专利名称：利用海参肠自溶制备活性物质的方法
利用海参肠自溶制备活性物质的方法技术领域
本发明属于海洋副产物精深加工领域，同时涉及自溶、凝胶柱层析和真空冷冻干燥的技术领域。
背景技术：
海参肠是海参加工过程中的副产物，其蛋白质含量高，可达70%左右(以干重计)，是制备活性物质的良好原料。在中国，海参肠多被作为废弃物丢弃，利用率极低，造成资源浪费及环境污染。
海参肠具有较强的自溶能力。目前，有关利用自溶技术从海参肠中制备活性物质的相关专利未见报道。关于海参肠自溶的文献报道，主要集中在对其内源酶进行分离、纯化及酶学特性研究。日本学者对日本传统发酵食品“盐辛”的制作方法进行改进，采用静水压不添加食盐而促进海参肠自溶，但未涉及海参肠自溶活性物质的提取及分离制备。发明内容
针对海参加工中的副产物海参肠自溶能力较强，但同时并未得到充分利用的状况，本发明旨在提供一种利用自溶技术制备海参肠活性物质及其自溶残渣活性物质的制备方法。
本发明利用海参肠自溶制备活性物质的方法，以海参肠为原料，经匀浆、自溶、离心取上清液即为海参肠自溶产物；该产物可进一步采用冷冻浓缩的方法浓缩至原体积的10 % 20 %;还可以采用真空冷冻干燥的方式干燥至水分含量小于等于8 %，从而获得不同产品形式的海参肠活性物质粗品。
其中，所述自溶工序的优选方案为:匀浆后所得匀浆液经紫外线照射后，加入I 4倍体积、pH4.0 7.0的柠檬酸与磷酸氢二钠缓冲溶液，进行自溶。根据实际情况不同自溶可采取两种条件:温度在4 10°C时，自溶4 12h，或者温度在35°C 60°C自溶时，自溶0.5 4h。
优选方式下，处理量较少时，紫外线照射可以选用30W紫外灯，距离0.5m照射5 40min后进行自溶诱导；处理量较大时，可以将海参肠匀浆液放置在不锈钢槽内，浆液厚度I 2cm，在上方0.2 0.5m处放置紫外灯，控制浆液液面紫外强度为60 120 μ ff/cm2,保持5 40min进行自溶诱导。
此外，所述离心取上清液的工序，优选方式为:2500 6000r/min离心10 30min,取上清液；或采用超滤的方式,收集IOkDa以下的组分。
为了获得海参肠活性物质精制品，本发明在制得海参肠活性物质粗品后，经分离、冷冻干燥制得精制活性物质。
其中，所述分离的工序，优选方式为:将所述海参肠活性物质粗品上样于葡聚糖凝胶Sephadex G-15层析柱,用去离子水洗脱,控制流速为0.3 0.5mL/min,对主要组分(峰面积占各组分总峰面积的70% 80%)进行收集。采用二苯代苦味肼自由基(DPPH)体系和还原能力测定体系，已经证明主要组分具有较强的清除DPPH自由基及还原能力。
此外，所述冷冻干燥的优选工序为:在冷阱温度-30 -45°c、真空度为50 80Pa条件下进行干燥。
本发明另外提供了一种利用海参肠自溶制备活性物质的方法，主要针对海参肠自溶残渣活性物质，其目的在于提高海参肠的利用率。具体过程为，以海参肠为原料，经匀浆、自溶。而后分离上清液获得海参肠自溶产物，同时利用余下残渣作如下处理:加入2 4倍体积的去离子水混勻，90 100°C加热5 15min。冷却后于50°C,pH7.0下,加入1500 3000U/g蛋白的中性蛋白酶，如枯草芽孢杆菌1398，酶解30 180min。酶解完毕后，酶解液于95 10CTC加热5 IOmin灭酶，冷却后于2500 6000r/min下离心10 30min,取上清液，或采用超滤的方式，收集IOkDa以下的组分，即为海参肠自溶残渣活性物质。该产物可进一步采用冷冻浓缩的方法浓缩至原体积的10% 20%;还可以采用真空冷冻干燥的方式干燥至水分含量小于等于8%，从而获得不同产品形式的海参肠自溶残渣活性物质粗品。
将所述海参肠自溶残渣活性物质粗品上样于葡聚糖凝胶S^hadex G_25层析柱，用去离子水洗脱，控制流速为0.2 0.4mL/min,对峰面积占各组分总峰面积的80% 95%的主要组分进行收集。最后，在冷阱温度为-30 _45°C，真空度为50 80Pa，至水分含量为小于等于8%为止，冻干后制得精制活性物质。
上述利用残渣制备活性物质的自溶工序，优选方案为:匀浆后所得匀浆液经紫外线照射后，加入I 4倍体积、pH4.0 7.0的柠檬酸与磷酸氢二钠缓冲溶液，进行自溶。此夕卜，优选方式下，处理量较少时，紫外线照射可以选用30W紫外灯，距离0.5m照射5 40min后进行自溶诱导；处理量较大时，可以将海参肠匀浆液放置在不锈钢槽内，浆液厚度为I 2cm,在上方0.2 0.5m处放置紫外灯，控制浆液液面紫外强度为60 120 μ ff/cm2,保持5 40min进行自溶诱导。
本发明突出的优点在于:
1.提高了海参加工过程中副产物的利用率，使其所含营养成分和功能因子得到充分开发，同时还减少了对环境造成的污染。加工处理后的海参肠活性物质具有一定的抗氧化能力，可作为功能基料用于开发多种功能型产品，极具开发潜力。
2.本发明提及的自溶是利用海参肠自身所含有的内源酶进行酶解，采用自溶技术制备海参肠活性物质，最大限度的保持了海参肠所含有的活性成分，得到更优质的产品。同时，针对海参肠自溶后的残渣，可采用外源酶酶解制备活性物质，使海参肠得以充分利用。
本发明优选工艺中提及的工艺参数，旨在提高活性物质产品的得率和质量，在本发明的工艺参数条件下，海参肠自溶产物中TCA可溶性寡肽的含量提高为自溶前的2 3倍，自溶残渣蛋白质经变性处理、外源酶酶解后肽得率达到10% 30%。
具体实施方式
本发明一种海参肠自溶活性物质及其自溶残渣活性物质。海参肠自溶活性物质以海参肠为原料，经匀浆、自 溶、离心、冷冻浓缩、凝胶柱分离及冷冻干燥制成；海参肠自溶后的残渣，可经变性预处理、外源酶酶解、离心、冷冻浓缩、凝胶柱分离及冷冻干燥的方式制成。该两种营养品为淡黄色固体粉末，无臭、有海参肠固有的鲜味，易溶于水，有吸湿性，具有一定的体外抗氧化能力，可作为功能基料用于制备多种功能型食品。
1.海参肠自溶活性物质制备具体工艺步骤如下:
(I)原料处理
从新鲜海参中取出海参肠、清洗，去除泥沙和杂质，直接匀浆备用或在_15°C冷冻备用;
⑵自溶
利用海参肠所含内源酶的作用，使其在不同的条件下进行自溶:
海参肠匀浆液经紫外线(30W，0.5m)照射5 40min后，加入I 4倍体积的柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲溶液(ρΗ4.0 7.0)，于35°C 60°C自溶0.5 4h或者于4°C 10°C自溶4 12h。自溶结束后,2500 6000r/min离心10 30min,取上清液；或采用超滤的方式，收集IOkDa以下的组分。真空冷冻浓缩后至原体积的10% 20%，或直接冷冻干燥，即为海参肠自溶活性物质粗品。
处理量较大时，可以将海参肠匀浆液放置在不锈钢槽内，浆液厚度为I 2cm，上方0.2 0.5m处放置紫外灯，控制浆液液面紫外强度为60 120 μ ff/cm2,保持5 40min进行自溶诱导，之后加入I 4倍体积的柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲溶液(pH4.0 7.0)，按照上述方法进行自溶。
(3)分离
将海参肠活性物质粗品上样于S^hadex G_15凝胶柱，用去离子水洗脱，控制流速为0.3 0.5mL/min。对主要组分(峰面积占各组分总峰面积的70% 80% )进行收集，同时达到脱盐的目的。
(4)干燥
对收集的活性组分进行冷冻干燥，冷阱温度为-30 _45°C，真空度为50 80Pa，至水分含量为小于等于8%为止，冻干后即得到海参肠自溶活性物质。
2.海参肠自溶残渣活性物质制备具体工艺步骤如下:
(I)预处理
获得海参肠自溶产物后，取残渣，加入2 4倍体积的去离子水混匀，90 100°C加热5 15min,进行蛋白质变性处理,冷却。
(2)外源酶酶解
在50°C，ρΗ7.0下，加入1500 3000U/g蛋白的中性蛋白酶(如枯草芽孢杆菌1398)，酶解30 180min。酶解完毕后，酶解液于95 100°C加热5 IOmin灭酶，冷却后2500 6000r/min离心10 30min,取上清液，或采用超滤的方式，收集IOkDa以下的组分，即为海参肠自溶残渣活性物质。该产物可进一步采用冷冻浓缩的方法浓缩至原体积的10 20% ;还可以采用真空冷冻干燥的方式干燥至水分含量小于等于8%，从而获得不同产品形式的海参肠自溶残渣活性物质粗品。
(3)分离
将海参肠自溶残渣活性物质粗品上样于葡聚糖凝胶S印hadex G_25层析柱，用去离子水洗脱，控制流速为0.2 0.4mL/min，对主要组分(峰面积占各组分总峰面积的80% 95% )进行收集，同时达到脱盐的目的。
(4)干燥
对收集的活性组分进行冷冻干燥，冷阱温度为-30 _45°C，真空度为50 80Pa，至水分含量为小于等于8%为止，冻干后即得到海参肠自溶残渣活性物质。
实例一:
将IOOg海参肠清洗、剪碎、匀浆，匀浆处理后紫外线(30W，0.5m)照射25min，加入1.5倍体积的pH5.0的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液，于40°C自溶4h。自溶结束后，3000r/min离心25min，取上清液，残渣备用。上清液经真空冷冻浓缩为原体积的10%，即为海参肠自溶活性物质粗品。海参肠自溶性物质粗品经Sephadex G_15凝胶柱分离，控制流速为0.4mL/min，收集主要组分，进行冷冻干燥。调节冷阱温度为_30°C，真空度为80Pa，至水分含量小于8 %，冻干后即得到海参肠自溶活性物质。
海参肠自溶残渣，加入4倍体积去离子水混匀，100°C加热5min。冷却后，在50°C，PH7.0下，加入1500U/g蛋白的枯草芽孢杆菌1398中性蛋白酶，酶解180min。酶解完毕后，酶解液于95°C加热IOmin灭酶，6000r/min离心IOmin,取上清液,冷冻浓缩至原体积的10%，即为海参肠自溶残渣活性物质粗品。浓缩液经葡聚糖凝胶S印hadex G_25层析柱，用去离子水洗脱，控制流速为0.25mL/min，收集主要组分，进行冷冻干燥，冷阱温度为_30°C，真空度为80Pa，至水分含量为小于8%为止，冻干后即得到海参肠自溶残渣活性物质。两种产品为淡黄色固体粉末，无臭，有海参肠固有的鲜味，易溶于水，有吸湿性，其具有一定的体外抗氧化能力，可作为功能基料用于制备多种功能型食品。
实例二:
将200g海参肠清洗、剪碎、匀浆，匀浆处理后紫外线(30W，0.5m)照射40min，加入3.5倍体积的pH6.0的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液，于50°C自溶3h。自溶结束后，4000r/min离心20min，取上清液，残渣备用。上清液经真空冷冻浓缩为原体积的20%，即为海参肠自溶活性物质粗品。海参肠自溶活性物质粗品经Sephadex G_15凝胶柱分离，控制流速为0.5mL/min，收集主要组分，进行冷冻干燥。调节冷阱温度为_45°C，真空度为50Pa，至水分含含量小于8 %，冻干后即得到海参肠自溶活性物质。
海参肠自溶残渣，加入2倍体积去离子水混匀，90°C加热15min。冷却后，在50°C，PH7.0下，加入2000U/g蛋白的中性蛋白酶，酶解120min。酶解完毕后，酶解液于100°C加热5min灭酶，IOkDa超滤,收集分子量低于IOkDa的组分,冷冻浓缩至原体积的15%,即为海参肠自溶残渣活性物质粗品。浓缩液经葡聚糖凝胶Sephadex G_25层析柱，用去离子水洗脱，控制流速为0.3mL/min，收集主要组分，进行冷冻干燥，冷阱温度为_45°C，真空度为50Pa，至水分含量为小于8%为止，冻干后即得到海参肠自溶残渣活性物质。两种产品为淡黄色固体粉末，无臭，有海参肠固有的鲜味，易溶于水，有吸湿性，其具有一定的体外抗氧化能力，可作为功能基料用于制备多种功能型食品。
实例三:
将Ikg海参肠清洗、剪碎、匀浆，放置在不锈钢槽内，浆液的厚度为I 2cm，在上方0.5m处放置紫外灯，控制浆液液面紫外强度为60 μ ff/cm2,保持15min进行自溶诱导。然后，加入2倍体积的pH4.0的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液，于45°C自溶4h。自溶结束后，3500r/min离心20min，取上清液，残渣备用。上清液经真空冷冻浓缩为原体积的15%，即为海参肠自溶活性物质粗品。海参肠自溶活性物质粗品经Sephadex G_15凝胶柱分离,控制流速为0.35mL/min，收集主要组分，进行冷冻干燥。调节冷阱温度为_45°C，真空度为65Pa，至水分含量小于8 %，冻干后即得到海参肠自溶活性物质。
海参肠自溶残渣，加入3倍体积去离子水混匀，95°C加热lOmin。冷却后，在50°C，PH7.0下，加入3000U/g蛋白的枯草芽孢杆菌1398中性蛋白酶，酶解60min。酶解完毕后，酶解液于100°c加热5min灭酶，IOkDa超滤,收集分子量低于IOkDa的组分,冷冻浓缩至原体积的15%，即为海参肠自溶残渣活性物质粗品。浓缩液经葡聚糖凝胶Sephadex G_25层析柱，用去离子水洗脱，控制流速为0.25mL/min,收集主要组分，进行冷冻干燥，冷阱温度为-45°C，真空度为65Pa，至水分含量为小于8%为止，冻干后即得到海参肠自溶残渣活性物质。两种产品为淡黄色固体粉末，无臭，有海参肠固有的鲜味，易溶于水，有吸湿性，其具有一定的体外抗氧化能力，可作为功能基料用于制备多种功能型食品。
实例四:
将500g海参肠清洗、剪碎、匀浆，匀浆处理后紫外线(30W，0.5m)照射lOmin，加入4倍体积的pH4.0的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液，于60°C自溶0.5h。自溶结束后，4500r/min离心15min，取上清液，残渣备用。上清液经真空冷冻浓缩为原体积的20%，即为海参肠自溶活性物质粗品。海参肠自溶活性物质粗品经Sephadex G_15凝胶柱分离，控制流速为0.4mL/min,收集主要组分，进行冷冻干燥。调节冷阱温度为_35°C，真空度为75Pa，至水分含量小于6%，冻干后即得到海参肠自溶活性物质。
海参肠自溶残渣，加入2倍体积去离子水混匀，100°C加热5min。冷却后，在50°C，PH7.0下，加入2000U/g蛋白的中性蛋白酶，酶解150min。酶解完毕后，酶解液于95°C加热IOmin灭酶，4500r/min离心15min，取上清液，经真空冷冻浓缩为原体积的20%，即为海参肠自溶残渣活性物质粗品。浓缩液经葡聚糖凝胶Sephadex G_25层析柱，用去离子水洗脱，控制流速为0.3mL/min，收集主要组分，进行冷冻干燥，冷阱温度为_35°C，真空度为75Pa，至水分含量为小于8%为止，冻干后即得到海参肠自溶残渣活性物质。两种产品为淡黄色固体粉末，无臭，有海参肠固有的鲜味，易溶于水，有吸湿性，其具有一定的体外抗氧化能力，可作为功能基料用于制备多种功能型食品。
实例五:
将300g海参肠清洗、剪碎、匀浆，匀浆处理后紫外线(30W，0.5m)照射30min，加入I倍体积的PH5.0的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液，于35°C自溶6h。自溶结束后，5000r/min离心15min，取上清液，残渣备用。上清液经真空冷冻浓缩为原体积的20%，即为海参肠自溶活性物质粗品。海参肠自溶活性物质粗品经Sephadex G_15凝胶柱分离，控制流速为0.5mL/min，收集主要组分，进行冷冻干燥。调节冷阱温度为_40°C，真空度为70Pa，至水分含量小于6%，冻干后即得到海参肠自溶活性物质。
海参肠自溶残渣，加入4倍体积去离子水混匀，90°C加热lOmin。冷却后，在50°C，pH7.0下，加入1500U/g蛋白的中性蛋白酶，酶解180min。酶解完毕后，酶解液于100°C加热5min灭酶，5000r/min离心15min，取上清液，上清液经真空冷冻浓缩为原体积的15%，即为海参肠自溶残渣活性物质粗品。浓缩液经葡聚糖凝胶Sephadex G_25层析柱，用去离子水洗脱，控制流速为0.4mL/min，收集主要组分，进行冷冻干燥，冷阱温度为_40°C，真空度为70Pa，至水分含量为小于8%为止，冻干后即得到海参肠自溶残渣活性物质。两种产品为淡黄色固体粉末，无臭，有海参肠固有的鲜味，易溶于水，有吸湿性，其具有一定的体外抗氧化能力，可作为功能基料用于制备多种功能型食品。
实例六:
将1.5kg海参肠清洗、剪碎、匀浆，放置在不锈钢槽内，浆液的厚度为2cm，在上方0.3m处放置紫外灯，控制浆液液面紫外强度在100 μ ff/cm2,保持20min进行自溶诱导。然后，加入3倍体积的pH7.0的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液，于50°C自溶2h。自溶结束后，2500r/min离心30min，取上清液，残渣备用。上清液经真空冷冻浓缩为原体积的20%，即为海参肠自溶活性物质粗品。海参肠自溶活性物质粗品经Sephadex G_15凝胶柱分离,控制流速为0.3mL/min，收集主要组分，进行冷冻干燥。调节冷阱温度为_45°C，真空度为70Pa，至水分含量小于6 %，冻干后即得到海参肠自溶活性物质。
海参肠自溶残渣，加入2倍体积去离子水混匀，100°C加热5min。冷却后，在50°C，pH7.0下，加入2500U/g蛋白的中性蛋白酶，酶解120min。酶解完毕后，酶解液于95°C加热IOmin灭酶，2500r/min离心30min,取上清液,上清液经冷冻浓缩至原体积的10%,即为海参肠自溶残渣活性物质粗品。浓缩液经葡聚糖凝胶Sephadex G_25层析柱，用去离子水洗脱，控制流速为0.3mL/min，收集主要组分，进行冷冻干燥，冷阱温度为_45°C，真空度为70Pa，至水分含量为小于8%为止，冻干后即得到海参肠自溶残渣活性物质。两种产品为淡黄色固体粉末，无臭，有海参肠固有的鲜味，易溶于水，有吸湿性，其具有一定的体外抗氧化能力，可作为功能基料用于制备多种功能型食品。
实例七:
将800g海参肠清洗、剪碎、匀浆，匀浆处理后紫外线(30W，0.5m)照射5min，加入4倍体积的PH6.0的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液，于60°C自溶0.5h。自溶结束后，5500r/min离心lOmin，取上清液，残渣备用。上清液经真空冷冻干后即为海参肠活性物质粗品。海参肠活性物质粗品用水溶解，经Sephadex G-15凝胶柱分离,控制流速为0.45mL/min,收集主要组分，进行冷冻干燥。调节冷阱温度为_35°C，真空度为60Pa，至水分含量小于6%，冻干后即得到海参肠自溶活性物质。
海参肠自溶残渣，加入3倍体积去离子水混匀，90°C加热15min。冷却后，在50°C，PH7.0下，加入3000U/g蛋白的中性蛋白酶，酶解120min。酶解完毕后，酶解液于100°C加热5min灭酶，IOkDa超滤,收集分子量低于IOkDa的组分,冷冻浓缩至原体积的15%,即为海参肠自溶残渣活性物质粗品。浓缩液经葡聚糖凝胶Sephadex G_25层析柱，用去离子水洗脱，控制流速为0.25mL/min，收集主要组分，进行冷冻干燥，冷阱温度为_35°C，真空度为60Pa，至水分含量为小于8%为止，冻干后即得到海参肠自溶残渣活性物质。两种产品为淡黄色固体粉末，无臭，有海参肠固有的鲜味，易溶于水，有吸湿性，其具有一定的体外抗氧化能力，可作为功能基料用于制备多种功能型食品。
实例八:
将2kg海参肠清洗、剪碎、匀浆，放置在不锈钢槽内，浆液的厚度为1cm，在上方0.5m处放置紫外灯，使浆液液面紫外强度为ΙΟΟμ W/cm2，保持20min进行自溶诱导。然后，加入4倍体积的pH4.0的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液，于55°C自溶1.5h。自溶结束后，6000r/min离心lOmin，取上清液，残渣备用。上清液经真空冷冻浓缩后即为海参肠自溶活性物质粗品。然后经Sephadex G-15凝胶柱分离,控制流速为0.5mL/min,收集主要组分,进行冷冻干燥。调节冷阱温度为_35°C，真空度为65Pa，至水分含量小于6%，冻干后即得到海参肠自溶活性物质。
海参肠自溶残渣，加入4倍体积去离子水混匀，90°C加热15min。冷却后，在50°C，pH7.0下，加入2000U/g蛋白的枯草芽孢杆菌1398中性蛋白酶，酶解180min。酶解完毕后，酶解液于95°C加热5min灭酶，6000r/min离心IOmin,取上清液,上清液经真空冷冻浓缩为原体积的15%，即为海参肠自溶残渣活性物质粗品。浓缩液经葡聚糖凝胶Sephadex G_25层析柱，用去离子水洗脱，控制流速为0.4mL/min，收集主要组分，进行冷冻干燥，冷阱温度为-35°C，真空度为65Pa，至水分含量为小于8%为止，冻干后即得到海参肠自溶残渣活性物质。两种产品为淡黄色固体粉末，无臭，有海参肠固有的鲜味，易溶于水，有吸湿性，其具有一定的体外抗氧化能力，可作为功能基料用于制备多种功能型食品。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式
，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
权利要求
1.一种利用海参肠自溶制备活性物质的方法，其特征在于，以海参肠为原料，经匀浆、自溶、取上清液，冷冻浓缩至原体积的10% 20%或真空冷冻干燥至水分含量小于等于8%，制得海参肠活性物质粗品；再经分离、冷冻干燥制得精制活性物质。
2.根据权利要求1所述利用海参肠自溶制备活性物质的方法，其特征在于，所述自溶的工序为: 匀浆后所得匀浆液经紫外线照射后，加入1 4倍体积、pH 4.0 7.0的柠檬酸与磷酸氢二钠缓冲溶液，在35 60°C下自溶0.5 4h，或在4 10°C时，自溶4 12h。
3.根据权利要求2所述利用海参肠自溶制备活性物质的方法，其特征在于，所述自溶工序中选用30瓦紫外灯,距离0.5m照射5 40min,进行自溶诱导； 或者，将匀浆液放置在不锈钢槽内，在上方0.2 0.5m处放置紫外灯，控制浆液液面紫外强度为60 120 μ W/cm2，保持5 40min进行自溶诱导。
4.根据权利要求3所述利用海参肠自溶制备活性物质的方法，其特征在于，所述取上清液的工序为:2500 6000r/min离心10 30分钟，取上清液；或者所述取上清液的工序采用超滤的方式，收集10kDa以下的组分。
5.根据权利要求1-4任一所述利用海参肠自溶制备活性物质的方法，其特征在于，所述分离的工序为: 将所述海参肠活性物质粗品上样于葡聚糖凝胶Sephadex G_15层析柱，用去离子水洗脱，控制流速为0.3 0.5mL/min,对峰面积占各组分总峰面积70% 80%的活性组分进行收集。
6.根据权利要求5所述利用海参肠自溶制备活性物质的方法，其特征在于，所述冷冻干燥的工序为:在冷阱温度-30 _45°C、真空度为50 SOPa条件下进行干燥。
7.一种利用海参肠自溶制备活性物质的方法，其特征在于，以海参肠为原料，经匀浆、自溶； 而后取残洛，加入2 4倍体积的去离子水混勻，90°C 100°C加热5 15min ;冷却后于50°C、pH7.0下，加入1500 3000U/g蛋白的中性蛋白酶，酶解30 180min ； 酶解液于95 100°C加热5 IOmin灭酶，冷却后于2500 6000r/min下离心10 30min ； 而后取上清液或采用超滤的方式收集IOkDa以下的组分，制得海参肠自溶残渣活性物质。
8.根据权利要求7所述利用海参肠自溶制备活性物质的方法，其特征在于，所述自溶的工序为: 匀浆后所得匀浆液经紫外线照射后，加入1 4倍体积、pH 4.0 7.0的柠檬酸与磷酸氢二钠缓冲溶液，在35 60°C下自溶0.5 4h，或在4°C 10°C时，自溶4 12h。
其中，紫外线照射的工序为:所述自溶工序中选用30瓦紫外灯，距离0.5m照射5 40min进行自溶诱导；或者，将匀浆液放置在不锈钢槽内，浆液厚度1 2cm，在上方0.2 0.5m处放置紫外灯，控制浆液液面紫外强度为60 120 μ w/cm2,保持5 40min进行自溶诱导。
9.根据权利要求7或8所述利用海参肠自溶制备活性物质的方法，其特征在于，将制得的海参肠自溶残渣活性物质采用冷冻浓缩的方法浓缩至原体积的10% 20%，或者采用真空冷冻干燥的方式干燥至水分含量小于等于8 %，获得海参肠自溶残渣活性物质粗品。
10.根据权利要求9所述利用海参肠自溶制备活性物质的方法，其特征在于，将所述海参肠自溶残渣活性物质粗品上样于葡聚糖凝胶S^hadex G-25层析柱，用去离子水洗脱，控制流速为0.2 0.4mL/min,对峰面积占各组分总峰面积的80% 95%的主要组分进行收集; 最后，在冷阱温度为-30 -45°C，真空度为50 SOPa条件下进行干燥，至水分含量小于等于8%为止，冻 干后制得精制活性物质。
全文摘要
本发明公开了一种利用海参肠自溶制备活性物质的方法，所采用的制备方法是海参肠匀浆后，经紫外线照射诱导，在一定条件下利用内源酶的作用使其自溶，自溶混合液经离心、冷冻浓缩、Sephadex G-15分离、冷冻干燥制成。海参肠自溶活性物质为淡黄色固体粉末，无臭，有海参肠固有的鲜味，易溶于水，有吸湿性，具有一定的体外抗氧化能力，可作为功能基料用于制备多种功能型食品。本发明的突出特点是利用海参肠本身具有的自溶能力制备活性物质，能够最大程度的保持原有的营养成分，同时还减少环境污染。加工处理的工艺合理、简单、成本低，加工产品绿色、无污染。
文档编号A23L1/29GK103141872SQ20111043571
公开日2013年6月12日 申请日期2011年12月22日 优先权日2011年12月22日
发明者朱蓓薇, 吴海涛, 董秀萍, 郑杰, 孙黎明, 周大勇, 李冬梅, 杨静峰 申请人:大连工业大学