一种稳定、抗干扰能力强的α-羟丁酸脱氢酶试剂及检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及a-哲了酸脱氨酶检测技术领域，特别设及一种a-哲了酸脱氨酶检 测试剂，还设及使用此检测试剂的检测方法。
【背景技术】
[0002] a-哲了酸脱氨酶（a-皿DH)，屯、肌酶谱中酶的一种，实质上是LD化型同功酶，主 要来源于屯、肌、肾脏和红细胞，在屯、肌中含量最丰富。a-哲了酸脱氨酶活性的测定常用于 急性屯、肌梗死（AMI)辅助诊断，为Affl的临床诊断、病情观察、疗效分析和愈后估计提供了 有力的定量指标。其测定对Affl的诊断比LDH更为专一，更有价值。此外，a-哲了酸脱氨 酶增高主要见于屯、肌梗塞、活动性风湿性屯、肌炎、急性病毒性屯、肌炎、溶血性贫血等。
[0003] a-哲了酸脱氨酶（a-皿DH)常用的测定方法主要有比色法和连续监测法。比色 法是W前较为常用的检测方法，该法利用a-HBDH作用于过量的a-酬了酸生成a-哲了 酸，则剩余者与2,4-二硝基苯阱形成a-酬了酸苯腺，在碱性溶液中呈栋色，其颜色深浅与 酶活性成反比。该法操作简单，但试剂存在污染性较大，易受其他物质干扰等缺点。连续监 测法是目前较为常用的方法，利用a-HBDH催化a-酬了酸还原成a-哲了酸，同时使NADH 氧化成NAD，在340nm监测NADH的氧化速率与该酶活性成正比。该法简便快速、适用于全自 动生化分析，但该法试剂底物NADH稳定性不佳，需进一步改进稳定性。
[0004] 鉴于此，本发明在连续监测法的基础上，优化反应体系，采用PIPES缓冲液，添加 多种抗干扰物质和稳定剂，显著改善了试剂的抗干扰能力和稳定性。是一种更加稳定、抗干 扰能力强的a-哲了酸脱氨酶（a-HBDH)试剂。
【发明内容】
[000引本发明的目的是提供一种用于检测a-哲了酸脱氨酶（a-HBDH)的试剂及使用 该试剂检测a-哲了酸脱氨酶活性的方法。该试剂盒采用连续监测法，可W有效检测a-哲 了酸脱氨酶的活性，抗干扰能力强，稳定性好等优点。
[0006] 本发明的基本原理： a-HBDH催化a-酬了酸还原成a-哲了酸，同时使NADH氧化成NAD，在340皿监测NADH的氧化速率与该酶活性成正比。
[0007] 本发明是通过W下步骤得到的： 一种a-哲了酸脱氨酶检测试剂，包括试剂R1和试剂R2,所述试剂R1和试剂R2的组 成如下：
[0008] 所述的a-哲了酸脱氨酶检测试剂，试剂R1中缓冲液为25°C，抑为7. 4的嗽 嗦-1，4-二己横酸缓冲液。
[0009] 所述的a-哲了酸脱氨酶检测试剂，试剂R2中缓冲液为25°C，抑为7. 4的嗽 嗦-1，4-二己横酸缓冲液。
[0010] 所述的a-哲了酸脱氨酶检测试剂，所述防腐剂为NaNs。
[0011] 所述的a-哲了酸脱氨酶检测试剂来检测a-哲了酸脱氨酶活性的检测方法，使 用全自动生化分析仪利用速率法进行测定，检测主波长为340nm。
[0012] 所述的检测方法，R1试剂和R2试剂的比例为4:1。
[0013] 本发明的有益效果： 1) 采用新的缓冲体系和稳定剂，可W防止底物NADH氧化，显著改善了试剂的稳定性； 2) 采用两性表面活性剂十二烷基二甲基甜菜碱，不仅显著改善测定的性能，而且增强 了试剂的稳定性和抗干扰能力； 3)试剂的准确度和稳定性良好，价格便宜，使用方便，完全可W满足临床需要。
【附图说明】
[0014] 图1为两种试剂的相关性曲线图。
[0015] 图2为两种试剂有效期稳定性曲线图。
【具体实施方式】
[0016] 下面结合具体实施例对本发明进行进一步说明。
[0017] 实施例1 a-哲了酸脱氨酶的检测试剂，包试剂R1和试剂R2 : 1)其R1的组成为：
[001引 3 )本实施例试剂的使用方法； 本实施例描述的a-哲了酸脱氨酶检测试剂，在使用时采用具有双试剂功能的全自动 生化分析仪，如日立7180全自动分析仪等，利用速率法进行测定。将R1和R2按照4:1的 比例放置到对应的试剂位上，在样品盘的对应位置放置好蒸馈水、标准品和样本，操作如表 1 ： 表1实施例1试剂检测方法
计算；a-哲了酸脱氨酶活性（U/L) =(AA测定-AA标准）XC标准。
[001引实施例2 干扰性试验 取新鲜混合血清，分成2等份，然后将每等份再分成4等份，加入不同的干扰物质，使 其在血清中的浓度达到表2的要求。然后分别用实施例1所得试剂，与市场常见并认可的 a-哲了酸脱氨酶（a-HBDH)试剂同时对比测定血清中a-HBDH的活性，对照组测定结果与 加入不同干扰物质后各组的测定结果见表2。相对偏差（%) = (干扰样本的测定均值一对照 样本的测定均值）/对照样本的测定均值X100%。
[0020] 由表2可W看出，实施例1试剂在抗坏血酸《SOmgML、胆红素《1026ymol/L、甘 油S醋《2000mgAlL对测试结果没有明显干扰。而对照组试剂在上述浓度干扰物质存在 时，受到明显干扰，该说明通过优化反应缓冲体系、添加两性表面活性剂后，实施例1试剂 的抗干扰性能显著提高，远远优于对比试剂。
[0021] 表2实施例试剂抗干扰性能比较
[00过实施例3 相关性实验 利用实施例1配方配制试剂，与市场常见的国家食品药品监督管理局认可的某公司的a-哲了酸脱氨酶试剂盒进行对照检测，同时检测了 20个临床血清样本，检测结果如表3所 示。并获得了两种试剂的相关性曲线咖图1所示)，通过检测结果显示，两个试剂盒的相关 系数为0. 9994,说明了两者有极大的相关性。
[0023]表3实施例1试剂与市场常见并得到认可的a-哲了酸脱氨酶测定试剂盒对比检 测结果
[0024]实施例4 试剂的稳定性对比试验 对实施例1中的试剂，均匀分装13组，每组的试剂量为R1为20mL，R2为5mL ;并且取13 组市场常见的国家食品药品监督管理局认可的某公司的a-哲了酸脱氨酶（a-皿DH)试 剂盒作对照。放置到2-8°C冰箱中，每月的同一天取出一组试剂检测a-HBDH质控品(祀值 为260U/L)，检测结果如图2所示，实施例1试剂在2-8°C储存条件下比市场常见的a-哲 了酸脱氨酶（a-HBDH)测定试剂盒更加稳定。
[00巧]通过验证，本试剂与同类检测试剂对比相关性好，临床检测样本结果一致，能够达 到市场对产品的应用要求，并且抗干扰性能好，是一种更加稳定、良好的a-哲了酸脱氨酶 (a-HBDH)检测试剂。
【主权项】
1. 一种a -羟丁酸脱氢酶检测试剂，其特征在于包括试剂Rl和试剂R2,所述试剂Rl 和试剂R2的组成如下： 试剂Rl中含有 缓冲液...................................................50mmol/L, 乙二胺四乙酸二钠（EDTA-2Na).................................3mmol/L， a _ 酉同丁酸................................................Smmol /T,, 十二烷基二甲基甜菜碱.......................................2g/L， 防腐剂...................................................〇? 5g/L ； 2)试剂R2的组分为： 缓冲液..................................................50mmol/L, NADH...................................................0? 3mmol/L， BSA....................................................lg/L， 鹿糖...................................................l〇g/L, 海藻糖.................................................3g/L， 甘露醇................................................l〇g/L, 十二烷基二甲基甜菜碱.....................................2g/L, 防腐剂...................................................0.5g/L。2. 根据权利要求1所述的a _羟丁酸脱氢酶检测试剂，其特征在于试剂Rl中缓冲液为 25°C，pH为7. 4的哌嗪-1，4-二乙磺酸缓冲液。3. 根据权利要求1所述的a _羟丁酸脱氢酶检测试剂，其特征在于试剂R2中缓冲液为 25°C，pH为7. 4的哌嗪-1，4-二乙磺酸缓冲液。4. 根据权利要求1所述的a _羟丁酸脱氢酶检测试剂，其特征在于试剂Rl和R2中表 面活性剂为十二烷基二甲基甜菜碱。5. 根据权利要求1所述的a -羟丁酸脱氢酶检测试剂，其特征在于所述防腐剂为NaN3。6. 根据权利要求1所述的a _羟丁酸脱氢酶检测试剂来检测a _羟丁酸脱氢酶的检测 方法，其特征在于使用全自动生化分析仪利用速率法进行测定，检测主波长为340nm。7. 根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于Rl试剂和R2试剂的比例为4:1。
【专利摘要】本发明涉及α-羟丁酸脱氢酶检测技术领域，特别涉及一种α-羟丁酸脱氢酶检测试剂，试剂R1中含有缓冲液，乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na),α-酮丁酸,十二烷基二甲基甜菜碱，防腐剂；试剂R2中含有缓冲液，NADH，BSA，蔗糖，海藻糖，甘露醇，十二烷基二甲基甜菜碱，防腐剂。采用PIPES（哌嗪-1,4-二乙磺酸）缓冲液，添加稳定剂BSA,蔗糖，海藻糖，甘露醇，大大增强了试剂的稳定性；采用两性表面活性剂十二烷基二甲基甜菜碱，不仅显著改善测定的性能，而且增强了试剂的稳定性和抗干扰能力。
【IPC分类】C12Q1/32
【公开号】CN104988207
【申请号】CN201510403864
【发明人】甘宜梧, 李志明, 谭柏清, 李静, 王绮
【申请人】山东博科生物产业有限公司
【公开日】2015年10月21日
【申请日】2015年7月11日