一种茯苓多糖的提取方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及多糖的提取技术领域，特别涉及一种工艺简单、时间短、条件温和的茯 苓多糖的提取方法。
【背景技术】
[0002] 茯苓Poria cocos (Schw.) Wolf是多孔菌科真菌类的干燥菌核，为传统中药。始载 于古典医著《神农本草经》，收载于我国历年版《中国药典》，具有渗湿利尿、和胃健脾、宁心 安神的功效；现代药理学研究表明，茯苓多糖具有调节免疫功能、抗衰老、抗过敏、抗肿瘤、 抗炎等生物活性。茯苓多糖应用十分广泛，是既可防治疾病，又能保健强身的药食两用的中 药大品种。
[0003] 几年来，茯苓多糖的提取一般有热水浸提法、碱液浸提法、酸法浸提法、酶解法等， 这些方法是先得到茯苓多糖的粗体物，然后再经过纯化工艺得到茯苓多糖的精品。热水浸 提法浸提时间长且多糖提取率低；酸碱浸提法浸提工艺繁琐，浸提条件剧烈，极易破坏多糖 的立体结构，使其生物活性降低；酶解法成本高，只能作用于限定的底物等，限制了它的广 泛应用。
[0004] 因此研发一种新的茯苓多糖提取方法是该领域科研技术人员急待解决的新课题 之一。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于克服上述不足之处，提供一种提取工艺简单、时间缩短、条件温 和，所得茯苓多糖含量高、生物活性强的新方法。
[0006]本发明涉及一种茯苓多糖的提取方法，包括以下步骤：
[0007] (1)将茯苓粉碎后加入4-6倍水膨胀，按1 % -5 % (w/w)加入酵母菌和乳酸菌，进 行发酵，发酵温度为28°C -31°C，pH值为3. 1-4. 0,时间12-16小时；
[0008] (2)将发酵液混合均勾，加入复合酶制剂，该复合酶制剂包括纤维素酶、半纤维 素酶、淀粉酶和果胶酶，添加量为1. 2%-2. 5% (w/w)，作用温度为36°C-42°C，pH值为 3. 5-4. 2,时间为10-12小时；
[0009] (3)在步骤⑵后的反应物中加入乙醇，使反应物含醇量达到80% (w/w)，之后将 醇析物喷雾干燥，得水溶性茯苓多糖。
[0010] 在上述方案的基础上，所述酵母菌和乳酸菌的重量比为1:2。
[0011] 在上述方案的基础上，步骤（2)中纤维素酶、半纤维素酶、淀粉酶和果胶酶的重量 比为：2:2 :1 :1。
[0012] 在上述方案的基础上，步骤（3)中所用乙醇浓度为95%。
[0013] 本发明的有益效果是：提取工艺简单，提取工艺时间缩短，提取工艺条件温和，所 得茯苓多糖含量高、生物活性强，相对于现有提取技术，具有显著地效果。本发明方法是一 个完整的工艺方法，方法中所有步骤前后环环相扣，步骤中的任一参数都是经过大量的实 验得到的，任一参数都是配合整个步骤来实现最终目的，其改变都会影响整个方法的最终 结果。
【具体实施方式】
[0014] 以下结合较佳实施例，对依据本发明提供的【具体实施方式】详述如下：
[0015] 实施例1
[0016] -种茯苓多糖的提取方法：按如下步骤进行：（每份按10g计）
[0017] (1)将茯苓粉碎后加入4倍水膨胀，按1 % (w/w)加入酵母菌和乳酸菌，两者比例 为1:2,进行发酵，发酵温度为28°C，pH值为3. 1，时间12小时；
[0018] (2)将发酵液混合均勾，加入复合酶制剂，该复合酶制剂包括纤维素酶、半纤维素 酶、淀粉酶和果胶酶，纤维素酶、半纤维素酶、淀粉酶和果胶酶的重量比为：2:2 :1 :1;添加 量为1. 2% (w/w)，作用温度为36°C，pH值为3. 5,时间为10小时；
[0019] (3)在步骤⑵后的反应物中加入浓度为95%的乙醇，使反应物含醇量达到80% (w/w)，将醇析物喷雾干燥，可得水溶性茯苓多糖70. 1 %左右。
[0020] 实施例2
[0021] (1)将茯苓粉碎后加入5倍水膨胀，按3% (w/w)加入酵母菌和乳酸菌，进行发酵， 酵母菌和乳酸菌的重量比为1:2,发酵温度为30°C，pH值为3. 5,时间14小时；
[0022] (2)将发酵液混合均勾，加入复合酶制剂，该复合酶制剂包括纤维素酶、半纤维素 酶、淀粉酶和果胶酶，纤维素酶、半纤维素酶、淀粉酶和果胶酶的重量比为：2:2 :1 :1;添加 量为2% (w/w)，作用温度为39°C，pH值为4,时间为11小时；
[0023] (3)在步骤⑵后的反应物中加入浓度为95%的乙醇，使反应物含醇量达到80% (w/w)，之后将醇析物喷雾干燥，得水溶性茯苓多糖70. 2 %。
[0024] 实施例3
[0025] -种茯苓多糖的提取方法：其特征是按如下步骤进行：（每份按10g计）
[0026] (1)将茯苓粉碎后加入6倍水膨胀，按5% (w/w)加入酵母菌和乳酸菌，两者比例 为1:2,进行发酵，发酵温度为31°C，pH值为4. 0,时间16小时；
[0027] (2)将发酵液混合均勾，加入复合酶制剂，该复合酶制剂包括纤维素酶、半纤维素 酶、淀粉酶和果胶酶，纤维素酶、半纤维素酶、淀粉酶和果胶酶的重量比为：2:2 :1 :1;添加 量为2. 5% (w/w)，作用温度为42°C，pH值为4. 2,时间为12小时；
[0028] (3)在步骤⑵后的反应物中加入浓度为95%的乙醇，使反应物含醇量达到80% (w/w)，将醇析物喷雾干燥，可得水溶性茯苓多糖70. 15%。
[0029] 临床试验：
[0030] 以茯苓多糖对家畜机体的免疫增强作用表示茯苓多糖的生物活性。
[0031] 临床实验动物选用50日龄猪120头。将猪隔离单独饲养，饲喂全价饲料，并随机 分为6组，每组20头，6组饲养环境完全相同，实验时间共进行7天；1组为空白对照组，不 做任何处理；2组为药物对照组，为碱液浸提法所得茯苓多糖；3组为药物对照组，为酸液浸 提法所得茯苓多糖；4组为药物对照组，为热水浸提法所得茯苓多糖；5组为药物对照组，为 酶解法所得茯苓多糖；6组为本发明组合物组，将本发明产品（本发明实施例2所制得的组 合物）喂食猪，4个药物对照组和本发明组合物组所用剂量完全相同，每日1次；口服后通 过胃肠道吸收达到提高免疫力的目的。
[0032] 试验指标：B淋巴细胞EAC花环率=B淋巴细胞EAC阳性数/细胞总数X 100%， T淋巴细胞ANAE阳性率=T淋巴细胞ANAE阳性数/细胞总数X 100%。
[0033] 表1对猪B淋巴细胞EAC花环率的影响％
[0034]
[0035] 经统计分析，本发明组的B淋巴细胞EAC花环形成率极显著高于各药物对照组和 空白对照组（P〈〇. 01)，说明在提高B淋巴细胞EAC花环形成率方面，本发明组合物效果显 著。
[0036] 表2对猪T淋巴细胞ANAE花环率的影响％
[0037]
[0038] 经统计分析，本发明组合物组对T淋巴细胞ANAE花环形成率极显著高于各药物对 照组和空白对照组（P〈〇. 01)，说明在提高淋巴细胞ANAE花环形成率方面，本发明组合物组 效果显著。
[0039] 上述茯苓多糖的提取方法进行的详细描述，是说明性的而不是限定性的，可按照 所限定范围列举出若干个实施例，因此在不脱离本发明总体构思下的变化和修改，应属本 发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种茯苓多糖的提取方法，其特征在于，包括以下步骤： (1) 将茯苓粉碎后加入4-6倍水膨胀，按1% -5% (w/w)加入酵母菌和乳酸菌，进行发 酵，发酵温度为28°C -31 °C，pH值为3. 1-4. 0,时间12-16小时； (2) 将发酵液混合均匀，加入复合酶制剂，该复合酶制剂包括纤维素酶、半纤维素酶、淀 粉酶和果胶酶，添加量为1. 2% -2. 5% (w/w)，作用温度为36°C -42°C，pH值为3. 5-4. 2,时 间为10-12小时； (3) 在步骤（2)后的反应物中加入乙醇，使反应物含醇量达到80% (w/w)，之后将醇析 物喷雾干燥，得水溶性茯苓多糖。2. 根据权利要求2所述的茯苓多糖的提取方法，其特征在于，步骤（1)中酵母菌和乳酸 菌的重量比为1:2。3. 根据权利要求2所述的茯苓多糖的提取方法，其特征在于，步骤（2)中纤维素酶、半 纤维素酶、淀粉酶和果胶酶的重量比为：2:2 :1 :1。4. 根据权利要求3所述的茯苓多糖的提取方法，其特征在于，步骤（3)中所用乙醇浓度 为 95%。5. 根据权利要求1-4任一项所述的茯苓多糖的提取方法，其特征在于，包括以下步骤： (1) 将茯苓粉碎后加入5倍水膨胀，按3% (w/w)加入酵母菌和乳酸菌，进行发酵，酵母 菌和乳酸菌的重量比为1:2,发酵温度为30°C，pH值为3. 5,时间14小时； (2) 将发酵液混合均匀，加入复合酶制剂，该复合酶制剂包括纤维素酶、半纤维素酶、 淀粉酶和果胶酶，纤维素酶、半纤维素酶、淀粉酶和果胶酶的重量比为：2:2 :1 :1 ;添加量为 2% (w/w)，作用温度为39°C，pH值为4,时间为11小时； (3) 在步骤⑵后的反应物中加入浓度为95%的乙醇，使反应物含醇量达到80% (w/ w)，之后将醇析物喷雾干燥，得水溶性茯苓多糖。
【专利摘要】本发明涉及一种茯苓多糖的提取方法，包括以下步骤：(1)将茯苓粉碎后加入4-6倍水膨胀，按1％-5％(w/w)加入酵母菌和乳酸菌，两者比例为1:2，进行发酵，发酵温度为28℃-31℃，PH3.1-4.0，时间12-16小时；(2)将发酵液混合均匀，加入复合酶制剂，该复合酶制剂包括纤维素酶、半纤维素酶、淀粉酶和果胶酶，添加量为1.2％-2.5％(w/w)，作用温度为36℃-42℃，PH3.5-4.2，时间为10-12小时；(3)乙醇醇沉反应物，加入乙醇使反应物含醇量达到80％(w/w)，将醇析物喷雾干燥，可得水溶性茯苓多糖70.2％左右。本发明的有益效果是：提取工艺简单，提取工艺时间缩短，提取工艺条件温和，所得茯苓多糖含量高、生物活性强，相对于现有提取技术，具有显著地效果。
【IPC分类】C12P19/04, C12P19/14, C08B37/00
【公开号】CN105132491
【申请号】CN201510695472
【发明人】汪安国, 刘文利, 王尚明
【申请人】山东迅达康兽药有限公司
【公开日】2015年12月9日
【申请日】2015年10月23日