一种新的三萜化合物及其制备方法和医药用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物技术领域，具体设及从灯台树的干燥叶中分离得到的一种具有治 疗肝癌作用的=祗类化合物及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 灯台树Alstoniascholaris(L.)R.Br.为夹竹桃科鸡骨常山属乔木。其性味甘、 淡、平，具有清热解毒、消肿止痛、平喘止咳、截追、发汗、健胃等作用。灯台树根、茎、皮、叶均 可入药，W皮和叶为主。该植物主要分布在我国的广西南部、西部和云南南部，在尼泊尔、印 度、斯里兰卡、细甸、泰国、越南、柬捕寨、马来西亚、印度尼西亚、菲律宾和澳大利亚热带地 区也有分布。灯台树具有悠久的民间用药历史，我国民间用灯台树皮治疗头痛、伤风、额气、 肺炎、百日咳、慢性支气管炎，外用可治外伤止血、接骨、消肿、疮巧及配制杀虫剂等。
[0003] 国内外学者对灯台树的化学成分进行了一系列研究，已经发现的化学成分主要包 括生物碱类、黄酬类和=祗类，其次还有挥发油、酱体类、维生素等成分。目前，灯台树的生 物碱、黄酬和=祗类成分研究较为深入，其中W灯台树叶的研究较多，已经从中分离得到了 50多个生物碱成分，主要为单祗吗I噪生物碱。
[0004] 近年来，随着对其化学成分和药理活性等方面研究的逐步展开，发现其活性成分 丰富，在抗肿瘤、抗炎、抗菌、抗糖尿病和调血脂等方面显示出潜在的药用价值。研究表明， 灯台树中含有的=祗类成分羽扇豆醇对不同组织来源的细胞均具有增殖抑制活性，如黑色 素瘤451LU细胞、WM35细胞和B162F2细胞，人膜腺癌细胞株AsPC-1，人表皮癌A431细胞， 肝癌SMMC7721细胞，前列腺癌细胞LNCaP、CWR22R丫 1和PC-3。羽扇豆醇可选择性地抑制无 胸腺裸鼠451LU和CWR22R丫 1细胞的增殖，通过调节细胞增殖标记物、细胞调亡标记物和细 胞周期调控分子在肿瘤异种移植中的表达而发挥作用。灯台树除了具有W上药理作用外， 还具有退热、缩宫、降压、抗追疾等作用。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种从灯台树的干燥叶中分离得到的一种具有治疗肝癌作 用的=祗类化合物及其制备方法。
[0006] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得W实现的：
[0007] 具有下述结构式的化合物（I)，
[0008]
[0009] 所述的化合物（I)的制备方法，包含W下操作步骤：(a)灯台树的干燥叶粉碎， 用75~85%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油酸、乙酸乙醋和水饱 和的正下醇萃取，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；化）步骤（a) 中乙酸乙醋萃取物用大孔树脂除杂，先用15%乙醇洗脱8个柱体积，再用75%乙醇洗脱12 个柱体积，收集75 %乙醇洗脱液，减压浓缩得75 %乙醇洗脱物浸膏；（C)步骤化）中75% 乙醇洗脱物浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比为80:1、50:1、30:1、10:1和1:1的二氯甲 烧-甲醇梯度洗脱得到5个组分；（d)步骤（C)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体 积比为15:1、10:1和5:1的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤（d)中组分2 用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为75 %的甲醇水溶液等度洗脱，收 集8~10个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物（I)。
[0010] 进一步地，步骤（a)中，用80%乙醇热回流提取，合并提取液。
[0011] 进一步地，所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。
[0012] 一种药物组合物，该药物组合物含有治疗有效量的权利要求1所述的化合物（I) 和药学上可接受的载体。
[0013]所述的化合物（I)在制备治疗肝癌的药物中的应用。
[0014]所述的药物组合物在制备治疗肝癌的药物中的应用。
[0015]本发明化合物用作药物时，可W直接使用，或者W药物组合物的形式使用。
[0016] 该药物组合物含有治疗有效量的本发明化合物（I)，其余为药物学上可接受的、 对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0017]所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料W及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物W单位体重服用量的形式使用。本发明药物可 通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控 释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等；用于注射时，可制成灭菌的 水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。
【附图说明】
[001引图1为化合物（I)结构式；
[0019]图2为化合物（I)理论ECD值与实验ECD值比较；
[0020] 图3化合物（I)对胎pG2及L02细胞增殖的影响（n= 3)。
【具体实施方式】
[0021] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不W此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可W对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[002引实施例1 :化合物（I)分离制备及结构确证
[0023] 试剂来源：乙醇、石油酸、乙酸乙醋、正下醇、二氯甲烧为分析纯，购自上海凌峰化 学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
[0024] 制备方法：（a)将灯台树的干燥叶（8kg)粉碎，用80%乙醇热回流提取烛LX3 次），合并提取液，浓缩至无醇味（3L)，依次用石油酸（3LX3次）、乙酸乙醋（3LX3次）和 水饱和的正下醇（化X3次）萃取，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物（355g)和正 下醇萃取物；化）步骤（a)中乙酸乙醋萃取物用AB-8型大孔树脂除杂，先用15%乙醇洗脱 8个柱体积，再用75 %乙醇洗脱12个柱体积，收集75 %乙醇洗脱液，减压浓缩得75 %乙醇 洗脱物浸膏（136g) ;(c)步骤化）中75%乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比为 80:1 (8个柱体积）、50:1 (8个柱体积）、30:U6个柱体积）、10:1 (8个柱体积）和1:1巧个 柱体积）的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到5个组分；（d)步骤（C)中组分4 (31g)用正相娃 胶进一步分离，依次用体积比为15:1 (8个柱体积）、10:1 (10个柱体积）和5:U6个柱体 积）的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤（d)中组分2 (Ilg)用十八烷基娃 烧键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为75%的甲醇水溶液等度洗脱，收集8-10个柱体 积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物（I)(35mg)。
[00巧]结构确证：HR-ESIMS显示[M+Na]+为m/z553. 3508,结合核磁特征可得分子式 为〔32馬。〇6,不饱和度为8。核磁共振氨谱数据5h(卵m，DMS0-de，500MHz) :H-l(1.83，m)， H-I(I. 47,m)，H-2 (I. 59,m)，H-2 (I. 48,m)，H-3 (4. 44,dd，J= 11. 6,4. 2)，H-5 (I. 46,m)， H-6(1.88，m)，H-6(1.69，t，J= 14. 6)，H-7(2. 93，d，J= 6. 4)，H-lia.81，m)，H-lia.93， m)，H-12 (I. 49,m)，H-12 (I. 90,m)，H-15 (I. 45,m)，H-15 (I. 16,ddd，J= 12. 5,12. 5, 5. 3)， H-16 (I. 27,m)，H-16 (2. 06,m)，H-17 (I. 59,m)，H-18 〇). 97,s)，H-19 〇). 96,s)，H-20 (I. 33， m)，H-21 (0. 87,d，J= 6. 6)，H-22 (0. 99,m)，H-22 (I. 34,m)，H-23 (I. 76,m)，H-23 (I. 93， m)，H-24(4. 97,tt，J= 7. 1，I. 4)，H-26(l. 51，s)，H-27(l. 59,s)，H-28(0. 89,s)， H-29(0. 90,s)，3-0Ac(1.99,s);核磁共振碳谱数据 5c(ppm，DMS0-de，125Hz) :29. 9(邸2， 1-C)，22. 5 (畑2, 2-C)，79. 3 (CH，3-C)，37.I(C，4-C)，41. 8 (CH，5-C)，20. 2 (畑2, 6-C)， 53.I(CH，7-C)，64. 0(C，8-C)，85. 3(C，9-C)，37.I(C，10-C)，22. 2(邸2, 11-C)，33. 7(細2， 12-C)，46. 4 (C，13-C)，59.I(C，14-C)，19. 9 (邸2,15-C)，27. 2 (邸2,16-C)，51. 8 (CH，17-C)， 13. 5 (邸3, 18-C)，16.I(細3, 19-C)，34. 2 (CH，20-C)，17. 7 (邸3, 21-C)，35. 5 (邸2, 22-C)， 24. 4 (細2, 23-C)，124. 3 (CH，24-C)，130. 6 (C，25-C)，17.I(細3, 26-C)，25. 3 (細3, 27-C)， 27. 6 (邸3, 28-C)，16. 3 (邸3, 29-C)，176. 8 (C，30-C)，170.I(C，3-OAc)，21.I(邸3, 3-OAc);碳 原子标记参见图1。IR光谱显示该化合物含有丫内醋（1766cmI)和幾基（1727cmI)基团。 咱NMR谱显示含有屯个甲基信号5册.97化-18)，0. 96化-19)，1. 51化-26)，1. 59化-27)， 0. 89 化-28)，0. 90 化-29)和 1. 99 (3-OAc)，W及一个双峰信号 5 册.87 化-21，d，J= 6. 6化），说明该化合物为S祗类化合物。"CNMR和DEPT谱显示32个碳信号，包括八个甲 基，六个次甲基（两个含氧次甲基W及一个締控碳），九个亚甲基W及九个季碳（两个内醋 幾基碳，两个含氧碳W及一个締控碳）。此外，侧链具有24 (25)-双键（5C130. 6,124. 3和 5H4. 97,tt，J= 7. 1，1. 4Hz)信号。HMBC谱中，&-26 和 &-27 与C-24 和C-25 化-21 与 C-17,C-20和C-22 ;W及H-24与C-22,C-23, &-26和&-27的相关性验证了上述推论。此 夕F，一个醋幾基信号[5C176.8(C-30)]和两个碳信号[5C85. 3(C-9)和59.UC-14)]说 明该化合物存在一个丫内醋结构。HMBC谱中，&-18与C-