一种副鸡禽杆菌菌液的灭活方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及菌种灭活领域，更具体地说设及一种副鸡禽杆菌菌液的灭活方法。
【背景技术】
[0002] 副鸡禽杆菌的生命特性比较脆弱，是一类酶系统不完全的革兰氏阴性杆菌，生长 不仅需要丰富的碳源和氮源，还需要健康动物血清、酵母浸出液及辅酶等特殊营养物质，而 且培养条件苛刻，给菌液的发酵培养带来困难，目前副鸡禽杆菌的扩大培养所获得活菌数 不高，且培养周期长。同时目前生产中所使用的副鸡禽杆菌制苗菌液的灭活工艺生产成本 相对较高，同时生产工艺复杂，不利于疫苗的规模化生产。
【发明内容】
[0003]本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供了一种副鸡禽杆菌菌液的灭活方 法。
[0004] 为实现上述目的，本发明采用W下技术方案：
[0005] 一种副鸡禽杆菌制苗用菌液的灭活方法，其特征在于，所述的灭活方法中灭活剂 的终浓度为0. 005~0.02%的硫柳隶溶液
[0006] 进一步地，所述的灭活溫度为2~8°C
[0007] 进一步地，所述的灭活时间为5~8天，每日揽拌1~3次。
[0008] 本发明的有益效果在于：该灭活工艺生产成本相对较低、生产工艺相对简单，是便 于推广的最佳灭活工艺，对疫苗的产业化生产工艺有很大的提高和改善。
【具体实施方式】
[0009] 下面详细说明本发明的具体实施，有必要在此指出的是，W下实施只是用于本发 明的进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，该领域技术熟练人员根据上述本
【发明内容】
对本发明做出的一些非本质的改进和调整，仍然属于本发明的保护范围。
[0010] 菌种：副鸡禽杆菌WF株或YC株，由山东华宏生物工程有限公司提供。
[0011] 培养基：鸡肉汤培养基、鸡肉汤琼脂培养基、半合成培养基，由本公司实验室自制。
[0012] 灭活试验用菌液：根据规程，由实验室进行副鸡禽杆菌菌液的制备，经活菌计 数，WF株菌液中副鸡禽杆菌浓度为4.8Xl〇9CFU/ml，YC株菌液中副鸡禽杆菌浓度为 3. 6Xl〇9c即/ml，2倍浓缩菌液。
[0013] 试验动物：4周龄SPF鸡，购自济南斯帕法斯家禽有限公司。
[0014] 灭活剂：硫柳隶，购自上海沪丰生物科技有限公司。
[0015] 实施例1硫柳隶浓度及灭活时间的确定
[0016] 将WF株或YC株菌液分别分成4份，在菌液中分别加入1 %硫柳隶溶液，使其终浓 度分别为0. 0025%、0. 005%、0.Ol%、0. 02%，置2~8°C条件下灭活，每日揽拌2次，分别 于灭活后4日、5日、6日、7日、8日取样进行灭活检验，取样接种于含60ug/mlNADH和10% 鸡血清的鸡肉汤琼脂平板，37°C培养24小时，观察有无细菌生长。
[0017] 分别W不同硫柳隶浓度对菌液进行灭活，灭活不同时间后取样进行灭活检验，试 验结果见表1。
[0018] 表1不同硫柳隶浓度、不同灭活时间灭活试验结果
[0020] 注：" + "表示有菌生长，"一"表示无菌生长。
[0021] 在2~8°C灭活溫度条件下，0. 0025%比例（v/v)硫柳隶溶液灭活8日均不能彻 底灭活副鸡禽杆菌WF株或YC株菌液，终浓度0. 005%的硫柳隶溶液灭活7日能彻底灭活 副鸡禽杆菌WF株或YC株菌液，终浓度0.Ol%的硫柳隶溶液灭活6日能彻底灭活副鸡禽杆 菌WF株或YC株菌液，终浓度0. 02 %的硫柳隶溶液灭活5日能彻底灭活副鸡禽杆菌WF株 或YC株菌液，考虑到灭活的效果W及实际生产条件和规模化生产的复杂性，最终确定用于 菌液灭活的最佳硫柳隶溶液浓度为0. 005%~0. 02%，在2~8°C灭活5~8日。
[0022] 实施例2灭活抗原菌液对试验动物安全检验
[0023] 取经灭活的副鸡禽杆菌WF株或YC株菌液，分别颈部皮下注射4周龄SPF鸡各10 只，1.Oml/只，连续观察14天，记录注射灭活抗原菌液对试验鸡的局部和全身反应。
[0024] 取灭活彻底的副鸡禽杆菌WF株菌液和YC株菌液，W1.Oml/只颈部皮下注射4周 龄试验鸡10只，连续观察14日，详细试验结果见表2。
[00巧]表2灭活菌液对试验动物安全检验结果
[0027] 用WF株或YC株灭活抗原菌液对4周龄SPF鸡进行安全试验，颈部皮下注射LOml/ 只，试验鸡均10/10健活，注射部位均未出现红肿及其它炎性反应，采食量及饮水量均正 常，证明W0. 〇1%、〇. 02%终浓度硫柳隶溶液灭活的抗原菌液对试验鸡均具有较好的安全 性。
【主权项】
1. 一种副鸡禽杆菌制苗用菌液的灭活方法，其特征在于，所述的灭活方法中灭活剂的 终浓度为0. 005~0. 02%的硫柳汞溶液。2. 根据权利要求1所述的一种副鸡禽杆菌制苗用菌液的灭活方法，其特征在于，所述 的灭活温度为2~8°C。3. 根据权利要求1所述的一种副鸡禽杆菌制苗用菌液的灭活方法，其特征在于，所述 的灭活时间为5~8天，每日搅拌1~3次。
【专利摘要】本发明提供了一种副鸡禽杆菌菌液的灭活方法，属于菌种灭活领域。其灭活剂的终浓度为0.005～0.02％的硫柳汞溶液，所述的灭活温度为2～8℃，灭活时间为5～8天，每日搅拌1～3次。本发明所述的灭活工艺生产成本相对较低、生产工艺相对简单，且灭活彻底，是便于推广的最佳灭活工艺，对疫苗的产业化生产工艺有很大的提高和改善。
【IPC分类】C12N1/36, C12R1/01
【公开号】CN105296413
【申请号】CN201510897198
【发明人】王永明, 张效伟, 王晓丽, 于海光, 赵飞飞, 任明明, 李士成
【申请人】山东华宏生物工程有限公司
【公开日】2016年2月3日
【申请日】2015年12月7日