具有抑制脂堆积作用的六环三萜类化合物及其提取分离方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药领域，尤其涉及一种具有抑制脂堆积作用的六环三萜及其提取分 离方法和应用。
【背景技术】
[0002]野鸦椿，学名为Euscaphisjaponica(Thunb. )Dippel，别名酒药花、鸡肾果（广 西），鸡眼睛（四川），小山辣子、山海椒（云南），芽子木（湖南），红椋（湖北、四川）。为省 沽油科落叶小乔木或灌木，是一种极具利用潜力的观赏植物。其根价药用值为解毒，清热， 利湿。用于感冒头痛，痢疾，肠炎，肝纤维化。目前国内外学者对野鸦椿进行过一些研究，主 要报道有黄酮类，三萜类，酯类，留醇类等化合物。为充分利用我国丰富的资源，进一步寻找 新的活性天然产物，本发明对野鸦椿化学成分进行了研究，并从中分离到了一个新的三萜 类化合物。该化合物有明显的抑制甘油三酯的作用。
【发明内容】
[0003]为了达到上述目的，本发明提供了一种具有抑制脂堆积作用的六环三萜及其提取 分离方法和应用。
[0004]一方面，本发明提供了一种六环三萜类化合物，其化学结构式如下：
[0005]
[0006]第二方面，本发明提供了第一方面所述的六环三萜类化合物的提取分离方法，其 包括以下步骤：
[0007]步骤一，取野鸦椿的干燥根，粉碎后用体积浓度为80-90%的乙醇回流提取，合并 提取液，减压回收溶剂至无醇味，得浸膏；
[0008]步骤二，将浸膏悬浮于水中，用石油醚萃取，回收溶剂，得石油醚部位，取石油醚部 位干法上样，通过100~200目的硅胶柱色谱，用石油醚：乙酸乙酯梯度洗脱，用TLC检测合 并类似部分，得到7个组分根据极性从小到大依次命名为A-G;
[0009]步骤三，将步骤二得到的组分C通过100~200目的硅胶柱色谱色谱，用石油醚： 乙酸乙酯梯度洗脱，用TLC检测合并类似部分，得到4个组分根据极性从小到大依次命名为 Ca-Cd；
[0010] 步骤四，将步骤三得到的组分Ca干法上样，通过200~300目的硅胶柱层析，用石 油醚：乙酸乙酯梯度洗脱，用TLC检测合并类似部分，得到8个组分根据极性从小到大命名 为Cal-Ca8,将Ca2流分在石油醚-乙酸乙酯混合溶液中结晶、重结晶得到最终产物。
[0011] 第三方面，本发明提供了第一方面所述的六环三萜类化合物在抑制脂肪堆积方面 的应用。
[0012] 本发明提供的六环三萜类化合物有明显的抑制脂肪堆积作用，可用作抗肝炎、肝 硬化的药物；本发明提供的六环三萜类化合物的提取分离方法，以天然野鸦椿为原料，来源 广泛、无毒、无污染，制备过程简便，成本低廉，适合大规模推广应用。
【附图说明】
[0013] 图1为本发明实施例1对最终产物进行NMR鉴定的结果。
[0014] 图2为本发明实施例2中空白组的实验照片。
[0015] 图3为本发明实施例2中对照组的实验照片。
[0016] 图4为本发明实施例2中同时添加5 μ Μ油酸和浓度为1 μ g/ml的所述六环三萜 类化合物的实验组的实验照片。
[0017] 图5为本发明实施例2中同时添加5 μΜ油酸和浓度为5 μ g/ml的所述六环三萜 类化合物的实验组的实验照片。
[0018] 图6为本发明实施例2中同时添加5 μ Μ油酸和浓度为25 μ g/ml的所述六环三萜 类化合物的实验组的实验照片。
[0019] 图7本发明实施例3的六环三萜类化合物对甘油三脂影响效果图。
【具体实施方式】
[0020] 一方面，本发明提供了一种六环三萜类化合物，其化学结构式如下：
[0021]
[0022] 第二方面，本发明提供了第一方面所述的六环三萜类化合物的提取分离方法，其 包括以下步骤：
[0023] 步骤一，取野鸦椿的干燥根，粉碎后用体积浓度为80-90%的乙醇回流提取，合并 提取液，减压回收溶剂至无醇味，得浸膏；
[0024] 步骤二，将浸膏悬浮于水中，用石油醚萃取，回收溶剂，得石油醚部位，取石油醚部 位干法上样，通过100~200目的硅胶柱色谱，用石油醚：乙酸乙酯梯度洗脱，用TLC检测合 并类似部分，得到7个组分根据极性从小到大依次命名为A-G ;
[0025] 步骤三，将步骤二得到的组分C通过100~200目的硅胶柱色谱色谱，用石油醚： 乙酸乙酯梯度洗脱，用TLC检测合并类似部分，得到4个组分根据极性从小到大依次命名为 Ca-Cd；
[0026] 步骤四，将步骤三得到的组分Ca干法上样，通过200~300目的硅胶柱层析，用石 油醚：乙酸乙酯梯度洗脱，用TLC检测合并类似部分，得到8个组分根据极性从小到大命名 为Cal-Ca8,将Ca2流分在石油醚-乙酸乙酯混合溶液中结晶、重结晶得到最终产物。
[0027] 优选的，所述步骤二中硅胶柱层析所采用的梯度洗脱溶剂为石油醚和乙酸乙酯， 浓度为石油醚：乙酸乙酯=1〇〇:〇-〇:1〇〇。
[0028] 优选的，所述步骤三中硅胶柱层析所采用的梯度洗脱溶剂为石油醚和乙酸乙酯， 浓度为石油醚：乙酸乙酯=50:1-3:1。
[0029] 优选的，所述步骤四中硅胶柱层析所采用的梯度洗脱溶剂为石油醚和乙酸乙酯， 浓度为石油醚：乙酸乙酯=65:1-10:1。
[0030] 第三方面，本发明提供了第一方面所述的六环三萜类化合物在抑制脂肪堆积方面 的应用。
[0031] 优选的，本发明提供了第一方面所述的六环三萜类化合物在抑制甘油三酯方面的 应用。
[0032] 下面结合具体实施例，进一步对本发明进行详细描述。当然所描述的实施例仅是 本发明的一部分实施例，而不是全部实施例，基于本发明中的实施例，本领域技术人员在没 有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明的保护范围。
[0033] 实施例1
[0034] 首先提取分离本发明所述的六环三萜类化合物。
[0035] 本发明所用野鸦椿样品采集自湖南省泠水江市和青镇，经中国科学院华南植物园 宁祖林博士鉴定为省沽油科野鸦椿属（StaphyleaceaeEuscaphis)植物野鸦椿（Euscaphis japonica)的干燥根，标本存放于湖北大学生命科学学院中药生物技术省重点实验室。
[0036] 步骤一，取野鸦椿的干燥根40kg，适当粉碎后用体积浓度为90%乙醇回流提取， 每次提取2小时，提取3次，合并提取液，减压回收溶剂至无醇味，得浸膏1177g;
[0037] 步骤二，将浸膏悬浮于水中，用石油醚萃取，回收溶剂，得石油醚部位取石油 醚部位干法上样，通过100-200目的硅胶柱层析，其中采用石油醚：乙酸乙酯浓度为 100:0-0:100的洗脱液进行梯度洗脱，用TLC检测合并类似部分，得到7个组分根据极性从 小到大依次命名为A-G。组分A和B主要是挥发油和油脂类物质，未做分离。
[0038] 步骤三，将步骤二得到的组分C通过100-200目的硅胶柱层析，其中采用石油醚： 乙酸乙酯浓度为50:1-3:1的洗脱液进行梯度洗脱，用TLC检测合并类似部分，得到4个组 分根据极性从小到大依次命名为Ca-Cd;
[0039] 步骤四，将步骤三得到的组分Ca干法上样，通过200-300目的硅胶柱层析，其中采 用石油醚：乙酸乙酯浓度为65:1-10:1的洗脱液进行梯度洗脱，用TLC检测合并类似部分， 得到8个组分根据极性从小到大命名为Cal~Ca8,组分Ca2流分在石油醚-乙酸乙酯混合 溶液中结晶、重结晶得到最终产物34mg。
[0040] 对最终产物各项性能进行分析表征结果如下：
[0041] 无色针晶；恪点：201_203°C;比旋光度+?J(c〇· 10，Me0H);紫外光谱 (MeOH)λmax(logε) 206. 2 (4. 12)，249 (4. 12)nm;红外光谱vmax3392, 3069, 2940, 2858， 1724, 1665, 1613, 1454