可用于检测甲状腺疾病的蛋白质及该蛋白质的部分肽的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明主要涉及蛋白质、该蛋白质的部分肽、包含它们的检测器件及包含该检测 器件的检测试剂盒，特别是可用于甲状腺疾病的诊断或分型的蛋白质、该蛋白质的部分肽、 包含该蛋白质或该蛋白质的部分肽的检测器件及包含该蛋白质、该蛋白质的部分肽或该检 测器件的检测试剂盒。
【背景技术】
[0002] 自身免疫甲状腺疾病（autoimmunethyroiddisease，AITD)是由遗传和环境因 素共同引起的一组以甲状腺功能异常为主要表现的临床综合征。这组疾病属于器官特异性 自身免疫病，它们共同的特点是病变都累积于甲状腺；一致性的改变是存在淋巴细胞浸润； 血清中都存在针对甲状腺的自身抗体；各种疾病可以相伴发生或相互转化；存在遗传易感 性的证据，同时这组疾病又表现其各自的临床表现特点。
[0003] 各种甲状腺疾病导致的甲状腺功能异常可以影响全身各个系统的功能，主要表现 为甲状腺功能亢进症和减退症。甲状腺功能亢进症伴发的甲亢危象和甲亢性心脏病等并发 症严重时可危及患者的生命，甲状腺功能减退症则会大大增加心血管疾病、出生缺陷的风 险。在我国，部分地区的调查结果显示甲状腺功能亢进症和减退症的患病率均为2.0%左 右，亚临床甲亢和亚临床甲减的患病率分别达3. 9%和6. 1%。因此，甲状腺疾病仍然是影 响我国居民健康的重要疾病。
[0004]自身免疫甲状腺疾病，是除碘缺乏病以外，最主要的甲状腺类疾病。主要包括格雷 夫斯病、桥本甲状腺炎、萎缩性甲状腺炎、亚急性淋巴细胞性甲状腺炎，后3种通常称为自 身免疫性甲状腺炎。
[0005]目前医院对于自身免疫甲状腺疾病的诊断主要通过临床症状，甲状腺激素水平以 及检测相关甲状腺自身抗体来实现。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的在于提供一种蛋白质、该蛋白质的部分肽、包含该蛋白质或其部分 肽的检测器件、以及包含该检测器件的检测试剂盒，它们对甲状腺疾病的诊断或分型有用 的。本发明的目的在于提供该蛋白质或其部分肽在制备可用于甲状腺疾病的诊断或分型的 检测试剂盒中的用途。
[0007]S卩，本发明包含下述技术方案： 1. 由SEQIDNO:1所示的氨基酸序列构成的蛋白质，或者该蛋白质的下述部分肽： 由SEQIDNO: 2所示的氨基酸序列构成的多肽； 由SEQIDNO: 3所示的氨基酸序列构成的多肽； 2. -种检测器件，其包括： 固体载体，以及 连接于该固体载体上的项1所述的蛋白质、或者该蛋白质的所述部分肽。
[0008] 3.根据项2所述的检测器件，其中，所述固体载体是SJ改性硅胶。
[0009] 4.根据项2或3所述的检测器件，其用于甲状腺疾病的诊断或分型。
[0010] 5. -种检测试剂盒，其包括项2~4中任一项所述的检测器件。
[0011] 6.项5所述的检测试剂盒，其用于甲状腺疾病的诊断或分型。
[0012] 7.项1所述的蛋白质或者该蛋白质的所述部分肽在制备检测试剂盒中的用途。
[0013] 8.根据项7所述的用途，其中，所述检测试剂盒用于甲状腺疾病的诊断或分型。
[0014] 9.根据项7述的用途，其中，所述检测试剂盒包括项2~4中任一项所述的检测器 件。
[0015] 将本发明应用于甲状腺疾病的诊断或分型，能够取得令人满意的效果。
【附图说明】
[0016] 图1对SJ改性硅胶（iPDMS薄膜）的制作过程进行说明的示意图； 图2说明多肽微阵列点样模式的示意图； 图:T4显示含多肽LTP-71的点样模式对不同血清进行检测的结果照片； 图5~6显示含多肽LTP-72的点样模式对不同血清进行检测的结果的照片。
[0017] 发明的【具体实施方式】 本发明的蛋白质及其部分狀 在一个方面中，本发明提供一种对甲状腺疾病的诊断或分型有用的蛋白质（以下也 称作本发明的蛋白质）。该蛋白质由SEQIDNO:1所示的氨基酸序列组成，其是甲状腺疾 病自身抗原蛋白一甲状腺过氧化物酶（Hollowell，J.G.etal.SerumTSH，T(4)，and thyroidantibodiesintheUnitedStatespopulation(1988to1994):National HealthandNutritionExaminationSurvey(NHANESIII).JournalofClinical 489-499 (2002))的截短蛋白，其可以与甲状腺疾病病 人血清中的甲状腺疾病自身抗体特异性结合。因此，该蛋白质作为用于甲状腺疾病的诊断 或分型的工具是有用的。本发明的蛋白质可以采用本技术领域公知的方法来制备。例如， 可以基于上述氨基酸序列来推断编码它的核苷酸序列，并化学合成该核苷酸序列，将化学 合成的该核苷酸序列插入到已知的表达载体中，用该表达载体转化宿主细胞，培养该宿主 细胞并使之表达该蛋白质，然后采用常规方法进行分离纯化，从而获得本发明的蛋白质。
[0018] 在另一个方面中，本发明提供对对甲状腺疾病的诊断或分型有用的多肽（以下也 称作本发明的多肽）。这些多肽分别是： 多肽LTP-71，其由SEQIDNO:2所示的氨基酸序列组成；LTRVPMDAFQVGKFPEDFES多肽LTP-72,其由SEQIDNO:3所示的氨基酸序列组成；VGKFPEDFESCDSITGMNLE 如实施例所示，本发明的多肽对甲状腺疾病病人的血清呈阳性反应，而对健康正常人 或非甲状腺疾病病人血清呈阴性反应。因此，本发明的多肽作为甲状腺疾病的诊断或分型 工具是有用的。本发明的蛋白质或多肽可以用于制造可用于甲状腺疾病的诊断或分型的检 测器件(例如下述的本发明的检测器件）或检测试剂盒(例如下述的本发明的检测试剂盒)。
[0019] 本发明的多肽可以适宜采用（1)化学合成方法、或（2)酶反应合成方法等公知方 法来获得，但不限于此，其中化学合成更为简便。在化学合成本发明的多肽情况下，通过使 用肽合成仪合成或者半合成该多肽来进行。作为化学合成方法，可以列举出例如肽固相合 成法等。这样合成的肽可以采用常规手段例如离子交换色谱、反相高效液体色谱、亲和色谱 等进行纯化。这样的肽固相合成方法以及其后的肽纯化都是本技术领域公知的。
[0020] 此外，在通过酶反应生产本发明的多肽的情况下，可以采用例如国际公开小册子 W02004/011653号所述的方法。即，可以这样来生产：将一方的氨基酸或二肽的羧基末端被 酯化或酰胺化而得到的氨基酸或二肽、与氨基酸处于游离状态的氨基酸（例如羧基保护的 氨基酸）在肽合成酶的存在下进行反应，生成的二肽或三肽。作为肽合成酶，可以列举出： 具有生成肽的能力的微生物的培养物、由该培养物分离的微生物菌体、或该微生物的菌体 处理物、或该微生物来源的肽合成酶。
[0021] 而且，除了上述的酶方法、化学合成方法以外，还可以采用例如基因工程方法来生 产本发明的多肽。
[0022] 本发明的多肽的氨基酸序列可以采用常规的方法进行分析和确认，例如可以利用 质谱、色谱等方法来进行分析和确认。
[0023] 本发明的检测器件 在另一方面中，本发明还提供一种检测器件（本发明的检测器件），其包括固体载体、 以及连接于该固体载体上的本发明的蛋白质或本发明的多肽。所述检测器件对于甲状腺疾 病的诊断或分型是有用的。
[0024] 在本发明中，对固体载体没有特殊限制，只要是作为固体或不溶性材料（例如是 可以通过过滤、沉淀、磁性分离等从反应混合物中分离的材料）的载体即可。
[0025]构成固体载体的材料包括但不限于：硅胶（聚二甲基硅氧烷，PDMS)、纤维素、特氟 隆?、硝基纤维素、琼脂糖、葡聚糖、壳聚糖、聚苯乙烯、聚丙烯酰胺、聚酯、聚碳酸酯、聚酰胺、 聚丙烯、尼龙、聚偏二氟乙烯、胶乳、二氧化硅、玻璃、玻璃纤维、金、钼、银、铜、铁、不锈钢、铁 氧体、硅晶片、聚乙烯、聚乙烯亚胺、聚乳酸、树脂、多糖类、蛋白（白蛋白等）、碳或它们的组 合等。
[0026] 固体载体的形状包括但不要限于：珠子、磁珠、薄膜、微细管、滤膜、板、微量板、碳 纳米管、传感器芯片等。正如本技术领域公知的那样，薄膜或板等平坦的固体载体上可以设 置凹坑、沟槽、滤膜底部等。
[0027] 在本发明中，磁珠可以具有约25nnT约Imm范围的球体直径。在优选的实施方式 中，磁珠具有约50nnT约IOym范围的直径。磁珠的尺寸可以根据特定的用途来进行选择。
[0028] 在本发明中，由Sepharose等高交联球形琼脂糖制成的珠子具有约24iiIiT约 165iim范围的直径。优选地，高交联球形琼脂糖珠具有约24i