基化、醒基化、駿基化、琉基化或是环氧己基化 修饰中的一种。
[00巧]其中，上述生物活性探针为DNA、RNA、寡核巧酸、蛋白质、多肤、多糖、细胞或微组织 中的一种。
[0016] 有益效果：与现有技术相比，本发明的优点是；（1)巧片为S层结构，上下基片通 过聚丙締酸醋的热压键合，将每条微流道密封形成封闭的生化反应腔，生化试剂可W通过 进液孔流进或流出反应腔，从而降低外界环境对生化反应的不良影响，避免空气流动污染 样品或是相邻流道间样品的相互污染，提高生物巧片检测结果的科学性和准确性。
[0017] (2)聚丙締酸醋类胶粘剂成本低，适用性广，对基片材质无特殊要求，可W键合透 明玻璃、石英、娃、金属、巧龙膜、陶瓷或是塑料等常规基片材料，进而从整体上降低生物巧 片的制作成本，利于商品化和规模化生产。
[0018] (3)聚丙締酸醋类胶粘剂化学性质稳定，键合温度符合生物学规律，胶条可W根据 需要自行设计，操作简便。聚丙締类胶粘剂的键合温度范围在70~200°C，可W满足常规 生化反应温度要求，不会发生胶条溶解，微流道变形阻塞而造成反应腔容积改变，有利于生 化反应的量化控制，提高生物巧片的可操控性。工艺简单易行，可W根据需要设计反应腔形 状、容积及个数，操作简便，对人员技术和设备的要求低，提高了制片的效率。
【具体实施方式】
[0019] 下面结合具体实施实例，进一步阐释本发明：
[0020] 实施例1醒基修饰石英巧片的制备
[0021] 1.采用石英载玻片作为下层基片，规格为68mm*18mm*0. 4mm，同时将相同规格的 16孔玻片作为上层基片，上下基片使用前用组装夹具确定尺寸；
[0022] 2.将上下基片用洗漆剂清洗，再用去离子水冲洗干净后放入体积比为V盐酸：V甲 醇=1:1的36~38%盐酸和甲醇混合溶液中室温（25°C)浸泡，放入摇床洗漆0. 5~比， 转速60rpm，然后用去离子水冲洗干净；
[0023] 3.采用醒基修饰基片；将基片用硫酸和双氧水沸水浴30min，再用去离子水洗净 后1000巧m离屯、甩干，将基片浸入低浓度氨基硅烷溶液，室温条件下恒温恒湿修饰30min， 用己醇洗净，甩干，ll(rC烘干；用PH=7.0,0.01mol/L磯酸缓冲盐溶液将25%戊二醒稀释 成5%，然后将巧片浸泡2h，用己醇洗净，室温甩干，4°C密封真空保存；
[0024] 4.点样仪点样；将1y1浓度为40yM的1-(3-二甲氨基丙基）-3-己基碳二亚胺 盐酸溶液、5y1浓度为40yM的2- (N-吗咐）己横酸溶液加24y1灭菌好的d地20,