用于19种高危型人乳头瘤病毒(hpv)的检测试剂盒、检测体系及方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物技术领域，具体地涉及一种用于检测19种高危型人乳头瘤病毒 的引物、探针、试剂盒及其方法。
【背景技术】
[0002] 人乳头瘤病毒（HPV)是一种属于乳多空病毒科的乳头瘤空泡病毒A属，是球形DNA 病毒，能引起人体皮肤黏膜的鳞状上皮增殖，人类是其唯一的宿主。目前已经确定HPV型 别已经超过了 190种，约50余种定向感染人体生殖道皮肤及粘膜的复层鳞状上皮。在临 床上，根据HPV不同亚型致病力大小可将HPV分为高危型和低危型两大类。高危型除可引 起外生殖器疣外，更重要的是引起外生殖器癌、宫颈癌及高度子宫颈上皮内瘤变，高危型是 造成宫颈癌的主要元凶，约99. 7%的宫颈癌是由高危型人乳头瘤病毒的持续或反复感染所 致；而低危型人乳头瘤病毒（HPV)主要引起男女外生殖器的尖锐湿疣等良性病变包括宫颈 上皮内低度病变（CINI)，良性病变如若不及时诊断并治疗也有发展成癌变的可能。因此， 有针对性地对高危型HPV进行全面检测，对宫颈癌的早期诊断和治疗具有重要的意义。
[0003] 传统的细胞学检测方法仅能检测到细胞学方面的变化，其灵敏度低、特异性差、假 阴性率和假阳性率高，并且不能对HPV进行分型。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供用于检测19种高危型HPVs的引物、探针，19种高危型 册乂8包括册￥16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、70、73、82 ;其引物序 列如表1所示，探针序列如表2所示，内标引物探针如表3所示。
[0005] 表1引物及序列
【主权项】
1. 一种用于检测19种高危型人乳头瘤病毒（HPV)的试剂盒，其特征在于，包括：
2. 如权利要求1所述的一种用于检测19种高危型人乳头瘤病毒（HPV)的试剂盒，其特 征在于， 还包括： HPV19混合酶：包括Taq DNA聚合酶、UNG酶1管27 y L HPV19阳性对照：包括HPV 18/26型质粒1管50 y L。
3. -种用于检测19种HPVs的反应体系，具体如下： DEPC H20 10XPCR缓冲液 MgC12 20. 0-50.0 mmol 权利要求1的各对引物50-200 y mol 权利要求1的各对探针50-200 y mol dNTP 20. 0-30.0 mmol 混合酶0.5-1. OyL 总体积30-50 y L。
4. 一种用于非疾病诊断目的的在生物样品中同时检测和分型19种HPV的方法，所述方 法包括以下步骤： 1) 样本米集； 2) 提取样本DNA ; 3) 将所提取的DNA按照对应比例与混合酶混合，并加入到PCR反应管中；并将HPV19阳 性对照和HPV19阴性对照分别加入对应的PCR反应管内； 4) 根据荧光PCR扩增仪显示的Ct值判断检测结果； 5) 检测结果的解释，如下表所示：
① HEX(或VIC)通道应有明显或有"S"型趋势的扩增曲线升起，且Ct值彡29 :若Ct值 >29或HEX通道无明显扩增曲线升起，说明加入的DNA含有PCR抑制剂或DNA加入量过少， 需要重新提取或增加DNA上样量再进行试验；此种情况下，若样本的FAM和CY5通道其中一 个或两个升起且Ct值< 27,则该样本无需重新检测，结果判断为高危型HPV DNA阳性； ② CY5通道的扩增曲线呈典型的"S"型且Ct值彡27,则结果判断为HPV 16/18型阳 性； ① FAM通道的扩增曲线呈典型的"S"型且Ct值彡27,则结果判断为HPV其他高危型阳 性； ② 一个样品可能是HPV 16/18型和其他高危型同时阳性。
5.如权利要求4所述的一种用于非疾病诊断目的的在生物样品中同时检测和分型19 种HPV的方法，其特征在于：所述样本包括泌尿生殖道分泌物棉拭子、生殖道刮片、组织活 检标本。
【专利摘要】本发明公开了一种检测人乳头瘤病毒(HPV)19种高危型的检测试剂盒、检测体系和方法，其中19种高危型HPVs包括HPV16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、70、73、82；本发明采用多条通用引物对目的片段进行扩增，利用特异的荧光探针对扩增片段进行实时检测，采用通用引物，减少了体系引物用量和体系的复杂性，节约了成本，10条引物共同作用将所有高危型检测出来；20条特异性探针对各型别进行区分。本发明在同一反应管中即可检测19种高危型HPV,灵敏度高，特异性强，操作简便快捷，同时，对患者而言，节省了筛查费用。
【IPC分类】C12R1-93, C12Q1-68, C12Q1-70
【公开号】CN104818342
【申请号】CN201510127369
【发明人】江春琴, 林清华, 施伟杰, 韩元龙, 郑立谋
【申请人】厦门艾德生物医药科技有限公司
【公开日】2015年8月5日
【申请日】2015年3月23日