流控检测芯片放入光驱式离心机，1200rpm离心lmin，置于温控设备中进行扩增。
[0041](3)扩增结束后，日光灯或紫外灯或成像设备中观察检测结果
[0042]本发明用于转基因成分、食源性致病微生物、动植物物种鉴定等分子检测，具有以下优点:
[0043](I)广品闻度集成，体积较小，易于携带。
[0044](2)产品适用范围广，通过结合不同的扩增引物，可以检测不同靶标序列。
【附图说明】
[0045]图1底板层设计图
[0046]图2引物层设计图
[0047]图3反应层设计图
[0048]图4进样层设计图
[0049]图5微流控芯片整体效果图
【具体实施方式】
[0050]为了能更加清楚的说明本发明的方法，下面对本发明的芯片制备过程和使用方法做以详细的说明。
[0051]实施例1
[0052](I)用途:用于食品中转基因成分检测，靶标基因为玉米内源基因ZSSIIb、大豆内源基因Lectin、水稻内源基因SPS、CAMV35S启动子、NOS终止子和BAR基因。
[0053](2)制备过程:使用计算机软件绘制出微流控检测芯片每一层的结构和通道图形，用于后期的喷绘、打印和刻蚀；在底板层上喷绘出20个序号标示点和20个反应区；在引物层上应用打印技术在20个反应区、每个反应区12个反应小室共240个区域喷墨打印寡聚核苷酸引物序列，分别为玉米内源基因ZSSIIb、大豆内源基因Lectin、水稻内源基因SPS、CAMV35S启动子、NOS终止子和BAR基因，每个引物2次重复，冷冻干燥保存；在反应层上刻蚀出20个样品室、通道和240个反应室，每个反应室体积约I μ L ;在进样层上打印出进样标线，刻蚀出20个进样孔；对应叠加、贴合4层结构，形成三维立体的微流控检测芯片。
[0054](3)应用方法:使用DNA提取试剂盒提取20个待测样品DNA模板，稀释至20-100ng/ μ L ;取I μ L模板、加入环状等温扩增反应体系(含有钙黄绿素荧光显色剂)共16 μ L，混匀，使用排枪5通量分4次加入20个样品室。
[0055](2)将加完样品的微流控检测芯片放入光驱式离心机，1200rpm离心lmin，置于恒温加热块上65°C进行扩增I小时。
[0056](3)扩增结束后，日光灯或紫外灯或成像设备中观察检测结果，通过观察反应小室中是否有颜色变化，判定样品中是否含有转基因成分靶标基因。
[0057]实施例2
[0058](I)用途:用于食品中动物源性成分检测，靶标分别为真核生物18S、猪、山羊、绵羊、牛、7jC牛、鸡、鸭、鹅、鼠、狐狸、猫共12个。
[0059](2)制备过程:使用计算机软件绘制出微流控检测芯片每一层的结构和通道图形，用于后期的喷绘、打印和刻蚀；在底板层上喷绘出20个序号标示点和20个反应区；在引物层上应用打印技术在20个反应区、每个反应区12个反应小室共240个区域喷墨打印寡聚核苷酸弓I物序列，分别为真核生物18S、猪、山羊、绵羊、牛、水牛、鸡、鸭、鹅、鼠、狐狸、猫共12个，冷冻干燥保存；在反应层上刻蚀出20个样品室、通道和240个反应室，每个反应室体积约I μ L ;在进样层上打印出进样标线，刻蚀出20个进样孔；对应叠加、贴合4层结构，形成三维立体的微流控检测芯片。
[0060](3)应用方法:使用DNA提取试剂盒提取20个待测样品DNA模板，稀释至20-100ng/ μ L ;取I μ L模板、加入环状等温扩增反应体系(含有钙黄绿素荧光显色剂)共16 μ L，混匀，使用排枪5通量分4次加入20个样品室。
[0061](2)将加完样品的微流控检测芯片放入光驱式离心机，1200rpm离心lmin，置于恒温加热块上65°C进行扩增I小时。
[0062](3)扩增结束后，日光灯或紫外灯或成像设备中观察检测结果，通过观察反应小室中是否有颜色变化，判定样品中是否含有动物源性成分靶标序列。
[0063]实施例3
[0064](I)用途:用于食品中食源性致病微生物检测，靶标分别为原核生物16S、大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌共6个。
[0065](2)制备过程:使用计算机软件绘制出微流控检测芯片每一层的结构和通道图形，用于后期的喷绘、打印和刻蚀；在底板层上喷绘出20个序号标示点和20个反应区；在引物层上应用打印技术在20个反应区、每个反应区12个反应小室共240个区域喷墨打印寡聚核苷酸引物序列，分别为原核生物16S、大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌共6个，每种引物2个重复，冷冻干燥保存；在反应层上刻蚀出20个样品室、通道和240个反应室，每个反应室体积约I μ L ;在进样层上打印出进样标线，刻蚀出20个进样孔；对应叠加、贴合4层结构，形成三维立体的微流控检测芯片。
[0066](3)应用方法:使用DNA提取试剂盒提取20个待测样品DNA模板，稀释至20-100ng/ μ L ;取I μ L模板、加入环状等温扩增反应体系(含有钙黄绿素荧光显色剂)共16 μ L，混匀，使用排枪5通量分4次加入20个样品室。
[0067](2)将加完样品的微流控检测芯片放入光驱式离心机，1200rpm离心lmin，置于恒温加热块上65°C进行扩增I小时。
[0068](3)扩增结束后，日光灯或紫外灯或成像设备中观察检测结果，通过观察反应小室中是否有颜色变化，判定样品中是否含有致病菌成分靶标序列。
【主权项】
1.一种基于核酸扩增技术的微流控检测芯片及其制备方法，其特征在于该芯片外观呈⑶光盘状，外径120mm，内径15mm ;该芯片共有4层组成，分别为底板层、引物层、反应层、进样层；该芯片分为20个反应区，每个反应区包括序号标示点、I个进样孔和12个反应小室，因此可满足20个样品、每个样品最多12个参数的检测。2.按权利要求1所述的一种基于核酸扩增技术的微流控检测芯片及其制备方法，其特征在于，该芯片制作步骤如下: (1)使用计算机软件绘制出微流控检测芯片每一层的结构和通道图形，用于后期的喷绘、打印和刻蚀。 (2)在底板层上喷绘出20个序号标示点和20个反应区。 (3)在引物层上应用打印技术在20个反应区、每个反应区12个反应小室共240个区域喷墨打印寡聚核苷酸弓I物序列，冷冻干燥保存。 (4)在反应层上刻蚀出20个样品室、通道和240个反应室，每个反应室体积约Iμ L0 (5)在进样层上打印出进样标线，刻蚀出20个进样孔。 (6)对应叠加、贴合4层结构，形成三维立体的微流控检测芯片。3.按权利要求1和2所述的一种基于核酸扩增技术的微流控检测芯片及其制备方法，其特征在于，该芯片使用方法如下: (1)提取待测样品DNA模板，稀释至20-100ng/μ L，取I μ L模板、加入核酸扩增反应体系(含有荧光显色剂)共16 μ L，混匀，使用排枪5通量加入样品室。 (2)将加完样品的微流控检测芯片放入光驱式离心机，1200rpm离心lmin，置于温控设备中进行扩增。 (3)扩增结束后，日光灯或紫外灯或成像设备中观察检测结果。
【专利摘要】本发明公开了一种基于核酸扩增技术的微流控检测芯片及其制备方法。该芯片为4层、圆盘离心式设计，1张芯片可满足20个样品、每个样品12个参数的检测工作。配套光驱型离心机、温控设备及核酸扩增试剂耗材，可满足农产品、食品中转基因成分、致病菌、动植物物种鉴定等检测需要，具有快速、便捷、通量高等特点。
【IPC分类】C12Q1/68, C12M1/34
【公开号】CN105331528
【申请号】CN201410399641
【发明人】兰青阔, 徐石勇, 赵新, 李欧静, 刘娜, 王永, 朱珠, 陈锐
【申请人】天津市农业质量标准与检测技术研究所
【公开日】2016年2月17日
【申请日】2014年8月14日