一种从地瓜参自溶组织中分离提取水溶性海参皂苷的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及软体动物类营养制品的制备，尤其是一种从地瓜参自溶组织中分离提取水溶性海参皂苷的方法。
【背景技术】
[0002]我们知道，地瓜参是海参尻参科中的一种，由于其肉质粗厚且不易烹饪，一致被人们所忽视。近年来，随着对地瓜参的深入研究发现，地瓜参富含海参皂苷，具有较高的营养价值与药用价值，同时还发现，地瓜参在受到某些外界条件刺激时也会发生自溶现象。地瓜参自溶为进一步提高其自身利用价值与地瓜参深加工带来了诸多不便。
[0003]目前，提取分离海参皂苷的方法主要是采用乙醇或甲醇等有机溶剂萃取法。这类方法不仅对有机溶剂的使用量大、成本高、易污染环境、不利于工业化生产，而且所得海参皂苷制品的水溶性差，在应用时通常要使用二甲亚砜(DMS0)等有机溶剂进行促溶，影响了其生物学活性。
【发明内容】
[0004]为了克服现有技术中采用乙醇或甲醇等有机溶剂萃取法提取分离海参皂苷存在溶剂使用量大、成本高、易污染环境及影响其生物学活性的不足，本发明提供一种工艺合理、操作可行、生物学活性好的从地瓜参自溶组织中分离提取水溶性海参皂苷的方法。
[0005]本发明解决其技术问题所采用的技术方案是:一种从地瓜参自溶组织中分离提取水溶性海参皂苷的方法，其特征在于:其经过下列工艺步骤:
(1)自溶处理:选取新鲜的地瓜参为原料，依次经过水洗、捣碎和匀浆，得地瓜参浆液；将地瓜参浆液进行紫外线照射处理后，再加入氯化钠溶液，控制自溶条件进行自溶处理，得地瓜参自溶组织；
(2)水提:将步骤(1)得到的地瓜参自溶组织，置于50?60°C恒温水浴锅中搅拌水浴2?4h，得水抽提液；将水抽提液用纱布滤过，收集过滤液；将抽提后的组织地瓜参自溶组织按以上条件抽提、过滤1?2次；合并过滤液；将合并后的过滤液进行离心处理，取上清液；
(3)分离纯化:将步骤(2)中得到的上清液过AB-8型大孔树脂柱，用85?95%乙醇进行洗脱，收集洗脱组分；
(4)减压浓缩:将步骤(3)中得到的洗脱组分减压浓缩至浸膏状；
(5)萃取:将步骤(4)中得到的浸膏用去离子水复溶后进行高速离心处理，取上清液；利用水饱和正丁醇萃取三次，合并正丁醇层，得萃取液；
(6)减压浓缩:步骤(5)中得到的萃取液减压浓缩至浸膏状；
(7)硅胶柱层析:将步骤￠)中得到的浸膏溶于乙醇，上样于常压硅胶柱，用展开剂进行连续洗脱，收集洗脱组分；
(8)Sephadex LH-20柱层析:将步骤(7)中得到的洗脱组分上样于Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱，利用甲醇溶液洗脱，收集洗脱组分；
(9)旋转蒸发、冷冻干燥:将步骤(8)中得到的洗脱组分旋转蒸发，冷冻干燥，得水溶性海参皂苷。
[0006]所述步骤(1)中地瓜参浆液的紫外线照射处理是将地瓜参浆液采用30-50 μ ff/cm2的紫外线照射30?40min。
[0007]所述步骤⑴中氯化钠溶液的浓度为0.4?0.6mol/L,所述的自溶条件为:料液比1: 2?5，调节pH值为6.0?6.5，自溶温度控制为40?50°C，自溶时间3?5h。
[0008]所述步骤(2)中过滤液的离心处理是将过滤液送入离心机中，控制转速6000?8000r/min，离心时间 15 ?30min。
[0009]所述步骤(5)浸膏复溶后的高速离心处理是将浸膏复溶液送入离心机中，控制转速 10000 ?15000r/min，离心时间 10 ?20min。
[0010]所述步骤(7)中的乙醇的浓度为60?75%。
[0011]所述步骤(7)中的展开剂为正丁醇:乙酸乙酯:水=4: 1: 5或环乙烷:乙酸乙酯=1: 1或苯:乙酸乙酯=3: 7。
[0012]所述步骤⑶中的甲醇溶液的浓度为40?55%。
[0013]本发明是将地瓜参制得地瓜参浆液后进行紫外线照射处理，然后加入氯化钠溶液进行自溶处理，得地瓜参自溶组织；地瓜参自溶组织采用热水抽提，过滤2?3次，滤液离心，取上清液；上清液采用大孔树脂分离纯化后对其进行浓缩，得到的浓缩液后复溶后进行萃取；萃取液浓缩后再进行硅胶柱层析和Sephadex LH-20柱层析，最后将得到样品进行旋转蒸发、冷冻干燥，得水溶性海参皂苷。本发明的从地瓜参的自溶组织中分离提取水溶性海参皂苷的方法，其提取工艺合理，操作简便可行，使用有机溶剂量少，成本低，不污染环境，适合规模化生产。其得到的水溶性海参皂苷纯度较高，生物学活好。
【具体实施方式】
[0014]下面结合实施例对本发明做进一步说明。
[0015]实施例1
一种从地瓜参自溶组织中分离提取水溶性海参皂苷的方法，其经过下列工艺步骤:
(1)自溶处理:选取新鲜的地瓜参为原料，依次经过水洗、捣碎和匀浆，得地瓜参浆液；将地瓜参浆液采用40 yW/cm2的紫外线照射处理35min后，再加入浓度为0.5mol/L的氯化钠溶液，料液比1: 3，调节pH值为6.2，自溶温度控制为45°C，自溶处理4h，得地瓜参自溶组织；
(2)水提:将步骤(1)得到的地瓜参自溶组织，置于55°C恒温水浴锅中搅拌水浴3h，得水抽提液；将水抽提液用16层纱布滤过，收集过滤液；将抽提后的组织地瓜参自溶组织按以上条件抽提、过滤1次；合并过滤液；将合并后的过滤液送入离心机中，控制转速7000r/min，离心处理20min，取上清液；
(3)分离纯化:将步骤(2)中得到的上清液过AB-8型大孔树脂柱，用浓度为90%乙醇进行洗脱，收集洗脱组分；
(4)减压浓缩:将步骤(3)中得到的洗脱组分减压浓缩至浸膏状；
(5)萃取:将步骤(4)中得到的浸膏用去离子水复溶后得到的浸膏复溶液送入离心机中，控制转速12000r/min，离心处理15min，取上清液；利用水饱和正丁醇萃取三次，合并正丁醇层，得萃取液；
(6)减压浓缩:步骤(5)中得到的萃取液减压浓缩至浸膏状；
(7)硅胶柱层析:将步骤￠)中得到的浸膏溶于浓度为70%的乙醇溶液中，上样于常压硅胶柱，用展开剂进行连续洗脱，收集洗脱组分；其中，展开剂为正丁醇:乙酸乙酯:水=4:1:5;
(8)Sephadex LH-20柱层析:将步骤(7)中得到的洗脱组分上样于Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱，利用浓度为50%的甲醇溶液洗脱，收集洗脱组分；
(9)旋转蒸发、冷冻干燥:将步骤(8)中得到的洗脱组分旋转蒸发，冷冻干燥，得水溶性海参皂苷。
[0016]本实施例所提供的技术方案，其工艺合理，操作可靠，使用有机溶剂量少，不影响得物的生物学活，得到的水溶性海参皂苷纯度较高，适合规模化生产。
[0017]实施例2
一种从地瓜参自溶组织中分离提取水溶性海参皂苷的方法，其经过下列工艺步骤:
(1)自溶处理:选取新鲜的地瓜参为原料，依次经过水洗、捣碎和匀浆，得地瓜参浆液；将地瓜参浆液采用50 yW/cm2的紫外线照射处理30min后，再加入浓度为0.4mol/L的氯化钠溶液，料液比1: 5，调节pH值为6.0，自溶温度控制为50°C，自溶处理3h得地瓜参自溶组织；
(2)水提:将步骤(1)得到的地瓜参自溶组织，置于60°C恒温水浴锅中搅拌水浴2h，得水抽提液；将水抽提液用18层纱布滤过，收集过滤液；将抽提后的组织地瓜参自溶组织按以上条件抽提、过滤2次；合并过滤液；将合并后的过滤液送入离心机中，控制转速80