Ahu-377结晶型游离酸及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物技术领域，具体涉及一种NEP抑制剂AHU-377结晶型游离酸及其 制备方法和应用。
【背景技术】
[0002] 中性内肽酶（EC3. 4. 24. 11 ;脑啡肽酶；必肽酶；NEP)是一种可以在芳族氨基酸的 氨基末端上裂解各种肽底物的包含锌的金属蛋白酶。这种酶的底物非限制性地包括心钠素 (ANF，也被称为ANP)、脑钠肽（BNP)、met和leu脑啡肽、缓激肽、神经激肽A和P物质。
[0003] ANF是一族血管舒张、利尿和抗高血压的肽类，一种形式--ANF99-126是在心脏 扩张情况中由心脏释放的循环肽激素。ANF的功能是维持盐和水的体内平衡以及调节血压。 ANF在循环中被至少两个过程迅速灭活：受体-介导的清除和在NEP进行的酶灭活。NEP抑 制剂增强了实验动物进行药理学ANF注射后的低血压、利尿、促尿钠排泄和血浆ANF响应。 通过两种特定的NEP抑制剂进行的ANF的增强，1988年，美国专利US4749688中一般性地公 开了可以用NEP来增强ANF。同年，美国专利US4740499中公开了噻奥芬（thiorphan)和凯 拉托芬也可以用于增强心房肽的应用。此外，NEP抑制剂可降低血压和发挥ANF-样作用如 在一些形式的实验性高血压中的利尿和增加环鸟苷3'，5'_单磷酸（cGMP)排泄的作用。因 为ANF的抗体将抵消血压的降低，所以NEP抑制剂的抗高血压作用是通过ANF介导的。长 期和不进行控制的高血压血管疾病最终将导致靶器官如心和肾的各种病理学改变。持续的 高血压也能导致中风的发生率增加。因此，强烈需要对抗高血压治疗的功效进行评估，即对 除了血压降低以外的其它心血管终点事件进行检查以进一步发现联合治疗的益处。
[0004] 1993年，Gary Ksander等在美国专利US5217996中公开了一类联芳基取代的4-氨 基丁酸衍生物，该类化合物被发现具有明显的NEP抑制活性，其中最具代表性的一个化合 物为N-(3-羧基-1-氧代丙基）-(4S)-对-苯基苯基甲基）-4-氨基-2R-甲基丁酸乙酯 (又称 AHU-377)。
[0005]
[0006] 在实际生产制备过程中AHU-377通常以油状物出现，不利于保存及后续药物开 发。AHU-377粗品经叔丁醇酯化、氢氧化钠碱水解后得到的AHU-377钠盐经二氯甲烷/正 己烷重结晶后聚集状态不明，而且经发明人深入研究发现AHU-377钠盐吸湿性相当大，物 质不稳定且不利于储存，因此，AHU-377作为药物活性成分，其产品质量、物质稳定性、储存 或称量等均存在很大问题，其钠盐也没有解决上述问题，虽然美国专利US5217996也公开 了 AHU-377还可以制备成各种盐型化合物，例如碱金属盐、碱土金属盐、胺盐、烷基胺盐、羟 烷基胺盐等，但是，主要还是从AHU-377含有一个羧基的化学结构上推断得出，并未实际得 到各种除钠盐之外的其它盐型化合物，不能解决AHU-377产品质量差、物质不稳定、难以储 存及称量等问题。
[0007] 因此，鉴于现有技术存在的问题，有必要对AHU-377开发出一种稳定的游离酸聚 集状态，以符合药物开发的需要。
【发明内容】
[0008] 为了解决现有技术存在的问题，改善AHU-377理化性质，例如改善的结晶性，增加 溶解性，减少吸湿性，增强工艺可操作性，提高化学稳定性等。发明人通过深入研究，在现有 技术的基础上开发出了一种AHU-377结晶型游离酸，大大改善了 AHU-377的理化性质，例如 产品质量、溶解性、吸湿性、化学稳定性等。
[0009] 本发明第一方面提供一种AHU-377结晶型游离酸（指定为晶型I)，其X线粉末 衍射图包括位于 23·70±0·2°，15·84±0·2°，20·84±0·2° 和 8·56±0·2°，的衍射角 (2 Θ )处的峰。
[0010] 作为进一步优选的方案，优选其X射线粉末衍射图还包括位于17. 06±0. 2° ,25. 98±0·2°，18·01±0·2°，9·42±0·2° 和 26·91±0·2° 的衍射角（2Θ)处的峰。
[0011] 作为更进一步优选的方案，优选其X射线粉末衍射图进一步还包括位于34. 70±0 .2。，21.83±0.2。，25.69±0.2。，25.33±0.2。，11.67±0.2。和26.24±0.2。的衍射角 (2 Θ )处的峰。
[0012] 作为更进一步优选的方案，最优选其X射线粉末衍射图与图1中显示的衍射角 (2 Θ )处的峰基本上相同，其X射线粉末衍射数据如表1所示：
[0013] 表 1
[0014]
[0015] 本文所使用的关于X射线衍射峰位置的术语"基本上相同的"意指考虑典型的峰 位置和强度可变性。例如，本领域技术人员将理解，峰位置（2 Θ)将由于XRTO仪器不同， 而造成测量值有所变化，有时这种变化达有时多达0.2°。此外，本领域技术人员将理解， XRro样品制样方法，XRro仪器，样品结晶度，样品用量以及晶体择优取向等因素将导致样 品XRro衍射图中相对峰强度的改变。
[0016] 本发明第二方面提供一种AHU-377结晶型游离酸的制备方法，包括如下步骤，
[0017] 1)将AHU-377游离酸溶解在合适的有机溶剂中；
[0018] 2)降低溶液体系温度，和/或加入晶种，和/或加入适量反溶剂至溶液出现浑浊， 析晶；
[0019] 3)固液分离得到AHU-377结晶型游离酸。
[0020] 作为进一步优选的方案，包括如下步骤，
[0021] 1)将AHU-377游离酸在常温或加热状态下溶解在合适的有机溶剂中；
[0022] 2)降低步骤1)中溶液体系的温度，和/或加入晶种，析晶；
[0023] 3)固液分离得到AHU-377结晶型游离酸。
[0024] 作为进一步优选的方案，包括如下步骤，
[0025] 1)将AHU-377游离酸溶解在合适的有机溶剂中；
[0026] 2)将步骤1)中的溶液与反溶剂相混合；
[0027] 3)固液分离得到AHU-377结晶型游离酸。
[0028] 优选的，步骤2)中与反溶剂相混合之前在反溶剂中预先加入AHU-377结晶型游离 酸晶种。
[0029] 所述的"相混合"是指将步骤1)中的溶液滴加到反溶剂之中或者将反溶剂滴加到 步骤1)中的溶液之中。
[0030] 作为更进一步优选的方案，上述制备方法中步骤1)所述合适的有机溶剂为选自 醚类、环醚类、酯类、卤代烷烃、苯类有机溶剂或其混合物，包括但不限定于以下溶剂：自乙 酸乙酯、乙酸异丙酯、二氯甲烷、三氯乙烷、四氯化碳、甲基叔丁基醚、异丙醚、苯、甲苯、二甲 苯或其组合物，优选自乙酸异丙酯、二氯甲烷、甲基叔丁基醚、异丙醚或其组合物。
[0031] 作为更进一步优选的方案，上述制备方法中步骤2)所述反溶剂是指极性较小的 有机溶剂，包括但不限定于以下溶剂：正庚烷、正己烷、异辛烷、戊烷、环己烷、环戊烷、乙醚 或其组合物；优选自正庚烷、正己烷、环己烷、乙醚或其组合物。
[0032] 作为进一步优选的方案，上述制备方法中"溶解"是指本领域的普通技术人员一 般的操作，通常可以适当的加热使AHU-377游离酸原料溶解或溶清，或者在常温下（20~ 25°C )加大溶剂的用量来使AHU-377游离酸原料溶解或溶清。
[0033] 作为更进一步优选的方案，所述适当的加热优选将溶剂加热至40~80°C使 AHU-377游离酸原料溶解或溶清。
[0034] 作为更进一步优选的方案，所述加大溶剂的用量优选结晶溶剂的加入量为 AHU-377游离酸的5-20倍体积质量比，使AHU-377游离酸原料溶解或溶清。
[0035] 作为