一种扇贝内脏低聚糖的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明公开了一种扇贝内脏低聚糖的制备方法，属于低聚糖制备领域。
【背景技术】
[0002]贝类是我国重要的水产品之一，我国9.3万平方公里浅海滩涂里，生活着700余种海洋贝类。随着科学研究和养殖技术的不断发展，特别是人工育苗技术的突破，贝类养殖工艺不断革新，养殖品种和区域不断扩大，现年产量已逾1000万吨，居世界第一位。贝类以鲜食为主，加工以干制为主。由其闭壳肌干制的贝柱，是非常名贵的海珍品。冻贝柱及干贝柱的加工和出口量非常大，成为我国大宗出口的水产品。在加工贝柱的过程中产生了大量的下脚料，主要是扇贝内脏(包括消化道、循环系统、肾脏以及性腺等)，约占整个扇贝重量的30%，除小部分被制作成虾饲料低价出售，大部分被丢弃，造成极大的资源浪费和环境污染。
[0003]扇贝多糖是扇贝体内重要的生理活性物质，在提高免疫力、抗肿瘤等方面具有广阔的发展前景。海洋动物多糖直接作为产品开发还存在一定的障碍，首先由于它是高分子化合物，不可能穿越身体的不同屏障甚至是细胞膜，因此对海洋动物多糖进行降解，分离得到的低聚糖片段并研究其构效关系具有十分重要的意义。扇贝内脏中多糖含量较高，如果从中提取多糖，再转化成低聚糖，并加工成精深加工产品，不仅可以增加奸夷扇贝的综合利用率，提高经济附加值，而且也可以形成变废为宝的新兴产业，形成新的经济增长点。
【发明内容】
[0004]本发明主要解决的技术问题:针对目前针对目前扇贝内脏中营养价值高，尤其是的多糖含量高，但不能被人体直接吸收，而且大量的扇贝内脏被丢弃容易造成极大的资源浪费和环境污染的问题，提供了一种扇贝内脏低聚糖的制备方法，本发明先用扇贝内脏中制成内脏酶解液，再从酶解液中提取出扇贝内脏粗多糖，对多糖进行脱蛋白质后，向其中加入甲酰胺和氯磺酸制成的混酸，进行搅拌反应，反应后加入乙醇进行，最后将醇沉进行分离得上清液，再进行透析、浓缩、干燥、粉碎即得一种淡黄色扇贝内脏低聚糖，本发明将扇贝内脏采用酶法提取多糖，再用甲酰胺-氯磺酸法转化成低聚糖，该反应条件温和，低聚糖得率高，而且还可以提高废弃扇贝内脏的综合利用率，变废为宝，对环境友好。
[0005]为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是:
1.一种扇贝内脏低聚糖的制备方法，其特征在于具体制备步骤为:
2.(I)收集新鲜的扇贝，开壳后取扇贝内脏，之后放入组织捣碎机，加入扇贝内脏总质量5?10倍的蒸馏水，进行捣碎、打浆处理，制得扇贝内脏组织浆液；
3.(2)将上述扇贝内脏组织浆液放入浓缩罐，减压至1100?1200Pa，浓缩处理10?15min，之后过滤去除杂质得到扇贝内脏过滤液，再将扇贝内脏过滤液移入酶解罐中，用质量浓度为20%的氢氧化钠溶液调节pH至7?8，加入扇贝内脏过滤液总质量0.2?0.3%的木瓜蛋白酶，温度控制在40?50 °C，放在磁力搅拌机上以300?400r/min的转速搅拌15?20min后，密封酶解3?4h，得扇贝内脏酶解液；
4.(3)将上述制得的扇贝内脏酶解液水浴加热至90?95°C，保温10?20min，对其进行灭酶处理，待灭酶后的扇贝内脏酶解液冷却至室温后，移入卧式离心机，设置转速为4000?5000r/min，离心处理10?5min，分离去除沉淀得到上清液；
5.(4)将得到的上清液倒入锥形瓶，加入上清液3倍体积的质量浓度为95%的乙醇溶液，用薄膜密封瓶口，置于冷冻装置中在4?6°C下醇沉12?18h，醇沉液用高速离心机在5000?6000r/min的转速下离心处理10?15min后，分离去除上清液得到沉淀物，将沉淀物放入烘箱在105?110°C下烘干，得到扇贝内脏粗多糖；
6.(5)称取100?200g上述制得的扇贝内脏粗多糖倒入500mL烧杯中，加入200?300mL蒸馏水，用玻璃棒搅拌均匀，之后逐滴加入质量浓度为3?5%的三氯乙酸，直至多糖溶液中沉淀不再产生为止，过滤去除沉淀，得脱蛋白后的扇贝内脏多糖溶液；
7.(6)量取6?1mL质量浓度为80%的甲酰胺加入附有冷凝管和搅拌器的250mL三颈瓶中，之后移入冰水浴，在4?5°C下用恒压滴液漏斗逐滴加入9?1mL质量浓度为90%的氯磺酸，启动搅拌器，以300?400r/min的转速搅拌均匀，制得混酸；
8.(7)将上述制得的混酸按体积比为1:1的比例加入到扇贝内脏多糖溶液中，常温下用磁力搅拌机搅拌反应5?6h，搅拌转速为500?600r/min，之后向反应液中加入其体积2?3倍的质量浓度为90%的乙醇溶液，进行醇沉12?18h ;
9.(8)将上述醇沉用高速离心机在7000?8000r/min的转速下离心处理10?15min后，分离去除沉淀物得到上清液，将上清液装入透析袋，用流动蒸馏水透析3?5天后，将透析物移入浓缩罐，减压至800?900Pa进行浓缩处理，浓缩液用真空冷冻干燥机干燥后，经气流粉碎机粉碎并过50?60目标准筛，即得一种淡黄色扇贝内脏低聚糖。
[0006]本发明的应用方法:将本发明制备出的低聚糖可以应用在食品、保健品等领域，它是替代蔗糖的新型功能性糖源，可以起到减缓衰老、通便、抑菌、防癌、抗癌、减轻肝脏负担、提高营养吸收率的作用。
[0007]本发明的有益效果是:
(I)本发明将扇贝内脏采用酶法提取多糖，再用甲酰胺-氯磺酸法转化成低聚糖，反应条件温和，低聚糖得率高；
(2 )本发明可以提高废弃扇贝内脏的综合利用率，变废为宝，对环境友好。
【具体实施方式】
[0008]首先收集新鲜的扇贝，开壳后取扇贝内脏，之后放入组织捣碎机，加入扇贝内脏总质量5?10倍的蒸馏水，进行捣碎、打浆处理，制得扇贝内脏组织浆液；将扇贝内脏组织浆液放入浓缩罐，减压至1100?1200Pa，浓缩处理10?15min，之后过滤去除杂质得到扇贝内脏过滤液，再将扇贝内脏过滤液移入酶解罐中，用质量浓度为20%的氢氧化钠溶液调节pH至7?8，加入扇贝内脏过滤液总质量0.2?0.3%的木瓜蛋白酶，温度控制在40?50°C，放在磁力搅拌机上以300?400r/min的转速搅拌15?20min后，密封酶解3?4h，得扇贝内脏酶解液；将制得的扇贝内脏酶解液水浴加热至90?95°C，保温10?20min，对其进行灭酶处理，待灭酶后的扇贝内脏酶解液冷却至室温后，移入卧式离心机，设置转速为4000?5000r/min，离心处理10?5min，分离去除沉淀得到上清液；将得到的上清液倒入锥形瓶，加入上清液3倍体积的质量浓度为95%的乙醇溶液，用薄膜密封瓶口，置于冷冻装置中在4?6°C下醇沉12?18h，醇沉液用高速离心机在5000?6000r/min的转速下离心处理10?15min后，分离去除上清液得到沉淀物，将沉淀物放入烘箱在105?110°C下烘干，得到扇贝内脏粗多糖；称取100?200g上述制得的扇贝内脏粗多糖倒入500mL烧杯中，加入200?300mL蒸馏水，用玻璃棒搅拌均匀，之后逐滴加入质量浓度为3?5%的三氯乙酸，直至多糖溶液中沉淀不再产生为止，过滤去除沉淀，得脱蛋白后的扇贝内脏多糖溶液；量取6?1mL质量浓度为80%的甲酰胺加入附有冷凝管和搅拌器的250mL三颈瓶中，之后移入冰水浴，在4?5°C下用恒压滴液漏斗逐滴加入9?1mL质量浓度为90%的氯磺酸，启动搅拌器，以300?400r/min的转速搅拌均匀，制得混酸；将制得的混酸按体积比为1:1的比例加入到扇贝内脏多糖溶液中，常温下用磁力搅拌机搅拌反应5?6h，搅拌转速为500?600r/min，之后向反应液中加入其体积2?3倍的质量浓度为90%的乙醇溶液，进行醇沉12?18h ;将醇沉用高速离心机在7000?8000r/min的转速下离心处理10?15min后，分离去除沉淀物得到上清液，将上清液装入透析袋，用流动蒸馏水透析3?5天后，将透析物移入浓缩罐，减压至800?900Pa进行浓缩处理，浓缩液用真空冷冻干燥机干燥后，经气流粉碎机粉碎并过50?60目标准筛，即得一种淡黄色扇贝内脏低聚糖。
[0009]实例I
12.首先收集新鲜的扇贝，开壳后取扇贝内脏，之后放入组织捣碎机，加入扇贝内脏总质量5倍的蒸馏水，进行捣碎、打浆处理，制得扇贝内脏组织浆液；将扇贝内脏组织浆液放入浓缩罐，减压至llOOPa，浓缩处理lOmin，之后过滤去除杂质得到扇贝内脏过滤液，再将扇贝内脏过滤液移入酶解罐中，用质量浓度为20%的氢氧化钠溶液调节pH至7，加入扇贝内脏过滤液总质量0.2%的木瓜蛋白酶，温度控制在40 °C，放在磁力搅拌机上以300r/min的转速搅拌15min后，密封酶解3h，得扇贝内脏酶解液；将制得的扇贝内脏酶解液水浴加热至900C，保温lOmin，对其进行灭酶处理，待灭酶后的扇贝内脏酶解液冷却至室温后，移入卧式离心机，设置转速为4000r/min，离心处理10?5min，分离去除沉淀得到上清液；将得到的上清液倒入锥形瓶，加入上清液3倍体积的质量浓度为95%的乙醇溶液，用薄膜密封瓶口，置于冷冻装置中在4?6°C下醇沉12?18h，醇沉液用高速离心机在5000?6000r/min的转速下离心处理1min后，分离去除上清液得到沉淀物，将沉淀物放入烘箱在105°C下烘干，得到扇贝内脏粗多糖；称取10g上述制得的扇贝内脏粗多糖倒入500mL烧杯中，加入200mL蒸馏水，用玻璃棒搅拌均匀，之后逐滴加入质量浓度为3%的三氯乙酸，直至多糖溶液中沉淀不再产生为止，过滤去除沉淀，得脱蛋白后的扇贝内脏多糖溶液；量取6mL质量浓度为80%的甲酰胺加入附有冷凝管和搅拌器的25