从龙葵植株中制备β-谷甾醇亚油酸酯的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及的是一种农业技术领域的制备方法，具体地说，涉及的是一种从植物龙葵中制备β-谷甾醇亚油酸酯的方法。
【背景技术】
[0002]龙葵(Solanum Nigrum L.)为一年生前属植物，是一种分布广泛的杂草，多生于路边，荒地，喜温暖湿润的气候，因其对土壤要求不严，且用种子繁殖，因此非常容易种植，生物量很大。其全草可供药用，常用于治疗疮痈肿毒、肿瘤、皮肤湿瘆、小便不利等。目前，国内外对龙葵的化学成分的研宄较多，曾有报道在龙葵中含有龙葵碱(solanigrine)、澳洲前碱(solasonine)等生物碱，以及皂甙、维生素C、树酯等。
[0003]谷留醇亚油酸酯是一种重要的植物留醇酯，有研宄报道其具有很强的抗氧化以及杀菌作用。目前植物留醇酯的获得主要是通过化学合成的办法，即将晶体植物留醇在高温下熔融，再与酯肪酸缩合生成留醇酯。但酯肪酸尤其是不饱和酯肪酸在高温下容易发生热分解，因此，化学合成法对于谷留醇亚油酸酯并不十分适用。虽然人们也在研宄采用其它的方法制备该化合物，像如采用有机相酶催化酯化反应，但是，从植物中提制仍旧是获得该化合物的一个重要的途径。
[0004]经过对现有的技术文献检索发现，目前还没有从植物龙葵中提制β -谷留醇亚油酸酯的报道。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于针对现有技术存在的不足，提供一种从植物龙葵中提制β -谷甾醇亚油酸酯的方法，该方法以龙葵为原料，采用溶剂提取、浓缩、溶剂萃取和柱层析等工艺方法提制谷留醇亚油酸酯，操作简单，成本低廉且获得的物质纯度较高。
[0006]本发明是通过以下技术方案实现的，包括以下步骤:
[0007]第一步，将龙葵洗净、晾干后，干燥，粉碎成粉末；
[0008]第二步，用龙葵粉末质量的5-40倍的乙醇，常温下浸泡提取(即浸提)，然后过滤，将所得滤液减压真空浓缩，即获得提取液的浓缩物；
[0009]第三步，用龙葵粉末质量的1-30倍去离子水溶解上一步所得提取液的浓缩物后，再用0.5-5倍去离子水体积的石油醚萃取至少3次；
[0010]第四步，将萃取后的石油醚相减压真空浓缩，采用硅胶柱，以石油醚-乙酸乙酯体系为流动相增大乙酸乙酯比例进行梯度洗脱；
[0011]第五步，过完硅胶柱后，以TLC检测搜集目标产物，并收集目标产物，然后减压真空浓缩；
[0012]第六步，将第五步所得浓缩物再经过凝胶柱进一步纯化，采用氯仿-甲醇体系为流动相，最终获得淡黄色油状物，即β -谷留醇亚油酸酯。
[0013]优选地，第一步中，所述的干燥，其温度为40°C -50°C。
[0014]优选地，第一步中，所述的粉碎是指用中药粉碎机粉碎成10-50目的植物粉末。
[0015]优选地，第二步中，所述乙醇是指无水乙醇或20-95% (v/v)的乙醇溶液。
[0016]优选地，第二步中，所述的常温下浸泡提取，其时间为8h_72h。
[0017]优选地，第二步中，所述的减压真空浓缩是指将溶液抽真空减压到-0.1个大气压，置于40°C -50°C下水浴，使溶液得到浓缩。
[0018]优选地，第四步中，采用200-300目硅胶柱。
[0019]优选地，第四步中，所述的梯度洗脱的流动相:石油醚与乙酸乙酯的体积比为200:1-1:1OOo
[0020]优选地，第六步中，所述凝胶柱采用凝胶柱Sephadex LH-20。
[0021]与现有技术相比，本发明具有如下有益效果:
[0022]I)原材料:采用杂草龙葵为原材料，来源广泛，获取简单，生物量大，成本低廉。并且龙葵作为药用的主要作用成分中不包含谷留醇亚油酸酯，因此，本发明可以很大程度上提高人类对于植物龙葵的有效利用率，并且本发明也是首次从植物龙葵中提制获得β-谷甾醇亚油酸酯。
[0023]2)生产工艺:该方法工艺简单，生产实用性强，易于进行大规模工业化生产，此夕卜，该过程中使用的乙醇等有机溶剂可以回收重复循环利用，节约了材料，降低了成本。相比较采用有机相酶催化酯化反应，对条件的要求不高，操作简单，而且所得物质的纯度很高，经过高效液相色谱(HPLC)的定量检测，纯度可达到98%。
【具体实施方式】
[0024]下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本发明的保护范围。
[0025]实施例1
[0026]将龙葵洗净晾干后，40°C干燥，粉碎后过50目筛，称取10g粉末，用粉末质量10倍的无水乙醇在常温下浸泡120h，过滤，将滤液在40°C下减压浓缩，得到浓缩物15.lg，然后用100ml去离子水溶解该浓缩物，再用等体积的石油醚萃取3次，将萃取所得的石油醚相减压浓缩，采用200-300目硅胶柱，以石油醚-乙酸乙酯体系为流动相增大乙酸乙酯比例进行梯度洗脱(比如采用比例 190:1, 150:1, 100:1,50:1, 25:1,20:1, 15:1, 10:1,5:1,3:1,2:1, 1:1, 10:1,50:1 ;当然在其他实施例中也可以采用其他比例，具体可以根据一般原则和实际情况确定)。采用TLC检测搜集目标产物，收集含有目标物质的组分后浓缩将溶剂蒸干，然后将所得浓缩物再经过凝胶柱Sephadex LH-20进一步纯化，采用氯仿-甲醇体系为流动相，最终获得淡黄色油状物，即β -谷留醇亚油酸酯，1.03g，纯度为97.3%。
[0027]实施例2
[0028]将龙葵洗净晾干后，50°C干燥，粉碎后过30目筛，称取200g粉末，用粉末质量38倍的无水乙醇在常温下浸泡24h，过滤，将滤液在40°C下减压浓缩，得到浓缩物25.lg，然后用6000ml去离子水溶解该浓缩物，再用5倍体积的石油醚萃取3次，将萃取所得的石油醚相减压浓缩，采用200-300目硅胶柱，以石油醚-乙酸乙酯体系为流动相增大乙酸乙酯比例进行梯度洗脱。采用TLC检测搜集目标产物，收集含有目标物质的组分后浓缩将溶剂蒸干，然后将所得浓缩物再经过凝胶柱Sephadex LH-20进一步纯化，采用氯仿-甲醇体系为流动相，最终获得淡黄色油状物(即0-谷留醇亚油酸酯)1.948，纯度为98.7%。
[0029]实施例3
[0030]将龙葵洗净晾干后，45°C干燥，粉碎后过10目筛，称取10g粉末，用粉末质量20倍的无水乙醇在常温下浸泡168h，过滤，将滤液在40°C下减压浓缩，得到浓缩物17.5g，然后用300ml去离子水溶解该浓缩物，再用3倍体积的石油醚萃取3次，将萃取所得的石油醚相减压浓缩，采用200-300目硅胶柱，以石油醚-乙酸乙酯体系为流动相增大乙酸乙酯比例进行梯度洗脱。采用TLC检测搜集目标产物，收集含有目标物质的组分后浓缩将溶剂蒸干，然后将所得浓缩物再经过凝胶柱Sephadex LH-20进一步纯化，采用氯仿-甲醇体系为流动相，最终获得淡黄色油状物(即0-谷留醇亚油酸酯)1.428，纯度为98.0%。
[0031]实施例4
[0032]将龙葵洗净晾干后，40°C干燥，粉碎后过30目筛，称取200g粉末，用粉末质量8倍的无水乙醇在常温下浸泡48h，过滤，将滤液在40°C下减压浓缩，得到浓缩物29.5g，然后用1600ml去离子水溶解该浓缩物，再用0.5倍体积的石油醚萃取3次，将萃取所得的石油醚相减压浓缩，采用200-300目硅胶柱，以石油醚-乙酸乙酯体系为流动相增大乙酸乙酯比例进行梯度洗脱。采用TLC检测搜集目标产物，收集含有目标物质的组分后浓缩将溶剂蒸干，然后将所得浓缩物再经过凝胶柱Sephadex LH-20进一步纯化，采用氯仿-甲醇体系为流动相，最终获得淡黄色油状物(即谷甾醇亚油酸酯)2.31g，纯度为96.1%。
[0033]尽管本发明的内容已经通过上述优选实施例作了详细介绍，但应当认识到上述的描述不应被认为是对本发明的限制。在本领域技术人员阅读了上述内容后，对于本发明的多种修改和替代都将是显而易见的。因此，本发明的保护范围应由所附的权利要求来限定。
【主权项】
1.一种从龙葵植株中制备β -谷留醇亚油酸酯的方法，其特征在于，包括以下步骤: 第一步，将龙葵洗净、晾干后，干燥，粉碎成粉末； 第二步，用龙葵粉末质量的5-40倍的乙醇，常温下浸泡提取，然后过滤，将所得滤液减压真空浓缩，即获得提取液的浓缩物； 第三步，用龙葵粉末质量的1-30倍去离子水溶解上一步所得提取液的浓缩物后，再用0.5-5倍去离子水体积的石油醚萃取至少3次； 第四步，将萃取后的石油醚相减压真空浓缩，采用硅胶柱，以石油醚-乙酸乙酯体系为流动相增大乙酸乙酯比例进行梯度洗脱； 第五步，过完硅胶柱后，以TLC检测搜集目标产物，并收集目标产物，然后减压真空浓缩； 第六步，将第五步所得浓缩物再经过凝胶柱进一步纯化，采用氯仿-甲醇体系为流动相，最终获得淡黄色油状物，即β -谷留醇亚油酸酯。
2.根据权利要求1所述的从龙葵植株中制备β-谷留醇亚油酸酯的方法，其特征在于，第一步中，所述的干燥，其温度为40°C -50°C。
3.根据权利要求1或2所述的从龙葵植株中制备β-谷留醇亚油酸酯的方法，其特征在于，第一步中，所述的粉碎是指用中药粉碎机粉碎成10-50目的植物粉末。
4.根据权利要求1所述的从龙葵植株中制备β-谷留醇亚油酸酯的方法，其特征在于，第二步中，所述乙醇是指无水乙醇或20-95% (ν/ν)的乙醇溶液。
5.根据权利要求1所述的从龙葵植株中制备谷留醇亚油酸酯的方法，其特征在于，第二步中，所述的常温下浸泡提取，其时间为8h-72h。
6.根据权利要求1-5任一项所述的从龙葵植株中制备β-谷留醇亚油酸酯的方法，其特征在于，第二步中，所述的减压真空浓缩是指将溶液抽真空减压到-0.1个大气压，置于400C _50°C下水浴，使溶液得到浓缩。
7.根据权利要求1-5任一项所述的从龙葵植株中制备β-谷留醇亚油酸酯的方法，其特征在于，第四步中，采用200-300目硅胶柱。
8.根据权利要求1- 5任一项所述的从龙葵植株中制备β-谷留醇亚油酸酯的方法，其特征在于，第四步中，所述的梯度洗脱的流动相是指石油醚与乙酸乙酯的体积比为200:1-1:1o
9.根据权利要求1所述的从龙葵植株中制备β-谷留醇亚油酸酯的方法，其特征在于，第六步中，所述凝胶柱采用凝胶柱Sephadex LH-20。
【专利摘要】本发明提供了一种从龙葵植株中制备β-谷甾醇亚油酸酯的方法，步骤：第一步，将龙葵洗净、晾干后，干燥，粉碎成粉末；第二步，用乙醇常温下浸泡提取，然后过滤，将所得滤液减压真空浓缩，即获得提取液的浓缩物；第三步，用去离子水溶解上一步所得提取液的浓缩物后，再石油醚萃取；第四步，将萃取后的石油醚相减压真空浓缩，采用硅胶柱进行梯度洗脱；第五步，过完硅胶柱后，收集目标产物，然后减压真空浓缩；第六步，将第五步所得浓缩物再经过凝胶柱进一步纯化，采用氯仿-甲醇体系为流动相，最终获得淡黄色油状物，即β-谷甾醇亚油酸酯。本发明操作简单，成本低廉且获得的物质纯度较高。
【IPC分类】C07J9-00
【公开号】CN104861024
【申请号】CN201510158352
【发明人】代光辉, 陈义娟
【申请人】上海交通大学
【公开日】2015年8月26日
【申请日】2015年4月3日