。由于加热时，微量离屯、管内会产生水气，因此可稍微短暂离屯、将水气离下至混合 液中。于此步骤时，可观察到混合液开始产生分层现象；接着，W人工操作移液管吸取下层 之水层中之粗萃取液约190μ1移入新的微量离屯、管。加入200μ1缓冲液AUBufferAL) 至水相层液，并加W混合均匀，供后续核酸萃取程序使用。本对照例是W管柱吸附法（层 析管柱分离方法）进行核酸分离：加入200μ1100%化OH至粗萃取液中混合均匀后，将所 有液体加入层析管柱中，W层析管柱分离方法进行核酸分离，是采用QIAGEN核酸纯化套组 伯IAGEN;QIAampDNAFFPETissueKit;Cat.No. 56404)之层析管柱；其操作步骤是依循其 产品使用说明，故不在此详述，最终步骤是W60μ1ATE缓冲液分别冲提并取得大型、中型、 小型样本之核酸产物。
[0068] 根据上述实验例2与对照例2所得之核酸产物，进一步检测其浓度与核酸质量，其 结果列示于表1。由表1可知，无论是大型、中型、小型样本，使用本发明之生物样本处理装 置所得之核酸产物浓度均高于人工前处理；就特定波长吸光值（0D)之比例（0D260/280) 而言，核酸产物值NA)质量同于对照之组别（小型样本）或略优于对照之组别（大型、中型 样本）；就特定波长吸光值（0D)之比例（0D260/230)而言，自动化前处理组别之有机溶剂 的残量状况近似于人工前处理组别。W上数据显示使用本发明之生物样本处理装置，确实 适用于自动化核酸萃取，并可有效取得浓度高而质量亦佳之核酸产物。
[0069] 表1.核酸产物检测结果
根据上述实验例2与对照例2所得之核酸产物，进一步W聚合酶连锁反应（W下简称PCR)方法，扩增稳定表现基因GADPH的DNA，确认其质量是否适用于后续分析，相关结果如 图12所示。参见图12,根据实验例2与对照例2 :对大型样本分离取得之核酸产物PCR检 测结果12a显示；对中型样本分离取得之核酸产物PCR检测结果12b显示；对小型样本分 离取得之核酸产物PCR检测结果1化显示。其中，针对大型样本，W人工前处理之电泳结果 M5与自动化前处理之电泳结果A5表现相似，惟前者稍弱于后者；针对中型样本，W人工前 处理之电泳结果M6显示其未产出PCR产物，而自动化前处理之电泳结果A6则显示其产出 PCR产物；针对小型样本，W人工前处理之电泳结果M7显示其未产出PCR产物，而自动化前 处理之电泳结果A7则显示其产出PCR产物。由此可见，使由本发明之自动化前处理方法所 得之核酸质量良好，足W直接用于后续的分析，而人工前处理之组别虽然可测得核酸浓度， 却无法顺利产出PCR产物，显示其质量仍不足W直接使用于核酸分析，需要额外加工或纯 化方可使用。
[0070]除了前述萃取DM之实施内容外，本发明亦适用于萃取RNA，W下列举实验例3与 对照例3说明采用本发明之生物样本处理装置萃取RNA之具体内容。W下实验例3与对照 例3是W管柱吸附法（层析管柱分离方法）进行RNA分离，是采用QIAGEN核酸纯化套组 (QIAGEN;RNeasyFFPEKit;化t.No. 73504)之层析管柱；其操作步骤是依循产品说明，不 详述于此。 阳0川实验例3: 首先，将FFPE样本折成数等分（每段不大于0. 5公分）尽可能不折断置入本发明之 生物样本处理装置中，旋紧盖体，由本装置之吸管端汲取裂解液试剂。此裂解液试剂是由 400μl二甲苯、150μlP邸缓冲液与10μl蛋白酶K(proteinaseK)混合而成。接着，于 56°C环境下加热并进行吸吐混合1小时，再接着，在90°C环境下加热并吸吐混合1小时，之 后将所有液体吸至生物样本处理装置中于室溫静置10分钟，可观察到混合液开始产生分 层现象，由本装置之吸管端将下层之水层中之粗萃取液约140μ1移入新的试管槽后，残留 组织则留在生物样本处理装置中。接着，于冰上静置3分钟，接着加入水层总体积十分之一 体积的DNA酶缓冲液W及10μ1的DNA酶原液，上下翻转微量离屯、管W混合均匀，于室溫静 置15分。加入320μ1RBC缓冲液混合均匀后，再加入1200μ1 100%化0Η，并将所有的样 本混合液加入层析管柱中，最终步骤是W60μ1RNase-化ee纯水冲提取得核酸产物。 阳07引对照例3 : 首先，将将FFPE样本折成数等分（每段不大于0. 5公分）尽可能不折断置入微量离 屯、管，加入裂解液。此裂解液试剂是由400μ1二甲苯、150μ1P邸缓冲液与10μ1蛋白酶 K(p;roteinaseΚ)混合而成。接着，加W震荡混合10秒钟，取得一混合液。之后进行加热 步骤，是将前述混合液于56°C环境下加热15分之后，于室溫下稍加静置，同时可将加热器 升溫至80°C，待加热器溫度完成，于80°C环境下加热混合液达15分。加热时，管柱内会产 生水气，因此可稍微短暂离屯、将水气离下至混合液中。于此步骤时，可观察到混合液开始产 生分层现象，上层为有机层，下层为水层，而残留组织则留在水层之中。接着，W移液管吸取 下层之水层中之粗萃取液约140μ1移入新的微量离屯、管后，于冰上静置3分钟，接着加入 总水相液层总体积十分之一体积的DNA酶缓冲液W及10μ1的DNA酶原液，上下翻转微量 离屯、管W混合均匀，于室溫静置15分。加入320μ1RBC溶液混合均匀后，再加入1200μ1 100%化0Η，并将所有的样本混合液加入层析管柱中，最终步骤是W60μ1RNase-化ee纯 水冲提取得核酸产物。
[0073] 根据前述本发明之生物样本处理装置，提供了 一种可直接应用于现有自动化核酸 萃取设备之生物样本处理装置，除可W有效提升效能，并更能有效地大幅减低既有技术与 人工操作可能衍生之气雾（aerosol)形成、交叉污染、感染危害等不良效应。
[0074] 虽然本发明已将各种较佳实施例掲露如前述，然其并非用W限定本发明，任何熟 习本领域技艺者，在不脱离本发明之精神和范围内，当可作些许之更动与润饰，因此本发明 之专利保护范围须视本说明书所附之申请专利范围所界定者为准。
【主权项】
1. 一种生物样本的核酸产物萃取方法，其特征在于：提供一生物样本处理装置 (100)，包含一管柱（1030)，具有一第一管体部（10)及一第二管体部（30)，所述管柱（1030) 为中空且两端开放，使所述管柱（1030)内形成一流道，且所述第一管体部（10)之一开放端 缘形成一第一开口（11)，所述第二管体部（30)之一开放端缘形成一第二开口（33)，其中， 所述管柱（1030)之内径沿一轴向方向自所述第一开口（11)向所述第二开口（33)逐渐缩 减，使所述第一管体部（10)之平均内径大于所述第二管体部（30)之平均内径，以及一托座 (60)，同轴设置于所述第一管体部（10)中，且所述托座（60)具有复数通孔（6010); 提供一固态生物样本（56)，是放置所述托座（60)上； 提供一裂解液试剂（70)，使所述的裂解液试剂（70)通过所述第二管体部（30)之所述 第二开口（33)并通过所述托座（60)上的所述通孔进入所述第一管体部（10)中，以取得一 核酸产物。2. 根据权利要求1所述之生物样本的核酸萃取方法，其特征在于，所述的裂解液试剂 (70)，是进一步由一自动化核酸萃取设备提供。3. 根据权利要求1所述之生物样本的核酸萃取方法，其特征在于，所述的固态生物样 本（56)为一FFPE样本。4. 根据权利要求2所述之生物样本的核酸萃取方法，其特征在于，所述的裂解液试剂 (70)为至少一石蜡溶剂、一裂解溶剂及一蛋白酶所混成之混合溶剂。5. 根据权利要求2所述之生物样本的核酸萃取方法，其特征在于，所述的裂解液试剂 (70)为至少一二甲苯、一PKD緩衝液及一蛋白酶所混成之混合溶剂。6. 根据权利要求2所述之生物样本的核酸萃取方法，其特征在于，所述的裂解溶剂为 一细胞裂解液。7. 根据权利要求1所述之生物样本的核酸萃取方法，其特征在于，所述的核酸产物为 DNA或RNA其中之一。8. 根据权利要求2所述之生物样本的核酸萃取方法，其特征在于，所述的核酸产物为 DNA或RNA其中之一。
【专利摘要】本发明公开了一种生物样本的核酸产物萃取方法，包含：提供一生物样本处理装置，包含管柱，具有第一及第二管体部，管柱为中空且两端开放，使管柱内形成流道，且第一管体部之一开放端缘形成第一开口，第二管体部之一开放端缘形成第二开口，其中，管柱之内径沿一轴向方向自第一开口向第二开口逐渐缩减，使第一管体部之平均内径大于第二管体部之平均内径，以及托座，且托座具有复数通孔;提供一固态生物样本，放置于托座上；提供一裂解液试剂，使的裂解液试剂通过第二管体部之第二开口并通过托座上的该些通孔进入第一管体部中，以取得一核酸产物。本发明生物样本的核酸产物萃取方法适用于自动化核酸萃取，以提高整体效能与质量。
【IPC分类】C12M1/24
【公开号】CN105331525
【申请号】CN201410404610
【发明人】钟挺豪, 吕秋莹, 林旻仪, 官振群
【申请人】冠研（上海）企业管理咨询有限公司
【公开日】2016年2月17日
【申请日】2014年8月15日