下：
[0036]体形微小，身体全长1. 5-1. 9mm，约为体宽的2. 8-3. 1倍，雌虫体色黄褐，雄虫近黑 色。触角键状部第1、第2节间有嵌隔。额面轻微向口上片边缘抬起，侧缘突成半圆状，与眼 缘的距离为小眼直径的2-3倍；雌虫额面平或稍凹，表面光滑，刻点细密匀称，茸毛密集，近 边缘的茸毛较长；雄虫额面宽而下凹，刻点粗糖，茸毛短且疏，较不显眼。刚毛最长约达一半 眼距。
[0037] 前胸背板：长约为宽的1. 10-1. 16倍，自基部起一半侧缘横直，前缘弓成宽半圆 形。前缘有约18个银齿。背板顶部位于中部或中部偏前，前半部为鱗状瘤区，瘤多有缺刻， 呈4-6排清晰的近同屯、圆状排列，背板前缘着生的鱗状瘤数目超过12,同排相邻的鱗状瘤 常在基部相连，常于背中线附近出现重叠。背板后半部分为刻点区，表面平缓而光滑，刻点 稍大且密。背板前部表被刚毛较长，随鱗状瘤整齐排列，后部刚毛较疏细。
[0038]銷翅：长约为宽的1. 8-1. 9倍，约为前胸背板1. 7倍长，自基部起3/4侧缘横直，銷 翅末端纯圆。銷翅斜面较睹，刻点较大，排列成行形成刻点沟，其中第1、第2沟刻点较浅， 除第1刻点沟于斜面处下陷外，其余刻点沟不下陷。沟间部平滑，宽度约为刻点沟的1倍或 I. 5倍；第I沟间部十分宽，并明显向上隆起；第2沟间部与I等宽，平滑略呈革质；第1、第 3沟间部上各有1列极疏的刻点。位于刻点沟内短且细的刚毛延伸至翅銷基部，沟间部刚毛 大部分较疏地排列于銷翅斜面的基数刻点沟上。雄虫第1、第2沟间部各有1列小颗粒。
[0039] 先对待检测样品进行形态学鉴定，W节约成本；然后对与胡桃木细小蠢形态特别 接近不容易区分的样本结合分子生物学鉴定技术鉴定，W进行区分，降低了对鉴定工作者 的要求，使得鉴定工作更方便易行。
[0040] 为了使鉴定更方便易行，并且降低外界因素对结果的干扰，优选地，所述第一引物 对、第二引物对、第立引物对和第四引物对的PCR扩增同时进行。一般是将各引物对的PCR 体系在同一台PCR仪中进行PCR扩增。
[0041] 优选地，所述PCR扩增所用的退火溫度为50°C±rc。经试验验证，W该退火溫度 进行PCR扩增，特异性好。
[0042] 进一步地，所述PCR反应体系的体积为15-50y1。优选地，所述PCR反应体系的体 积为 20-25 ^1。
[004引如，PCR体系的体积为25y1，其成分如下：
[0044]
[0045]
[0046] 其中，若是第一引物对的PCR体系，则PrimerF为P1-F，PrimerR为Pl-R;若是 第二引物对的PCR体系，则PrimerF为P2-F，PrimerR为P2-R;若是第S引物对的PCR体 系，则PrimerF为P3-F，PrimerR为P3-R;若是第四引物对的PCR体系，则PrimerF为 P4-F，PrimerR为P4-R。
[0047] 其中，各引物的浓度可W有小幅度的变动，如10%上下的浮动均能得到很好的 PCR扩增效果。
[004引另外，相应地，PCR体系的体积还可W为15iil、20iil、30yl、50iil等等，相应地， 体系内的各成分相应的缩小或扩大即可。
[0049] 待检测样品的基因组提取物是将整个待检测样品提取基因组，提取方法按照常规 的方法或是市售产品推荐的方法进行即可。由于胡桃木细小蠢及其相似物均是成群出现， 每群个体均是一致的，因此，取其中的一只进行检测，即可判断整群个体是否为胡桃木细小 晶。
[0050] 由于待检测样品个体比较小，提取得到的基因组的含量有限，优选地，所述PCR反 应体系中，待检测样品的基因组提取物的含量为50ngW上，优选为100-2(K)ng。W该含量的 基因组提取物作为模板进行PCR检测，即可得到明显的条带，从而进行判定。
[0051] 优选地，所述PCR扩增的程序为：94-95 °C预变性3-5min，进入扩增循环；每个循环 中先于94-95°C变性28-30S，后降溫至50°C±rC退火30-35S，再升溫至72°C延伸45-50S， 共35-40个循环；最后于72°C保持5-lOmin。
[0052] 与现有技术相比，本发明的有益效果为：
[005引 （1)本发明采用组合PCR对引物特异性要求较低即允许引物扩增几个物种，因此， 弓I物设计相对容易，运种设计引物的理念，不仅增加了引物的选择空间降低引物设计的难 度，而且可W充分利用基因不同区域的进化差异，使分析更加客观准确。
[0054] (2)本发明通过分析物种亲缘关系，设计了四对引物，运些引物特异性强，敏感度 高，重复性好，能很稳定、快速的鉴定是否为胡桃木细小蠢，方便快捷，可靠性高。
[00巧](3)本发明先对物种进行形态学鉴定，准确度高，鉴定周期短，方便易行，为了进一 步确保对物种鉴定的准确性，区分形态相似的近缘物种，采用分子生物学鉴别的方法加W 辅助，鉴定结果可靠性高，适合大众检测。
[0056] (4)本发明还限定了PCR体系的一些具体参数，W使PCR结果更为稳定可靠。
【附图说明】
[0057]为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，W下将对实施例或现 有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
[0058] 图1为本发明实施例1中胡桃木细小蠢与Pityophthorus lau1:us Eichhoff的 PCR产物电泳结果图。
【具体实施方式】
[0059] 下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会 理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体 条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为 可W通过市售获得的常规产品。
[0060] 实施例1
[0061] 一、取胡桃木细小蠢白标准样品和其近缘物种Pityophthorus Iau化S Eichhoff 样品，进行形态学鉴定，形态学鉴定依据具体如下：
[0062] 体形微小，身体全长1. 5-1. 9mm，约为体宽的2. 8-3. 1倍，雌虫体色黄褐，雄虫近黑 色。触角键状部第1、第2节间有嵌隔。额面轻微向口上片边缘抬起，侧缘突成半圆状，与眼 缘的距离为小眼直径的2-3倍；雌虫额面平或稍凹，表面光滑，刻点细密匀称，茸毛密集，近 边缘的茸毛较长；雄虫额面宽而下凹，刻点粗糖，茸毛短且疏，较不显眼。刚毛最长约达一半 眼距。
[0063] 前胸背板：长约为宽的1. 10-1. 16倍，自基部起一半侧缘横直，前缘弓成宽半圆 形。前缘有约18个银齿。背板顶部位于中部或中部偏前，前半部为鱗状瘤区，瘤多有缺刻， 呈4-6排清晰的近同屯、圆状排列，背板前缘着生的鱗状瘤数目超过12,同排相邻的鱗状瘤 常在基部相连，常于背中线附近出现重叠。背板后半部分为刻点区，表面平缓而光滑，刻点 稍大且密。背板前部表被刚毛较长，随鱗状瘤整齐排列，后部刚毛较疏细。
[0064] 銷翅：长约为宽的1. 8-1. 9倍，约为前胸背板1. 7倍长，自基部起3/4侧缘横直，銷 翅末端纯圆。銷翅斜面较睹，刻点较大，排列成行形成刻点沟，其中第1、第2沟刻点较浅， 除第1刻点沟于斜面处下陷外，其余刻点沟不下陷。沟间部平滑，宽度约为刻点沟的1倍或 1. 5倍；第1沟间部十分宽，并明显向上隆起；第2沟间部与1等宽，平滑略呈革质；第1、第 3沟间部上各有1列极疏的刻点。位于刻点沟内短且细的刚毛延伸至翅銷基部，沟间部刚毛 大部分较疏地排列于銷翅斜面的基数刻点沟上。雄虫第1、第2沟间部各有1列小颗粒。
[0065] 二、胡桃木细小蠢白标准样品和其近缘物种PityophthorusIau化SEichhoff样 品均符合上述形态特征，然后进行分子生物学鉴定。
[0066] 1、提取待测样品基因组
[0067] 提取待测样品基因组采用杭州新景生物基因组DNA小量试剂盒提取，提取步骤参 照产品说明书进行，具体步骤如下：
[0068] 1)将整个待检测样本进行液氮研磨；
[0069] 2)加入 250 "BufferSl;
[0070] 3)加入等体积的BufferS2,混匀；
[0071] 4)加入 350Ji1BufferS3 混匀，12000Xg离屯、IOmin;
[0072] 5)吸取上清并转移至制备管（置于2ml离屯、管中），12000Xg离屯、Imin,弃滤液；
[007引6)将制备管置回离屯、管，加500 Buff