从三种高山鼠尾草植物中制备迷迭香酸化学对照品的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种迷迭香酸(Rosmarinic acid)化学对照品的制备方法，尤其涉及从三种高山鼠尾草植物中制备迷迭香酸化学对照品的方法。
【背景技术】
[0002]鼠尾草属L.)是唇形科最大属，青臧尚原上主要分布二种鼠尾草种，粘毛鼠尾草roborowskii)、甘西鼠尾草(przewalskii Maxim.)及康定鼠尾草i Salvia prattii)。现代研宄表明鼠尾草植物中的化学成分主要包括酚酸类及萜类。目前，三种高山鼠尾草属植物甘西鼠尾草、粘毛鼠尾草及康定鼠尾草药材并未有质控指标成分，迷迭香酸是这三种鼠尾草属植物中含量较高的酚酸类化合物，由于该化合物极性较大，加之在硅胶薄层色谱上拖尾严重，从这三种鼠尾草药材中获取高纯度迷迭香酸对照品较为困难。为了加快高山鼠尾草属植物的质量评价、生产销售及相关新药的研发步伐，发展高纯度迷迭香酸的高效制备方法，尤其规模化制备技术显得尤为重要。
[0003]目前，从高山鼠尾草属植物制备酚酸类化合物的文献未见报道，中国专利(CN1995007)报道采用提取、加入抗氧化剂或调pH至酸性静置后过滤，滤液过聚酰胺树脂、离子交换树脂或大孔树脂柱层析手段分离、然后再调PH至酸性、静置、结晶、过滤等5~7步生产出纯度约为90%的迷迭香酸，过程较繁琐且损失量较大，而从甘西鼠尾草、粘毛鼠尾草及康定鼠尾草中快速获取规模化迷迭香酸的制备研宄未见文献报道。
【发明内容】
[0004]本发明所要解决的技术问题是提供一种工艺简单、易规模化的从三种高山鼠尾草植物中制备迷迭香酸化学对照品的方法。
[0005]为解决上述问题，本发明所述的从三种高山鼠尾草植物中制备迷迭香酸化学对照品的方法，包括以下步骤:
⑴微孔树脂除杂:
按常规方法制得的棕红色浸膏状的粘毛鼠尾草、甘西鼠尾草或康定鼠尾草中的一种醇提物用其质量5~10倍的体积分数10~30%的乙醇溶液溶解，过滤得到滤液A，该滤液A上微孔树脂柱分离，先以2~5倍柱体积的水溶液洗脱除去杂质，然后用2~5倍柱体积、体积分数30-80%的甲醇溶液进行台阶梯度洗脱，收集30°/『50%甲醇水洗脱物，该甲醇水洗脱物经减压干燥得酚酸类组分粗品；所述粘毛鼠尾草、甘西鼠尾草或康定鼠尾草中的一种醇提物与所述微孔树脂比例为I g:10 mL ；
⑵硅胶柱富集:
将所述酚酸类组分粗品经硅胶柱色谱分离后，用3~5倍柱体积的氯仿-甲醇-水混合溶剂洗脱，按每份500 mL收集馏分，并经薄层色谱检测，其中展开剂为氯仿-甲醇-水混合溶剂，显色剂为体积浓度10%的浓硫酸乙醇溶液，合并Rf值为0.18-0.22的馏分；所述Rf值为0.18-0.22的馏分经减压干燥即得淡黄色粉末状的迷迭香酸粗品； ⑶亲水液相制备色谱精制:
所述迷迭香酸粗品用其质量2~5倍的体积分数为80°/『100%的甲醇溶液溶解，然后配制样品浓度为100.0-150.0 mg/mL，经0.45 μ m微孔滤膜过滤，得到滤液B，该滤液B经亲水液相制备色谱分离，经检测波长为330 nm的紫外检测器检测，收集制备色谱图中主要的色谱峰馏分，该色谱峰馏分经减压干燥即得纯度大于98%的白色粉末状的对照品。
[0006]所述步骤⑴和所述步骤⑵及所述步骤⑶中的减压干燥的条件均是指真空度为
0.06-0.09 MPa,温度为 50-70 °C。
[0007]所述步骤⑵中娃胶柱的尺寸为30 mm~60謹X60謹~100謹。
[0008]所述步骤⑵中氯仿-甲醇-水混合溶剂是指将氯仿、甲醇、水按8:2:0.2-7:3:0.5体积比混合均匀而得。
[0009]所述步骤⑶中亲水液相制备色谱分离的工作参数是指色谱柱柱长250 mm、直径20mm,亲水制备柱固定相为10 μ m XAmide或X1n，流动相为体积分数80%~90%的乙腈-水溶液，进样体积为2.0-3.0 mL，流速为15 mL/min。
[0010]本发明与现有技术相比具有以下优点:
1、本发明工艺简单、回收率高。
[0011]第一步采用微孔树脂除杂，可获取纯度约40%的迷迭香酸酚酸类组分粗品，同时，微孔树脂具有良好的脱色效果。第二步采用硅胶柱富集，可富集到纯度为75%~85%的迷迭香酸粗品；第三步采用亲水液相制备色谱制备，可获取高纯度对照品，且收率较高(>90%)。
[0012]2、本发明采用的技术手段非常适宜规模化生产。
[0013]原料要求不高，一般野生或种植的甘西鼠尾草、粘毛鼠尾草或康定鼠尾草提取物即可，易于批量备料；第一步采用微孔树脂柱除杂，该树脂柱可以再生循环使用，平均价格低廉，易于规模化；第二步硅胶柱富集，填料便宜易得；第三步精制中采用亲水液相制备色谱制备，为快速的等度方法，也非常适宜规模生产。
【附图说明】
[0014]下面结合附图对本发明的【具体实施方式】作进一步详细的说明。
[0015]图1为本发明实施例1迷迭香酸粗品的HPLC分析图谱(330 nm)。
[0016]图2为本发明实施例1迷迭香酸粗品的HPLC制备图谱(330 nm)。
[0017]图3为本发明实施例1迷迭香酸的亲水液相制备色谱纯度分析(330 nm)。
【具体实施方式】
[0018]实施例1从三种高山鼠尾草植物中制备迷迭香酸化学对照品的方法，包括以下步骤:
⑴微孔树脂(MCI)除杂:
200.0 g按常规方法制得的棕红色浸膏状的粘毛鼠尾草醇提物用其质量10倍的体积分数10%的乙醇溶液溶解，过滤得到滤液A，该滤液A上微孔树脂柱分离，先以5倍柱体积的水溶液洗脱除去杂质，然后用5倍柱体积、体积分数30%的甲醇溶液、80%甲醇溶液进行台阶梯度洗脱，收集30%甲醇水洗脱物，该甲醇水洗脱物经真空度为0.06 MPa、温度为70 V减压干燥得酚酸类组分粗品36.4 go
[0019]其中:
粘毛鼠尾草醇提物与微孔树脂比例为I g:10 mL。
[0020]⑵硅胶柱富集:
将酚酸类组分粗品经硅胶柱色谱分离后，用5倍柱体积的氯仿-甲醇-水混合溶剂洗脱，按每份500 mL收集馏分，并经薄层色谱检测，其中展开剂为氯仿-甲醇-水混合溶剂，显色剂为体积浓度10%的浓硫酸乙醇溶液，合并Rf值为0.18-0.22的馏分；Rf值为0.18-0.22的馏分经真空度为0.06 MPa、温度为70 °0减压干燥即得淡黄色粉末状的迷迭香酸粗品(16.9 g，图 Do
[0021]其中:
娃胶柱的尺寸为30 mmX60 mm。
[0022]氯仿-甲醇-水混合溶剂是指将氯仿、甲醇、水按8:2:0.2体积比(mL / mL)混合均匀而得。
[0023]⑶亲水液相制备色谱精制:
迷迭香酸粗品用其质量2倍的体积分数为80%的甲醇溶液溶解，然后配制样品浓度为120.0 mg/mL,经0.45 μ m微孔滤膜过滤，得到滤液B，该滤液B经亲水液相制备色谱分离，经检测波长为330 nm的紫外检测器检测，收集制备色谱图中主要的色谱峰馏分，该色谱峰馏分经真空度为0.06MPa、温度为70 °0减压干燥即得纯度大于98%的白色粉末状的对照品(参见图2、图3)。
[0024]其中:
亲水液相制备色谱分离的工作参数是指色谱柱柱长250 mm、直径20 mm，亲水制备柱固定相为1ym XAmide,流动相为体积分数80%的乙腈-水溶液，进样体积为2.0 mL,流速为 15 ml ,/mi η η
[0025]实施例2从三种高山鼠尾草植物中制备迷迭香酸化学对照品的方法，包括以下步骤:
⑴微孔树脂(MCI)除杂:
100.0 g按常规方法制得的棕红色浸膏状的甘西鼠尾草醇提物用其质量5倍的体积分数30%的乙醇