陆地棉转化事件icr201501及其特异性鉴定方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物技术领域，具体设及陆地棉转化事件ICR201501及其特异性鉴定 方法。
【背景技术】
[0002] 转化事件是由外源基因在基因组插入位点的上下游侧翼区和外源基因构成的分 子结构。通常，外源基因转化植物可W得到一个转化体群体，运个转化体群体包含大量独立 的事件，其中每个事件都是独特的。外源基因在植物中的表达受到外源基因所插入的染色 体位置的影响。运可能源自染色质结构或者整合位点附近转录调控元件的影响。相同基因 在不同转化事件中的表达水平具有很大的差异，在表达的空间或时间模式上也可能存在差 异。而且外源基因的插入也可能会影响内源基因的表达。因此，每个独立转化事件对受体 植物的影响都是不同的。获得能有效表达外源基因，同时不影响植株本身农艺性状的植物 转化事件在培育转基因作物新品种中具有重要的应用价值。
[0003] 棉花作为天然可再生纤维原料，在纺织工业中发挥着重要，优质纤维是纺织工业 所期望的。可将转基因技术的方法用于棉花W产生具有纤维改良性状。例如可通过表达能 够使纤维细胞伸长的转基因在转基因棉花中获得长纤维棉。转基因在棉花中的表达可受多 个因素影响，例如T-DNA插入区中所使用的调控元件、转基因在染色体上的插入位点及接 近整合位置的任何内源调控元件的相似性的组合都会影响转基因的表达。例如，采用相同 的转化方法获得的相似的转化事件之间的基因表达水平呈现出差异性，转化事件表现出差 异性。因此，必须获得足够量的转化事件，并进行田间筛选W获得生产上有价值的转化事 件。
【发明内容】
[0004] 本发明的一个目的是提供一种转基因棉花的培育方法。
[000引本发明提供的转基因棉花的培育方法为将外源DNA片段插入目的棉花基因组第A05号染色体的第8415359-8415371位间，替换掉第A05号染色体的第8415359-8415371位 间Ubp的碱基序列，得到转基因棉花；
[0006] 所述转基因棉花的纤维品质高于所述目的棉花；
[0007] 所述外源DNA片段为含有化KCS6基因的DNA分子。
[000引上述方法中，
[0009] 所述外源DNA片段的核巧酸序列为序列表中序列1 ;
[0010] 所述外源DNA片段在所述转基因棉花的上游侧翼片段为所述目的棉花基因组第 A05号染色体的自第8415359位核巧酸起向其上游方向延伸得到的长度为0至5肺的任意 一个DNA片段；
[0011] 所述外源DNA片段在所述转基因棉花的下游侧翼片段为所述目的棉花基因组第 A05号染色体的自第8415371位核巧酸起向其下游方向延伸得到的长度为0至5肺的任意 一个DM片段。
[0012] 上述方法中，
[0013] 所述上游侧翼片段为序列表中序列2所示的核巧酸；
[0014] 所述下游侧翼片段为序列表中序列3所示的核巧酸；
[0015] 所述转基因棉花的纤维品质高于所述目的棉花体现在如下BD-B12):
[0016]B1)转基因棉花纤维的长度高于所述目的棉花；
[0017]B2)转基因棉花纤维的马克隆值高于所述目的棉花；
[0018]B3)转基因棉花纤维的比强度高于所述目的棉花；
[0019]B4)转基因棉花纤维的整齐度高于所述目的棉花；
[0020] B5)转基因棉花的巧棉产量高于所述目的棉花；
[0021] B6)转基因棉花的株高高于所述目的棉花；
[0022] B7)转基因棉花的叶片长度高于所述目的棉花；
[0023] B8)转基因棉花的叶片宽度高于所述目的棉花；
[0024]B9)转基因棉花的叶柄长度高于所述目的棉花；
[00巧]B10)转基因棉花的叶柄宽度高于所述目的棉花；
[0026]B11)转基因棉花的单铃重高于所述目的棉花；
[0027]B12)转基因棉花的成铃数目高于所述目的棉花；
[0028] 所述外源DNA片段通过含有所述外源DNA片段的重组载体导入所述目的棉花；
[0029] 所述目的棉花为陆地棉。
[0030] 上述方法中，所述转基因棉花为转基因棉花ICR201501。
[0031] 本发明的另一个目的是提供用于检测或辅助检测植物样品是否来源于上述转基 因棉花ICR201501或其后代的方法。
[0032] 本发明提供的用于检测或辅助检测植物样品是否来源于上述转基因棉花 ICR201501或其后代的方法包括如下步骤：
[003引检测所述植物样品的基因组DNA中是否含有DNA片段A，
[0034] 所述DNA片段A由上述外源DNA片段在所述转基因棉花ICR201501的上游侧翼片 段、上述外源DNA片段和上述外源DNA片段在所述转基因棉花ICR201501的下游侧翼片段 组成；
[0035] 若所述植物样品的基因组DNA含有所述DNA片段A，则所述植物样品为或候选为 所述转基因棉花ICR201501或其后代；
[0036] 若所述植物样品的基因组DNA不含有所述DNA片段A，则所述植物样品不为或候选 不为所述转基因棉花ICR201501或其后代。
[0037] 上述方法中，
[003引所述方法为如下1)或2)或3):
[00測 1)直接测序；
[0040] 2)用引物对1和/或引物对2对植物样品的基因组DNA进行PCR扩增，若有目的 扩增产物，则所述植物样品来源于所述转基因棉花ICR201501或其后代；
[0041] 所述引物对1为能够扩增由所述外源DNA片段5'端和紧邻其的所述上游侧翼序列 部分或全部片段组成的DNA分子甲的引物对；其对应的目的扩增产物为所述DNA分子甲；
[0042] 所述引物对2为能够扩增含有所述外源DM片段3'端和紧邻其的所述下游侧翼序 列的部分或全部组成的DNA分子乙的引物对；其对应的目的扩增产物为所述DNA分子乙；[004引3)用能特异结合所述DNA分子甲或其DNA分子乙的探针对所述待测植物样品 DNA进行Southern杂交，若能杂交得到杂交片段，则所述植物样品来源于所述转基因棉花 ICR201501或其后代。
[0044] 上述方法中，
[004引2)中，所述引物对1由序列表中序列5所示的单链DNA分子和序列表中序列6所 示的单链DNA分子组成；
[0046] 所述引物对2由序列表中序列7所示的单链DNA分子和序列表中序列8所示的单 链DNA分子组成。
[0047] 本发明还有一个目的是提供用于检测样品是否来源于所述转基因棉花ICR201501 或其后代的试剂盒。
[0048] 本发明提供的用于检测样品是否来源于所述转基因棉花ICR201501或其后代的 试剂盒包括上述引物对1和/或上述引物对2。
[0049] 上述转基因棉花ICR201501在育种中的应用也属于本发明的保护范围。
[0050] 本发明还有一个目的是提供一种获得纤维品质提高的棉花的方法。
[0051] 本发明提供的获得纤维品质提高的棉花的方法包括如下步骤：
[0052] (1)按照上述方法获得转基因棉花；
[0053] (2)将所述转基因棉花自交或杂交，得到繁育后代，按照上述方法鉴定所述繁育后 代，得到目标植株；
[0054] 所述转基因棉花的保藏编号为CCTCC NO.P201517。
[0055] 本发明的最后一个目的是提供用于转基因棉花的培育的产品。
[0056] 本发明提供的用于转基因棉花的培育的产品为如下a)-c):
[0057]a)上述上游侧翼片段和上述下游侧翼片段；
[005引b)上述外源DNA片段；
[0059]C)与上述外源DNA片段相关的生物材料；
[0060] 所述生物材料为下述A1)至A11)中的任一种：
[0061]A1)含有上述外源DNA片段的表达盒；
[0062]A2)含有上述外源DNA片段的重组载体；
[0063]A3)含有A1)所述表达盒的重组载体；
[0064]A4)含有上述外源DNA片段的重组微生物；
[0065]A5)含有A1)所述表达盒的重组微生物；
[0066]A6)含有A2)所述重组载体的重组微生物；
[0067]A7)含有A3)所述重组载体的重组微生物；
[0068]A8)含有上述外源DNA片段的转基因植物细胞系；
[0069]A9)含有A1)所述表达盒的转基因植物细胞系；
[0070]A10)含有A2)所述重组载体的转基因植物细胞系；
[007。All)