一种制备高纯度丹参酮iia和丹参酮i的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及植物有效成分提取领域，具体地涉及一种高纯度丹参酮的分离纯化方法。
技术背景
[0002]丹参的化学成分主要有两大类，脂溶性成分属醌、酮型结构的有:丹参酮，隐丹参酮，异丹参酮，异隐丹参酮，羟基丹参酮，丹参酸甲酯，亚甲基丹参醌，二氢丹参酮，丹参新醌A、B、C、D，二氢异丹参酮，新隐丹参酮等。水溶性酚性酸化合物有:丹参素、丹参酚酸、丹参酚酸六4、(:、03、6;迷迭香酸，迷迭香酸甲酯，紫草酸草酸单甲脂，紫草酸二甲酯，紫草酸乙酯，紫草酸B，原儿茶醛，咖啡酸，异阿魏酸等。《中国药典》2010版中药材临床标准中规定了丹参的功能主治标准:活血祛瘀,通经止痛,清心除烦，凉血消痈。
[0003]在临床上，丹参提取物广泛应用于治疗心血管病的中成药制剂，其中丹参酮IIA对心肌具有修复作用，可减轻缺氧引起的心肌损伤，同时改善心肌收缩力，促进心肌再生。此外还具有抑制ADP诱导血小板凝集、抑制血小板TXA2的合成、释放缩血管物质及促进纤维蛋白降解等作用，可降低冠心病、脑缺血、中风及心肌梗塞病人的全血和血浆粘度，减少红细胞压积，通过抗凝降粘的作用使患者血液流变学指标恢复正常。
[0004]传统的丹参酮提取工艺为:取丹参，切成小段，加水于80°C提取两次，合并提取液，滤过，滤液于60°C减压浓缩至相对密度为1.18?1.22(50°C )的清膏，放冷，加乙醇使含醇量为70%，静置12小时，取上清液，减压回收乙醇，并浓缩至稠膏，干燥，即得。该工艺制备的丹参酮为酮类的混合物，丹参酮ΠΑ、丹参酮I的的纯度较低。
[0005]为了克服现有技术的不足，制备出高纯度的丹参酮，本发明提供了一种采用Sephadex LH-20分离介质的层析分离纯化技术。Sephadex LH20的分离原理以凝胶过滤作用为主，兼具反相分配的作用，特点为:1、适合用有机溶剂分离嗜脂性分子，可以非常经济地大规模制备各种天然产物2、结合凝胶过滤、分配色谱及吸附性层析于一身，分离结构非常相近的分子3、载量可高达300mg样品/ml凝胶，极少需要再生，分离效果可保持十几年不变。本发明采用Sephadex LH-20层析柱对丹参酮粗品进行分离纯化，通过优选分离条件，纯化出丹参酮IIA、丹参酮I单体。
【发明内容】
[0006]本发明提供了一种工艺简单、成本低的丹参酮IIA、丹参酮I提取和纯化方法。
[0007]本发明的丹参酮提取和纯化方法是以丹参为原料，采用95%乙醇或无水乙醇作为提取剂，提取出丹参酮类组分，再采用Sephadex LH20层析柱对其进行纯化，制备出丹参酮IIA、丹参酮I单体。
[0008]本发明所述原料为丹参(拉丁学名Salvia milt1rrhiza Bunge,又名赤参，紫丹参，红根等)的根莖。
[0009]本发明提取及纯化方法如下:
[0010]1.原材料预处理:取干燥后的丹参根，除去其中的可见杂物后，用粉碎机粉碎，过40目筛备用。
[0011]2.醇提:将步骤1的丹参根粉置于提取罐中，加入10?20倍重量的95%乙醇或无水乙醇，于55?85°C浸提1?4小时，重复浸提2?4次。
[0012]3.过滤浓缩:将步骤2的浸提液用滤布过滤，减压蒸馏回收乙醇，将浸提液浓缩至稠膏状。
[0013]4.Sephadex LH20层析分离:用相当于0.5?2倍丹参根粉重量的甲醇溶解步骤3制取的稠膏，用滤布过滤除去不溶性杂质后，以10?50mL/min的流速通过Sephadex-LH 20层析柱。上样结束后，用甲醇/异丙醇混合溶液进行洗脱，流速为15?60mL/min。甲醇:异丙醇:水的比例=5?7: 1?3: 2?4。分别收集橘红色洗脱液(含丹参酮IIA)和棕红色洗脱液(含丹参酮I)。
[0014]5.将步骤4中收集的洗脱液于40?65°C减压蒸馏浓缩成浓缩液，采用喷雾干燥的方法制成粉末状成品。喷雾干燥时进风口温度为110?135°C，出风口温度为95?115。。。
[0015]本发明采用Sephadex LH20柱层析分离技术，经过发明人的多次实验,对流速、洗脱液所用溶剂、洗脱液所用混合溶剂的比例、喷雾干燥条件等工艺条件不断进行优化，使得本发明的方法具有以下优点和积极的效果:
[0016](1)相对于传统方法，大幅提高了丹参酮IIA和丹参酮I的提取效率和纯度，并且最大程度地保留了有效成分的活性；
[0017](2)提取过程节能环保，能耗低；
[0018](3)所用的分离介质Sephadex LH20，具有操作简单、容易再生、成本低等优势，非常适于大规模生产；
[0019](4)可同时产生丹参酮IIA和丹参酮I两种产品，纯度均达到90%以上，可以作为保健品和药品的原料，适应市场的不同需要。
【具体实施方式】
[0020]下面以具体实施例对本发明做进一步的详细说明。应当理解的是，具体实施例仅是对本发明做出更清楚的说明，而不是对本发明的限制。
[0021]实施例1:
[0022]将干燥的丹参根磨成粉，按照1份丹参根粉:10份95 %乙醇的比例加入95 %乙醇，在65°C加热保温回流4h，过滤得到滤液，再重复回流步骤两次，合并三次回流得到的滤液，减压蒸馏回收乙醇，得到丹参提取物浸膏。
[0023]用相当于1份丹参根粉重量的甲醇溶解上述浸膏，过滤除去不溶杂质后，以10mL/min的流速通过Sephadex-LH 20层析柱。用甲醇/异丙醇混合溶液进行洗脱(甲醇:异丙醇:水=6: 1: 3)，流速为15mL/min。分别收集橘红色洗脱液(含丹参酮IIA)和棕红色洗脱液(含丹参酮I)。
[0024]将上述洗脱液于60°C减压浓缩成浓缩液，采用喷雾干燥制成粉末状成品。喷雾干燥时进风口温度为120°C，出风口温度为110°C。
[0025]HPLC检测条件为:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(75: 25)为流动相；检测波长为270nm ;流速为lmL/min ;检测温度为室温。经检测，本实施例中制备的丹参酮IIA纯度为94.7% ;丹参酮I纯度为93.5%。
[0026]实施例2:
[0027]将干燥的丹参根磨成粉，在超声波逆流提取装置中于65°C进行提取，提取溶剂为95%乙醇。将提取液减压蒸馏回收乙醇后得到丹参提取物浸膏。
[0028]用相当于1份丹参根粉重量的甲醇溶解上述浸膏，过滤除去不溶杂质后，以10mL/min的流速通过Sephadex-LH 20层析柱。用甲醇/异丙醇混合溶液进行洗脱(甲醇:异丙醇:水=7: 1: 2)，流速为15mL/min。分别收集橘红色洗脱液(含丹参酮IIA)和棕红色洗脱液(含丹参酮I)。
[0029]将上述洗脱液于60°C减压浓缩成浓缩液，采用喷雾干燥制成粉末状成品。喷雾干燥时进风口温度为120°C，出风口温度为110°C。
[0030]HPLC检测条件为同实施例1。经检测，本实施例中制备的丹参酮IIA纯度为95.2% ;丹参酮I纯度为94.1%。
【主权项】
1.一种高效提取丹参酮IIA和丹参酮I方法，其包括以丹参为原料，采用醇提法制备出丹参酮混合物，再采用Sephadex LH20层析进一步分离，使用甲醇/异丙醇混合洗脱液进行洗脱，收集丹参酮II A洗脱液和丹参酮I洗脱液，经过浓缩和喷雾干燥工艺后，得到精制的丹参酮ΠΑ和丹参酮I。2.如权利要求1所述的高效提取丹参酮IIA和丹参酮I方法，醇提法所用的试剂为95%乙醇或无水乙醇。3.如权利要求1所述的高效提取丹参酮IIA和丹参酮I方法，层析分离介质为Sephadex LH20。4.如权利要求1所述的高效提取丹参酮IIA和丹参酮I方法，甲醇/异丙醇混合洗脱液的比例为甲醇:异丙醇:水的比例=5?7: 1?3: 2?4。5.如权利要求1所述的高效提取丹参酮IIA和丹参酮I方法，层析分离上样时流速为10?50mL/min,洗脱时流速为15?60mL/min。6.如权利要求1所述的高效提取丹参酮IIA和丹参酮I方法，喷雾干燥时进风口温度为110?135°C，出风口温度为95?115°C。
【专利摘要】本发明公开了一种工艺简单且成本低的丹参酮IIA、丹参酮I提取和纯化方法。其中以丹参根为原料，首先采用醇提法制备出丹参酮混合物，再采用Sephadex？LH20层析进一步分离，使用甲醇/异丙醇混合溶液进行洗脱，收集丹参酮IIA洗脱液和丹参酮I洗脱液，经过浓缩和喷雾干燥工艺后，得到精制的丹参酮IIA和丹参酮I，纯度可达90％以上。本发明的方法最大程度地保留了有效成分的活性，显著提高提取效率，适合大规模生产应用。
【IPC分类】C07J73/00
【公开号】CN105399796
【申请号】CN201410468943
【发明人】胡玮, 王玉海
【申请人】宁波润沃生物科技有限公司
【公开日】2016年3月16日
【申请日】2014年9月11日