专利名称：用于诊断和治疗过敏性疾病的蛋白及其制备方法
技术领域：
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种通过ELISA法筛查猫毛过敏性疾病和脱敏疗法治疗猫毛过敏性疾病的蛋白及其制备方法。
背景技术：
过敏性疾病是当今世界上最常见、最顽固的疾患之一，涉及临床各科。目前有高达 20%的世界人口患有不同类型的过敏性疾病，从新生儿到中老年人各年龄段都有发生，没有明显的性别倾向，但有明显的遗传性倾向。过敏型变态反应也就是常说的I型变态反应，也是目前最常见的一个类型。其发生机理是外源性或内源性抗原(反应原)刺激机体的淋巴结，肝、脾等器官的单核吞噬系统，引起浆细胞反应，产生特异性反应素，即免疫球蛋白E(IgE)。IgE分子以其Fc端附着于肥大细胞或嗜碱粒细胞的IgE受体上。此时机体即处于致敏状态，被致敏的肥大细胞再次与特异性致敏反应原接触时，就引进触发反应，导致毛细血管扩张、水肿、渗出、平滑肌痉挛、外分泌活动亢进等一系列临床表现，最常见的过敏症临床表现是花粉症、反应性鼻炎、 过敏休克、支气管哮喘、荨麻疹、湿疹等等。引起过敏的主要的变应原有尘螨、花粉、屋尘、霉菌、动物毛发、羽毛等，其中动物毛发是一种强烈的变应原。随着生活水平的提高，越来越多的家庭拥有宠物，猫是比较常见的一种宠物。在日常生活中猫脱落的毛发、皮屑漂浮在空气中，通过鼻、口呼吸进入人体内， 极易诱发过敏性哮喘、鼻炎、结膜炎、皮炎。猫的唾液则通过体表接触或经鼻、口进入人体内引发过敏反应。猫毛皮屑或唾液引起过敏的同为一个分子量为40KD的糖蛋白，其等电点为4. 5。 其病理机制为由特异性免疫球蛋白E介导的I型速发性过敏反应。
发明内容
本发明的目的是提供用于诊断和治疗过敏性疾病的蛋白及其制备方法，它利用脱敏治疗的原理，通过依次吸收由小至大剂量的药物，使病人逐步提高对外来变应原的耐受性，从而达到减轻发作或控制发作的目的，可用于过敏性哮喘、鼻炎、慢性荨麻疹等症的治疗。为了解决背景技术所存在的问题，本发明是采用以下技术方案它的制备方法为1)取宠物猫毛前三天内不用洗发液洗宠物，部位不限，取猫毛后剪碎备用。2)在约50克猫毛，加入2倍体积的丙酮，清洗脱脂2-5小时；倾倒出丙酮，加入新的丙酮，重复清洗脱脂2次；3)三次脱脂后，倾倒出上层丙酮，保留下层固体，于室温自然吹干，待残留猫毛末中毫无丙酮刺激气味即为丙酮挥干标准；4)取晾干后的猫毛按照1 25W/V浸于含0.4%笨酚的碳酸氢钠盐水液中(5gNaCl/L ；2. 75g NaHC03/L ；pH = 8. 2，Coca，s Solution)，即每 25 毫升碳酸氢钠盐水液中有1克脱脂后的猫毛，4°C磁力搅拌10小时；间隔冷浸过夜，再磁力搅拌，至少72小时后取上层清夜；离心，除去沉淀，将上清调节PH到5. 0，加入(NH4) 2S04至80%饱和度，4°C搅拌 30-60分钟，离心，收集沉淀；将沉淀用少量碳酸氢钠盐水液重新溶解，并用同样缓冲液对样品进行透析，除去(NH4)2SO4,得到猫毛盐溶蛋白的粗提物；将粗提物先用阴离子交换柱分离纯化，再用凝胶柱分离纯化；收集活性峰，蒸馏水透析后，得到分子量为40kD的猫毛过敏原，加50%甘油保存。所述的阴离子交换柱可以是Resource Q阴离子交换柱，凝胶柱可以是kphacryl S-200凝胶柱。本发明具有以下有益效果利用脱敏治疗的原理，通过依次吸收由小至大剂量的药物，使病人逐步提高对外来变应原的耐受性，从而达到减轻发作或控制发作的目的，可用于过敏性哮喘、鼻炎、慢性荨麻疹等症的治疗。
具体实施例方式本具体实施方式
采用以下技术方案它的制备方法为1)取宠物猫毛前三天内不用洗发液洗宠物，部位不限，取猫毛后剪碎备用；2)在约50克猫毛，加入2倍体积的丙酮，清洗脱脂2-5小时；倾倒出丙酮，加入新的丙酮，重复清洗脱脂2次；3)三次脱脂后，倾倒出上层丙酮，保留下层固体，于室温自然吹干，待残留猫毛末中毫无丙酮刺激气味即为丙酮挥干标准；4)取晾干后的猫毛按照1 25W/V浸于含0.4%笨酚的碳酸氢钠盐水液中 (5gNaCl/L ；2. 75g NaHC03/L ；pH = 8. 2，Coca，s Solution)，即每 25 毫升碳酸氢钠盐水液中有1克脱脂后的猫毛，4°C磁力搅拌10小时；间隔冷浸过夜，再磁力搅拌，至少72小时后取上层清夜；离心，除去沉淀，将上清调节PH到5. 0，加入(NH4) 2S04至80%饱和度，4°C搅拌 30-60分钟，离心，收集沉淀；将沉淀用少量碳酸氢钠盐水液重新溶解，并用同样缓冲液对样品进行透析，除去(NH4)2SO4,得到猫毛盐溶蛋白的粗提物；将粗提物先用阴离子交换柱分离纯化，再用凝胶柱分离纯化；收集活性峰，蒸馏水透析后，得到分子量为40kD的猫毛过敏原，加50%甘油保存。所述的阴离子交换柱可以是Resource Q阴离子交换柱，凝胶柱可以是kphacryl S-200凝胶柱。本具体实施方式
利用脱敏治疗的原理，通过依次吸收由小至大剂量的药物，使病人逐步提高对外来变应原的耐受性，从而达到减轻发作或控制发作的目的，可用于过敏性哮喘、鼻炎、慢性荨麻疹等症的治疗。
权利要求
1.用于诊断和治疗过敏性疾病的蛋白及其制备方法，其特征在于它的制备方法为1)取宠物猫毛前三天内不用洗发液洗宠物，部位不限，取猫毛后剪碎备用。2)在约50克猫毛，加入2倍体积的丙酮，清洗脱脂2-5小时；倾倒出丙酮，加入新的丙酮，重复清洗脱脂2次。3)三次脱脂后，倾倒出上层丙酮，保留下层固体，于室温自然吹干，待残留猫毛末中毫无丙酮刺激气味即为丙酮挥干标准。4)取晾干后的猫毛按照1 25W/V浸于含0.4%笨酚的碳酸氢钠盐水液中(5gNaCl/L; 2. 75g NaHC03/L ；pH = 8. 2，Coca，s Solution)，即每25毫升碳酸氢钠盐水液中有1克脱脂后的猫毛，4°C磁力搅拌10小时；间隔冷浸过夜，再磁力搅拌，至少72小时后取上层清夜； 离心，除去沉淀，将上清调节pH到5. 0，加入(NH4)2SO4至80%饱和度，4°C搅拌30-60分钟， 离心，收集沉淀；将沉淀用少量碳酸氢钠盐水液重新溶解，并用同样缓冲液对样品进行透析，除去(NH4)2SO4,得到猫毛盐溶蛋白的粗提物；将粗提物先用阴离子交换柱分离纯化，再用凝胶柱分离纯化；收集活性峰，蒸馏水透析后，得到分子量为40kD的猫毛过敏原，加50% 甘油保存。
2.根据权利要求1所述的用于诊断和治疗过敏性疾病的蛋白及其制备方法，其特征在于所述的阴离子交换柱为Resource Q阴离子交换柱。
3.根据权利要求1所述的用于诊断和治疗过敏性疾病的蛋白及其制备方法，其特征在于所述的凝胶柱为kphacryl S-200凝胶柱。
全文摘要
用于诊断和治疗过敏性疾病的蛋白及其制备方法，它涉及生物技术领域。它的制备方法为取猫毛后剪碎，在约50克猫毛，加入2倍体积的丙酮，清洗脱脂2-5小时；反复脱脂共3次。脱脂后的猫毛浸于含0.4％笨酚的碳酸氢钠盐水液中，4℃磁力搅拌10小时；离心，除去沉淀，将上清调节pH到5.0，加入(NH4)2SO4至80％饱和度，4℃搅拌30-60分钟，离心，收集沉淀；将沉淀用少量碳酸氢钠盐水液重新溶解，除去(NH4)2SO4，得到猫毛盐溶蛋白的粗提物；将粗提物先用阴离子交换柱分离纯化，再用凝胶柱分离纯化；收集活性峰，蒸馏水透析后，得到分子量为40kD的猫毛过敏原，加50％甘油保存；本发明可用于过敏性哮喘、鼻炎、慢性荨麻疹等症的治疗。
文档编号A61P37/08GK102391371SQ20111034184
公开日2012年3月28日 申请日期2011年11月2日 优先权日2011年11月2日
发明者王永昌 申请人:上虞常春生物技术有限公司