醋酸格拉替雷的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于医药领域，具体而言，涉及一种醋酸格拉替雷的制备方法。
【背景技术】
[0002]自身免疫类疾病(autoimmune diseases)是指,生物机体的免疫系统将一些机体本身的组织当作“外来物”进行攻击的现象。通常这种疾病可以通过阻碍生物机体T细胞和B细胞对机体自身组织的反应，得到缓解。这些早期的免疫反应是通过抗原结合到MHC分子上促进的，并通过T细胞表达出来。自身免疫类疾病就是机体本身的组织和蛋白质被当作“自抗原”，被机体免疫系统攻击。例如:多发性硬化症，就是免疫系统对隔离和保护神经的髓鞘进行攻击而导致的疾病，这种疾病发展到失去髓鞘，就会带来神经元和运动神经功能丧失；其他例如系统性红斑狼疮、类风湿关节炎、自免疫性溶血性贫血等，也属于此类疾病。
[0003]很多药物开发出来用于治疗自身免疫类疾病，包括多发性硬化症。醋酸格拉替雷(又叫共聚物-1、GA)是由丙氨酸、谷氨酸、赖氨酸和酪氨酸通过肽键聚合产生的不同分子量聚合物的混合物。它的四种氨基酸摩尔比大约是0.392?0.462:0.129?0.153:0.300?0.374:0.086?0.100 (Ala:Glu:Lys:Tyr)，混合物中的共聚物的平均分子量大约5000?9000道尔顿。醋酸格拉替雷被用于治疗患有间歇复发型多发性硬化的患者，用于减少复发其的频率。
[0004]现有的多篇专利中(US5800808、CN1310673C等)详细描述了的制备方法包括，使被保护的聚合物与在乙酸中的33%氢溴酸反应。这种去保护反应将Y苄基保护基从谷氨酸残基的5-羧酸酯上去除，并且将所述聚合物裂解为更小的聚合物，以形成三氟乙酰基多肽，获得介于5000?9000道尔顿的正确平均分子量的GA所需要的时间取决于反应温度和被保护的醋酸格拉默的分子量模式，去保护发生在介于20°C和28°C之间的温度。
[0005]在CN101166754B中，进一步描述了在合成被保护的聚合物后，用包含少于0.5%的游离溴和少于100ppm金属离子杂质的氢溴酸的乙酸溶液对所述被保护的多肽进行去保护，从而制备醋酸格拉替雷的方法步骤。
[0006]但是，发明人在实际的聚合物合成方法优化工作中，发现该方法对于氢溴酸的乙酸溶液的杂质含量及浓度并非十分敏感，并且，产品的制备结果并不十分理想，所获得的醋酸格拉替雷样品纯度达不到药用高纯度标准。
【发明内容】
[0007]本申请涉及一种制备高纯度醋酸格拉替雷的方法，所述的方法包括如下步骤:
[0008](I)在1，4_ 二氧六环溶剂中溶解L-丙氨酸NCA、L_酪氨酸NCA、L_谷氨酸-Y-苄酯NCA、L- ε -三氟乙酰基-赖氨酸NCA、搅拌至体系澄清；
[0009](2)加入二乙胺催化，20?25°C下搅拌，随后将反应液缓慢倒入水中，收集产生的白色全保护格拉替雷固体并干燥处理；
[0010](3)将步骤(2)所得的全保护格拉替雷加入氢溴酸乙酸溶液中，23.0?25.(TC下搅拌，反应完成后将反应液倒入纯化水中淬灭，搅拌5分钟，抽滤得到黄色粉状三氟乙酰基格拉替雷固体，重复3?5遍用水溶解并抽滤干燥的步骤后，鼓风干燥去除三氟乙酰基格拉替雷固体中的水分；；
[0011](4)将步骤(3)所得的三氟乙酰基格拉替雷用IM哌啶水溶液于室温下溶解并搅拌，得到的溶液经透析后，加冰乙酸调节PH为5.5?7.0，冻干即得醋酸格拉替雷白色粉末；
[0012]优选的，所述的氢溴酸乙酸溶液中的溴以单质形态存在的比例范围是0.1%?1%。
[0013]优选的，步骤(3)所述的氢溴酸乙酸溶液中，还含有0.5?2% (wt% )的苯酚，最优选的，所述的苯酚在氢溴酸乙酸溶液中的含量为1% (wt)。
[0014]步骤(I)中所述的1，4- 二氧六环溶剂体积为200mL，L-丙氨酸，L-酪氨酸，L-谷氨酸-Y -苄酯，L- ε -三氟乙酰基-赖氨酸的质量比为2.59:1.036:1.974:4.693 ;搅拌时间优选为30min。
[0015]步骤(2)中所述的二乙胺与1，4- 二氧六环溶剂的比例为1:6(v/v)，倒入的水的体积与1，4- 二氧六环溶剂的比例为2:1 (v/v)，所述的全保护格拉替雷干燥处理方法优选为抽滤后真空干燥处理。
[0016]步骤(3)中所述的氢溴酸乙酸溶液与全保护格拉替雷的比例为10:0.74 (w/w)，反应时间为19h，淬灭用纯水和全保护格拉替雷的用量比例为100:3.7 (w/w)。
[0017]步骤(4)中所述的三氟乙酰基格拉替雷和IM哌啶水溶液的用量比例为1:54(w/V)，所述的搅拌时间优选为24h，所述的透析的滤膜为2KDa的滤膜。
[0018]本发明所述的方法制得的醋酸格拉替雷中溴代酪氨酸含量为0.1%?10% ;若步骤(3)中使用含苯酚的氢溴酸乙酸溶液，则所获得的醋酸格拉替雷中溴代酪氨酸含量为0.1%?0.5%。
[0019]说明书附图
[0020]图1、实施例2制备获得的醋酸格拉替雷样品色谱图
[0021]图2、实施例3制备获得的醋酸格拉替雷样品色谱图
[0022]图3、实施例4制备获得的醋酸格拉替雷样品色谱图
[0023]图4、实施例5制备获得的醋酸格拉替雷样品色谱图
[0024]图5、实施例6制备获得的醋酸格拉替雷样品色谱图
【具体实施方式】
[0025]实施例1:全保护格拉替雷的制备，
[0026]三口瓶中加入经金属钠处理过的1，4- 二氧六环200mL,室温下加入L-丙氨酸NCA2.590克，L-酪氨酸NCA1.036克，L-谷氨酸-Y -苄酯NCA1.974克，L- ε -三氟乙酰基-赖氨酸NCA4.693克。搅拌30分钟，至体系澄清，加入二乙胺33毫克。20?25摄氏度下机械搅拌24小时。将反应液缓慢倒入400mL水中，产生大量白色固体，抽滤后，真空干燥得7.424克，收率92.8%o
[0027]实施例2:醋酸格拉替雷的制备(I)
[0028]在反应瓶中加入氢溴酸乙酸溶液I (溴单质含量0.1% )10.0克，搅拌30分钟。加入全保护格拉替雷0.74克，搅拌，控制反应温度23.0?25.(TC，反应19小时。将反应体系倒入20ml纯化水中淬灭，搅拌5分钟，抽滤，得到黄色粉状固体。将固体加入至容器中,力口水20ml搅拌10分钟，然后抽滤；反复上述操作四次。固体送鼓风干燥(45°C ) 12小时。
[0029]三口瓶中加入实施例二中所得三氟乙酰基格拉替雷0.50克，IM哌啶水溶液27mL，室温下搅拌24小时。用2KDa的滤膜进行透析，得到的溶液加冰乙酸至pH为5.5?7.0，搅拌I小时。冻干得白色粉末。检测溴代酪氨酸含量为:6.51%
[0030]实施例3:醋酸格拉替雷的制备(2)
[0031]在反应瓶中加入氢溴酸乙酸溶液II (溴单质含量0.3% ) 10.0克，搅拌30分钟。加入全保护格拉替雷0.74克，搅拌，控制反应温度23.0?25.(TC，反应19小时。将反应体系倒入20ml纯化水中淬灭，搅拌5分钟，抽滤，得到黄色粉状固体。将固体加入至容器中，加水20ml搅拌10分钟，然后抽滤；反复上述操作四次。固体送鼓风干燥(45°C ) 12小时。
[0032]三口瓶中加入实施例四中所得三氟乙酰基格拉替雷0.50克，IM哌啶水溶液27mL，室温下搅拌24小时。用2KDa的滤膜进行透析，得到的溶液加冰乙酸至pH为5.5?7.0，搅拌I小时。冻干得白色粉末。检测溴代酪氨酸含量为:9.30%