作为parp抑制剂的化合物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于化学领域，具体地说，本发明涉及抗癌的化合物。
【背景技术】
[0002] PARP (EC2. 4. 2. 30)，也称为 PARS (对于聚（ADP-核糖）合成酶），或 ADPRT， 是116kDa的主要核内蛋白。它主要存在于几乎所有的真核生物中。该酶合成聚（ADP-核 糖)，一种由超过200个来自NAD的ADP-核糖单元组成的分支聚合物。聚（ADP-核糖）的 蛋白受体直接或间接地参与维持DNA完整性。这些受体包括：组蛋白、拓扑异构酶、DNA和 RNA聚合酶、DNA连接酶以及Ca2+和Mg2+依赖性内切核酸酶。
[0003] PARP-抑制剂增强细胞毒试剂致死的能力，无论通过放射增敏肿瘤细胞以增强电 离辐射还是通过化学增敏肿瘤细胞以增强化疗剂的细胞毒作用。因此，本领域仍然需要有 效而强效的PARP抑制剂，提高电离辐射和/或化疗剂对肿瘤细胞的致死作用，而引起的副 作用最小。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种PARP-抑制剂的的化合物。
[0005] 本发明根据一些与PARP相互作用的小分子化合物，其在母体骨架上引入肽（氨 基酸）链，得到与PARP相互作用的肽基取代化合物。
[0006] 本发明的上述技术目的是通过以下技术方案实现上述目的：
一种肽基取代的化合物，结构式如式I所示， 所述的Rl为三肽或四肽。
[0007] 所述的 Rl 的氨基酸序列为 GGR、GHK、GSR、⑶D、GQQ、GGS、GAP、GEGL、GMSW、GSEK、 GRKS。其中各个大写字母代表本领域熟知的氨基酸。
[0008] 更进一步提供上述的肽基取代化合物的制备方法，包括以下步骤： (1)合成Sl所示的化合物，参照CN101223175A的合成方法；
(2) 将SI与氯乙酸在碱性环境中进行烃基化反应，而后再与氯化亚砜进行氯代反应， 得到化合物S2或者采用本领域常用的其它的方式实现Cl的取代；
(3) 将S2与甘氨酸进行取代反应，得到化合物S3 ;
(4) 将S3的化合物分别与通过Fmoc基团保护的不同的氨基酸连接到Rink Amide AM 树脂进而发生缩合反应获得目的的化合物(如式I所示)。所述的缩合反应是通过多肽固相 合成法进行缩合反应后，用三氟乙酸脱去树脂，最终获得所述的肽基取代化合物。
[0009] 更进一步提供上述的肽基取代化合物在制备抗癌药物中的应用。
[0010] 所述的抗癌药物的剂型为片剂、丸剂、胶囊、注射剂、悬浮剂或乳剂。
[0011] 与现有技术相比，本发明具有以下有益效果： 1. 本发明的化合物对ADPRT具有很好的抑制活性，显示对癌细胞的良好的抑制活性， 从而对多种癌细胞株具有显著的抑制作用； 2. 本发明的化合物对正常细胞毒性小，在制备抗癌药物的应用中安全性高； 3. 本发明的化合物可以可制成各种剂型的抗癌药物，具有很高的医学价值和广阔的 市场前景。
【具体实施方式】
[0012] 实施例1目标化合物的制备 (1) 参照CN101223175A，得到化合物Sl ; (2) 将Sl与氯乙酸在碱性环境中进行烃基化反应，而后再与氯化亚砜进行氯代反应， 得到化合物S2或者采用本领域常用的其它的方式实现Cl的取代； (3) 将S2与甘氨酸进行取代反应，得到化合物S3 ; (4) 将S3的化合物分别与通过Fmoc基团保护的不同的氨基酸（GGR、GHK、GSR、OTD、GQQ、 GGS、GAP、GEGL、GMSW、GSEK、GRKS)连接到Rink Amide AM树脂进而发生缩合反应获得目的 的化合物。所述的缩合反应是通过多肽固相合成法进行缩合反应后，用三氟乙酸脱去树脂， 最终获得所述的肽基取代化合物。通过串联液质鉴定，化合物结构正确。
[0013] 实施例2肽基取代化合物的功能验证 人A375黑色素瘤细胞株，以RPMI1640培养液(含10%灭活小牛血清、100 U/mL青霉素 和100 U/mL链霉素）培养，生长于37 °C、5%C02培养箱内。
[0014] 消化制备细胞悬液I X 105/mL，在96孔板中，每孔加100 μ L细胞悬液，培养24 h 贴壁。换液，加入含不同浓度药物的培养液，每孔100 μ L，每一浓度设4个平行孔，化合物 终浓度为3.0 mg/L。继续培养72 h。每孔加20 μ L MTT (5 mg/mL)，放回培养箱，继续孵 育4 h。弃上清，每孔加入150 μ L DMS0,轻微振荡15 min，使结晶充分溶解，空白对照孔调 零，20 min内，选择490 nm波长，在自动焚光酶标仪上测定各孔的吸光度值(A)。实验重复 3次，取平均值。计算细胞增殖抑制率：抑制率％=( 1 -实验组A值/对照组A值)X 100%。 抑制结果如下：
本专利所述的化合物在浓度为3mg/L时，对癌细胞有明显抑制作用。
[0015] 同时采用MCF-7细胞进行试验，得到基本一致的实验结果。说明化合物具有广谱 的抗癌效果。
[0016] 实施例3肽基取代化合物的活体实验 参照CN101223175A中的方法；将B16细胞（2. 5X105)皮下接种到小鼠侧腹。卡尺测量肿 瘤，根据公式[(宽度)2X长度]/2计算体积。接种后6天，当肿瘤根瘤体积达到100-150mm3时，开始药物处理。给予本发明肽基取代的这些化合物（40mg/kg 口服（po))，20分钟后给 予替莫唑胺（l〇〇mg/kg腹腔内注射（ip))，每天一次，持续5天。每3天测量肿瘤根瘤，监测 黑色素瘤生长，持续3周。结果表明，肽基取代的化合物+TMZ联合治疗显著降低了 B16黑 色素瘤的生长，在第三周末，其结果如下：
从上述结果可以看出，本发明的化合物具有较好的抑制肿瘤繁殖的功能。具有较好的 实用价值。
【主权项】
1. 一种化合物，其特征在于，结构式如式I所示，所述的Rl为GGR、GHK、GSR、⑶D、GQQ、GGS、GAP、GEGL、GMSW、GSEK、GRKS或其它合适的 取代。2. 根据权利要求1所述的化合物在制备抗癌药物中的应用。3. 根据权利要求2所述的化合物在制备抗癌药物中的应用，其特征在于，所述的抗癌 药物的剂型为片剂、丸剂、胶囊、注射剂、悬浮剂或乳剂。4. 根据权利要求3所述的化合物在制备抗癌药物中的应用，其特征在于，所述的抗癌 药物为抗黑色素瘤癌药物。
【专利摘要】本发明涉及作为PARP抑制剂的式(I)化合物，其能用于治疗一种或多种聚(ADP-核糖)合成酶介导的疾病的药物，进一步的，其能够用于治疗癌症，特别是黑色素瘤癌。
【IPC分类】C07K5/083, C07K5/103, A61P35/00
【公开号】CN104961798
【申请号】CN201510361359
【发明人】杨洋
【申请人】杨洋
【公开日】2015年10月7日
【申请日】2015年6月28日