一种利用鱿鱼内脏提取纯化糖蛋白的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及从其他海洋动物提取食用蛋白质组合物，尤其是一种利用鱿鱼内脏提取纯化糖蛋白的方法。
【背景技术】
[0002]我国的鱿鱼加工产量大，在加工成鱿鱼干、鱿鱼花、咸鱿鱼、罐头及调味品等过程中，一般有15?20%的内脏、皮、眼及眼窝等废弃物产生。这些废弃物含有丰富的蛋白质及其它营养成分，极易腐烂变质，并且其中含有某些重金属，传统的处理方法就是将其作为饲料原料或废弃，其造成蛋白质资源的极大浪费及环境污染。
[0003]目前，对鱿鱼内脏综合利用的研究范围比较狭窄，主要是针对其含有的鱼油和蛋白研究比较多，例如，刘政坤等以新鲜鱿鱼内脏为原料，采用淡碱水解法提取鱿鱼内脏油(鱿鱼内脏油的提取研究.《中国油脂》2011年第36卷第9期)；尹青春等以鱿鱼内脏为原料提取蛋白酶，为多种蛋白酶的混合物(鱿鱼内脏蛋白酶的提取工艺研究.《现代食品科技》2012年第28卷第3期)，但是对鱿鱼内脏中含有的多糖、糖蛋白等活性物质的研究甚少。
【发明内容】
[0004]为了克服现有鱿鱼内脏作为饲料原料或废弃造成蛋白质资源浪费及环境污染的不足，本发明的目的在于提供一种工艺合理、操作可行、提取糖蛋白纯度高的利用鱿鱼内脏提取纯化糖蛋白的方法。
[0005]本发明解决其技术所采用的技术方案是:一种利用鱿鱼内脏提取纯化糖蛋白的方法，其特征在于:其经过下列工艺步骤:
(1)原料选取与处理:选取新鲜的鱿鱼内脏或者冷冻并解冻的新鲜鱿鱼内脏为原料，清洗去除污物及杂质，备用；
(2)丙酮脱脂:定量称取步骤(1)中得到清洗后的鱿鱼内脏放入蒸馏烧瓶，加入丙酮，其中，鱿鱼内脏与丙酮的比例为1: 5?10 (m/v)，接上回流冷凝装置；将蒸馏烧瓶放在水浴锅中加热，温度控制50?65°C，直至烧瓶内的丙酮溶液重新变得澄清，停止加热，滤去上清液，收集滤渣，备用；
(3)破碎:将步骤(2)中得到的滤渣捣碎至泥状，备用；
(4)浸提:将步骤(3)中得到捣碎的鱿鱼内脏加入氯化钠溶液进行浸提，得糖蛋白粗提液；
(5)透析:将步骤(4)中得到的糖蛋白粗提液在4°C条件下透析至无白色絮状物出现，得脱盐的糖蛋白透析液；
(6)盐析:将步骤(5)中得到脱盐的糖蛋白透析液采用硫酸铵盐析法进行分级沉淀，得糖蛋白粗品；
(7)纯化:将步骤(6)得到的糖蛋白粗品上SephadexG-100凝胶层析柱，用双蒸水平衡、洗脱，流速控制在0.5?lml/s，收集吸收峰对应的洗脱液，合并，得洗脱液； (8)成品:将步骤(7)得到的洗脱液冷冻干燥，得到纯化鱿鱼内脏糖蛋白。
[0006]进一步，所述的步骤(4)中浸提捣碎鱿鱼内脏的氯化钠溶液的浓度为3?5%，其中，料液比为1: 4?5，浸提时间为0.5?lh，浸提温度为70?80°C。
[0007]进一步，所述的步骤(6)中硫酸钱盐析法分级沉淀的浓度分级控制为20?40%、40 ?60%、60 ?80%。
[0008]本发明是鱿鱼内脏采用丙酮热浴脱脂后进行破碎，再采用氯化钠溶液进行浸提，通过改变浸提过程中的料液比、浸提温度、浸提时间及提取液盐浓度，提高糖蛋白得率；再透析脱盐，硫酸钱分级沉淀，得糖蛋白粗品；糖蛋白粗品上Sephadex G-100凝胶柱层析，对鱿鱼内脏粗糖蛋白进行分离纯化，得到纯化鱿鱼内脏糖蛋白。本发明实现了对鱿鱼内脏的增值利用，提高渔业生产附加值，减少鱿鱼制品生产对环境的污染。其提取方法工艺合理，操作简便可行，提取的糖蛋白纯度高，适合规模化生产。
【具体实施方式】
[0009]下面结合实施例对本发明作进一步说明。
[0010]实施例1
一种利用鱿鱼内脏提取纯化糖蛋白的方法，其经过下列工艺步骤:
(1)原料选取与处理:选取新鲜的鱿鱼内脏为原料，清洗去除污物及杂质，备用；
(2)丙酮脱脂:定量称取步骤(1)中得到清洗后的鱿鱼内脏放入蒸馏烧瓶，加入丙酮，其中，鱿鱼内脏与丙酮的比例为1: 8 (m/v)，接上回流冷凝装置；将蒸馏烧瓶放在水浴锅中加热，温度控制60°C，直至烧瓶内的丙酮溶液重新变得澄清，停止加热，滤去上清液，收集滤渣，备用；
(3)破碎:将步骤(2)中得到的滤渣使用组织捣碎机捣碎至泥状，其中，捣碎机设置转速2000rpm，循环8次，每次研磨60秒停止研磨10秒，以不出现絮状、块状组织为准；
(4)浸提:将步骤(3)中得到捣碎的鱿鱼内脏加入氯化钠溶液进行浸提，氯化钠溶液的浓度为4%，料液比为1: 4.5，浸提时间为0.8h，浸提温度为75°C，得糖蛋白粗提液；
(5)透析:将步骤⑷中得到的糖蛋白粗提液在4°C条件下透析，期间采用0.1 mol/L的硝酸银检验透析液的脱盐情况，直至无白色絮状物出现，得脱盐的糖蛋白透析液；
(6)盐析:将步骤(5)中得到脱盐的糖蛋白透析液采用硫酸铵盐析法进行分级沉淀，得糖蛋白粗品；其中，硫酸铵浓度分级控制为20?40%、40?60%、60?80% ；
(7)纯化:将步骤(6)得到的糖蛋白粗品上SephadexG-100凝胶层析柱，用双蒸水平衡、洗脱，流速控制在0.5?lml/s，期间用核酸蛋白质检测仪检测蛋白含量以及用苯酚-硫酸反应检测糖含量，收集吸收峰对应的洗脱液，合并，得洗脱液；
(8)成品:将步骤(7)得到的洗脱液冷冻干燥，得到纯化鱿鱼内脏糖蛋白。
[0011]实施例2
一种利用鱿鱼内脏提取纯化糖蛋白的方法，其经过下列工艺步骤:
(1)原料选取与处理:选取冷冻并解冻的新鲜鱿鱼内脏为原料，清洗去除污物及杂质，备用;
(2)丙酮脱脂:定量称取步骤(1)中得到清洗后的鱿鱼内脏放入蒸馏烧瓶，加入丙酮，其中，鱿鱼内脏与丙酮的比例为1: 10 (m/v)，接上回流冷凝装置；将蒸馏烧瓶放在水浴锅中加热，温度控制50°C，直至烧瓶内的丙酮溶液重新变得澄清，停止加热，滤去上清液，收集滤渣，备用；
(3)破碎:将步骤(2)中得到的滤渣使用组织捣碎机捣碎至泥状，以不出现絮状、块状组织为准；
(4)浸提:将步骤(3)中得到捣碎的鱿鱼内脏加入氯化钠溶液进行浸提，氯化钠溶液的浓度为5%，料液比为1: 4，浸提时间为0.5h，浸提温度为80°C，得糖蛋白粗提液；
(5)透析:将步骤⑷中得到的糖蛋白粗提液在4°C条件下透析，期间采用0.1 mol/L的硝酸银检验透析液的脱盐情况，直至无白色絮状物出现，得脱盐的糖蛋白透析液；
(6)盐析:将步骤(5)中得到脱盐的糖蛋白透析液采用硫酸铵盐析法进行分级沉淀，得糖蛋白粗品；其中，硫酸铵浓度分级控制为20?40%、40?60%、60?80% ；
(7)纯化:将步骤(6)得到的糖蛋白粗品上SephadexG-100凝胶层析柱，用双蒸水平衡、洗脱，流速控制在lml/s，期间用核酸蛋白质检测仪检测蛋白含量以及用苯酚-硫酸反应检测糖含量，收集吸收峰对应的洗脱液，合并，得洗脱液；
(8)成品:将步骤(7)得到的洗脱液冷冻干燥，得到纯化鱿鱼内脏糖蛋白。
[0012] 实施例3
一种利用鱿鱼内脏提取纯化糖蛋白的方法，其经过下列工艺步骤:
(1)原料选取与处理:选取新鲜的鱿鱼内脏为原料，清洗去除污物及杂质，备用；
(2)丙酮脱脂:定量称取步骤(1)中得到清洗后的鱿鱼内脏放入蒸馏烧瓶，加入丙酮，其中，鱿鱼内脏与丙酮的比例为1: 5 (m/v)，接上回流冷凝装置；将蒸馏烧瓶放在水浴锅中加热，温度控制65°C，直至烧瓶内的丙酮溶液重新变得澄清，停止加热，滤去上清液，收集滤渣，备用；
(3)破碎:将步骤(2)中得到的滤渣使用组织捣碎机捣碎至泥状，备用；
(4)浸提:将步骤(3)中得到捣碎的鱿鱼内脏加入氯化钠溶液进行浸提，氯化钠溶液的浓度为3%，料液比为1: 5，浸提时间为lh，浸提温度为70°C，得糖蛋白粗提液；
(5)透析:将步骤⑷中得到的糖蛋白粗提液在4°C条件下透析，期间采用0.1 mol/L的硝酸银检验透析液的脱盐情况，直至无白色絮状物出现，得脱盐的糖蛋白透析液；
(6)盐析:将步骤(5)中得到脱盐的糖蛋白透析液采用硫酸铵盐析法进行分级沉淀，得糖蛋白粗品；其中，硫酸铵浓度分级控制为20?40%、40?60%、60?80% ；
(7)纯化:将步骤(6)得到的糖蛋白粗品上SephadexG-100凝胶层析柱，用双蒸水平衡、洗脱，流速控制在0.5ml/s，期间用核酸蛋白质检测仪检测蛋白含量以及用苯酚-硫酸反应检测糖含量，收集吸收峰对应的洗脱液，合并，得洗脱液；
(8)成品:将步骤(7)得到的洗脱液冷冻干燥，得到纯化鱿鱼内脏糖蛋白。
【主权项】
1.一种利用鱿鱼内脏提取纯化糖蛋白的方法，其特征在于:其经过下列工艺步骤: (1)原料选取与处理:选取新鲜的鱿鱼内脏或者冷冻并解冻的新鲜鱿鱼内脏为原料，清洗去除污物及杂质，备用； (2)丙酮脱脂:定量称取步骤(1)中得到清洗后的鱿鱼内脏放入蒸馏烧瓶，加入丙酮，其中，鱿鱼内脏与丙酮的比例为1: 5?10 (m/v)，接上回流冷凝装置；将蒸馏烧瓶放在水浴锅中加热，温度控制50?65°C，直至烧瓶内的丙酮溶液重新变得澄清，停止加热，滤去上清液，收集滤渣，备用； (3)破碎:将步骤(2)中得到的滤渣捣碎至泥状，备用； (4)浸提:将步骤(3)中得到捣碎的鱿鱼内脏加入氯化钠溶液进行浸提，得糖蛋白粗提液； (5)透析:将步骤(4)中得到的糖蛋白粗提液在4°C条件下透析至无白色絮状物出现，得脱盐的糖蛋白透析液； (6)盐析:将步骤(5)中得到脱盐的糖蛋白透析液采用硫酸铵盐析法进行分级沉淀，得糖蛋白粗品； (7)纯化:将步骤(6)得到的糖蛋白粗品上SephadexG-100凝胶层析柱，用双蒸水平衡、洗脱，流速控制在0.5?lml/s，收集吸收峰对应的洗脱液，合并，得洗脱液； (8)成品:将步骤(7)得到的洗脱液冷冻干燥，得到纯化鱿鱼内脏糖蛋白。2.根据权利要求1所述的一种利用鱿鱼内脏提取纯化糖蛋白的方法，其特征在于:所述的步骤(4)中浸提捣碎鱿鱼内脏的氯化钠溶液的浓度为3?5%，其中，料液比为1: 4?5，浸提时间为0.5?lh，浸提温度为70?80°C。3.根据权利要求1所述的一种利用鱿鱼内脏提取纯化糖蛋白的方法，其特征在于:所述的步骤(6)中硫酸铵盐析法分级沉淀的浓度分级控制为20?40%、40?60%、60?80%。
【专利摘要】本发明公开了一种利用鱿鱼内脏提取纯化糖蛋白的方法。其主要解决现有鱿鱼内脏作为饲料原料或废弃造成蛋白质资源浪费及环境污染的。其是新鲜或者冷冻并解冻的鱿鱼内脏为原料，采用丙酮热浴脱脂后进行破碎，再采用氯化钠溶液进行浸提，得糖蛋白粗提液；糖蛋白粗提液再经透析脱盐、硫酸铵分级沉淀，得糖蛋白粗品；糖蛋白粗品上Sephadex？G-100凝胶柱层析，用双蒸水平衡、洗脱，对鱿鱼内脏粗糖蛋白进行分离纯化，洗脱液冷冻干燥，得到纯化鱿鱼内脏糖蛋白干品。本发明实现了对鱿鱼内脏的增值利用，减少鱿鱼废弃物对环境的污染。其提取方法工艺合理，操作简便可行，提取的糖蛋白纯度高，适合规模化生产。
【IPC分类】C07K1/30, C07K1/34, C07K1/36, C07K1/16
【公开号】CN105348370
【申请号】CN201510825314
【发明人】杨劲峰, 吴文惠, 张静怡, 周喻
【申请人】荣成广润水产食品有限公司
【公开日】2016年2月24日
【申请日】2015年11月24日