积雪草酸衍生物、其制备方法及其在制备抗抑郁药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于天然药物化学领域，涉及一种化合物，尤其涉及一种积雪草酸衍生物 及其制备方法及其在制备抗抑郁药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 积雪草酸，又名亚细亚酸，是从药用伞形科植物积雪草（Centella asiatica(L.) Urban)中提取的乌苏烷型五环三萜类化合物，其结构式为：
[0003]
[0004] 由于积雪草酸具有广泛的生物学活性，因此被广泛应用于天然药物化学领域，对 抗肿瘤、改善认知、抗糖尿病、抗炎、抑菌、促进伤口愈合等方面具有很好的效果。
[0005] 抑郁症是一种常见而易被忽略的精神疾病，以显著而持久的心境低落为主要临床 特征，是心境障碍的主要类型。临床可见心境低落与其处境不相称，情绪的消沉可以从闷闷 不乐到悲痛欲绝，自卑抑郁，甚至悲观厌世，可有自杀企图或行为；甚至发生木僵；部分病 例有明显的焦虑和运动型激越；严重者可出现幻觉、妄想等精神病性症状。每次发作持续 至少2周以上、长者甚至数年，多数病例有反复发作的倾向，每次发作大多数可以缓解，部 分可有残留症状或转为慢性。据世界卫生组织公布，各种抑郁症患病占全球人口 3% -5%。 预计到2020年，抑郁症将成为全球的第二大常见疾病。因此，迫切需要安全、高效、低廉的 抗抑郁药。
[0006] 目前临床上一线的抗抑郁药主要包括选择性5-羟色胺再摄取抑制剂（SSRI，代表 药物氟西汀、帕罗西汀、舍曲林、氟伏沙明、西酞普兰和艾司西酞普兰）、5_羟色胺和去甲肾 上腺素再摄取抑制剂（SNRI，代表药物文拉法辛和度洛西汀）、去甲肾上腺素和特异性5-羟 色胺能抗抑郁药（NaSSA，代表药物米氮平）等。传统的三环类、四环类抗抑郁药和单胺氧化 酶抑制剂由于不良反应较大，应用受到限制。
[0007] 发明人经多年研宄发现积雪草酸具有较好的抗抑郁作用，例如在CN1256090C中 详细提供了积雪草酸的抗抑郁作用，但是其生物利用度较差，因此需要寻找一种抗抑郁活 性好、生物利用度更优的积雪草酸衍生物。
【发明内容】
[0008] 本发明为解决现有技术中的上述问题提出的。
[0009] 本发明提供了一类新的积雪草酸衍生化合物。
[0010] 本发明还提供了一种上述积雪草酸衍生化合物的制备方法及其在制备抗抑郁药 物中的应用。
[0011] 为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
[0012] 本发明的第一个方面是提供一种符合通式（I)的积雪草酸衍生化合物或其药学 上可接受的盐或酯，或其任何光学异构体，或任何互变异构体：
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[0014] 其中，Rp R2、R3、R4、R5、R6、R 7、R8、R9、R1(l、R11可独立地相同或不同地为氢，羟基，羧 基，幾基，（^_6烧羟基，（^_6烧幾基，（^_6烷氧基，未取代或由（^_ 6烷基、|??素、羟基或(^_6烧氧 基一取代或多取代的c3_6环烷基，或未取代或由卤素一取代或多取代的C H烷基、C 2_6链烯 基或C2_6链炔基。
[0015] 上述化合物中，优选地，其中R6为甲羟基，1?9为-C00M，R ltl为羟基，为式（II)化合 物：
[0016]
[0017] 其中，
[0018] R1、R2、R3、R4、R5、R 7、R8、R1 i可独立地相同或不同地为氢，羟基，羧基，羰基，C ^烷羟 基，Cp6烧幾基，C K烷氧基，未取代或由C K烷基、卤素、羟基或C K烷氧基一取代或多取代 的c3_6环烷基，或未取代或由卤素一取代或多取代的C H烷基、C 2_6链烯基或C 2_6链炔基；
[0019] M为氢或碱金属。
[0020] 上述化合物中，更优选地，其中R1为羰基，R2为氢，R3为羟基。
[0021] 上述化合物中，更优选地，其中R1为羟基，R2为羟基，R 3为氢。
[0022] 本发明的第二个方面是提供一种上述任一所述积雪草酸衍生化合物的制备方法， 通过微生物对积雪草酸进行结构修饰得到的。
[0023] 上述制备方法中，优选地，所述微生物为粉红粘帚霉和/或刺孢小克银汉霉原变 种。
[0024] 上述制备方法中，优选地，所述制备方法的具体包括：
[0025] 步骤1 :积雪草酸的微生物转化反应：将积雪草酸溶解于有机溶剂中，配成浓度为 5_25g/l的底物溶液，加入到经培养的微生物菌种中进行微生物转化反应；
[0026] 步骤2 :产物的提取分离纯化：用有机萃取剂对步骤1得到的产物进行萃取，然后 浓缩、分离纯化得到权利要求1所述化合物。
[0027] 上述优选制备方法中，更优选地，所述步骤1中转化反应温度为20_30°C，更优选 为25-28°C，反应时间为至少5天，更优选为7-10天。
[0028] 本发明的第三个方面是提供一种如上述任一所述积雪草酸衍生化合物或由上述 任一所述制备方法制备的积雪草酸衍生化合物用于制备抗抑郁药物的应用。
[0029] 本发明的第四个方面是提供一种抗抑郁药物组合物，所述药物组合物包括具有抗 抑郁作用的上述任一所述积雪草酸衍生化合物或由上述任一所述方法制备的积雪草酸衍 生化合物，或它们的药学上可接受的盐或酯，或其任何光学异构体，或任何互变异构体，和 一种或多种可药用载体或赋形剂。
[0030] 本发明采用上述技术方案，与现有技术相比，具有如下技术效果：
[0031] 通过小鼠强迫游泳实验和小鼠悬尾实验研宄表明本发明的积雪草酸衍生化合物 具有较高的抗抑郁活性。
【具体实施方式】
[0032] 本发明提供一种符合通式（I)的积雪草酸衍生化合物或其药学上可接受的盐或 酯，或其任何光学异构体，或任何互变异构体：
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[0034] 其中，Rp R2、R3、R4、R5、R6、R 7、R8、R9、R1(l、R11可独立地相同或不同地为氢，羟基，羧 基，幾基，（^_6烧羟基，（^_6烧幾基，（^_6烷氧基，未取代或由（^_ 6烷基、|??素、羟基或(^_6烧氧 基一取代或多取代的c3_6环烷基，或未取代或由卤素一取代或多取代的C H烷基、C 2_6链烯 基或C2_6链炔基。
[0035] 上述化合物中，优选地，其中R6为甲羟基，1?9为-C00M，R ltl为羟基，为式（II)化合 物：
[0036]
[0037] 其中，
[0038] R1、R2、R3、R4、R5、R 7、R8、R1 i可独立地相同或不同地为氢，羟基，羧基，羰基，C η烷羟 基，CV6烧幾基，C i_6烷氧基，未取代或由C i_6烷基、卤素、羟基或C i_6烷氧基一取代或多取代 的C3_6环烷基，或未取代或由卤素一取代或多取代的C H烷基、C 2_6链烯基或C 2_6链炔基；
[0039] M为氢或碱金属。
[0040] 上述化合物中，更优选地，其中R1为羰基，R 2为氢，R3为羟基，其结构式优选为：
[0041]
[0042] 化学名称为：2-氧代-3 β，21 β，23-二羟基-12-條-28-乌苏酸。
[0043] 上述化合物中，更优选地，其中R1为羟基，R 2为羟基，R 3为氢，其结构式优选为：
[0044]
[0045] 化学名称为：2 α，3 β，7 β，23-四羟基-12-烯-28-乌苏酸。
[0046] 下面通过具体实施例对本发明进行详细和具体的介绍，以使更好的理解本发明， 但是下述实施例并不限制本发明范围。
[0047] 实施例1
[0048] 化合物1的制备及提取分离：
[0049] 在10瓶1000ml (每瓶400ml培养基）的三角瓶中以2%的接种量接入粉红粘帚霉 Gliocladium roseum CGMCC 3. 3657菌种，置恒温振荡器中，180rpm、27°C培养72小时后加 入300mg底物积雪草酸（溶于20ml乙醇中，每瓶加入2ml)，继续培养10天。发酵完成后， 过滤菌丝体，滤液用等体积的乙酸乙酯萃取3次，菌丝体用500ml乙酸乙酯超声提取三次， 每次30min，合并萃取液及提取液，将乙酸乙酯萃取液置旋转蒸发仪上浓缩至小体积，干燥， 分别得转化反应提取物（I. 8g)。
[0050] 将转化反应提取物用少量乙醇溶解，于三倍重硅胶拌样，25g硅胶分离，氯仿/甲 醇梯度洗脱（从97:3到90:10，共3000ml)，收集到3个流分：A (537. 7mg)，B (48. 6mg)， C(268.9mg)。流分A用半制备型高效液相色谱仪制备，流动相：甲醇/水/甲酸 (60:40:0. 05, V/V/V)，流速 3ml/min，检测波长：210nm，得到一个化合物 1(117. 4mg)，保留 时间为11. 72min。
[0051] 化合物2的制备及提取分离：
[0052] 在15瓶1000 ml (每瓶400ml培养基）的三角瓶中以2%的接种量接入刺孢小克 银汉霉原变种Cunninghamella echinulata CGMCC 3. 2000菌种，置恒温振荡器中，180rpm、 27°C培养72小时后加入500mg底物积雪草酸（溶于30ml乙醇中，每瓶加入2ml)，继续培养 10天。发酵完成后，过滤菌丝体，滤液用等体积的乙酸乙酯萃取三次，菌丝体用500ml乙酸 乙酯超声提取三次，每次30min，合并乙酸乙酯萃取液及提取液，置旋转蒸发仪上浓缩至小 体积，干燥，得转化反应提取物3. 5g。
[0053] 将转化反应提取物用少量乙醇溶解，于两倍重硅胶拌样，40g硅胶分离，氯仿/甲 醇梯度洗脱（从 99:1 到 92:8,共 5450ml)，收集到 9 个流分：A(1673. lmg)，B(189. 6mg)， C(65. Omg)，D(228. 2mg)，Ε(85· 6mg)，F(23. 7mg)，G(212. 7mg)，Η(34· Omg)，I (200. 4mg)。其 中流分G用半制备型高效液相色谱仪制备，流动相：甲醇/水/甲酸（69:31:0. 05, V/V/V)， 流速3ml/min，检测波长：210nm，得到一个化合物2(115. 3mg)，保留时间为12. 63min。
[0054] 实施例2
[0055] 化合物1的结构鉴定：
[0056] 化合物 1 为白色固体，HR-ESI-MS 给出 501. 3243 ([M-H]-)，结合 IH-NMR和 13C-NMR 推断确定分子式为C30H4606。IH-NMR (600MHz, pyridin