一种结晶酶解法制备的葵花盘提取物及其制备方法
【专利摘要】本发明提供一种结晶酶解法制备的葵花盘提取物及其制备方法，葵花盘为纯天然中药或药食同源材料，经科学提取制成抗痛风，治疗高尿酸血症，提高免疫力，降血糖血脂，保肾护肝，消肿抗炎止痛的功能性保健药食同源保健品，能够溶解尿酸石，降低血尿酸浓度，消肿抗炎，调整嘌呤和尿酸代谢，平衡体内酸碱，平衡体内激素的功效；产品安全、无副作用，具有显著保健功效，可长期服用，具有很好的市场开发前景。
【专利说明】
-种结晶酶解法制备的葵花盘提取物及其制备方法
技术领域
[0001] 本发明属于中药领域，特别是设及一种悬浮结晶法和酶解法制备的葵花盘提取物 及其制备方法，W及用于制备预防和治疗痛风的药物的用途。
【背景技术】
[0002] 痛风是嚷岭代谢素乱所致的一种代谢疾病，血尿酸浓度升高，尿酸钢晶体沉积于 下肢骨关节、动脉、脊椎骨间隙组织而引起，表现为关节红、肿、热、痛，关节活动不利，严重 者呈关节崎形及功能障碍，且具有反复发作的特点。痛风的存在还可导致冠屯、病、糖尿病、 高血压等疾病的恶化。在治疗方面，西医药治疗痛风，尚无根治的方法，秋水仙碱、非酱体类 抗炎药、别嚷岭醇等药物虽可减轻症状，降低血尿酸，但其作用较单一，很难从根本上治疗 痛风，且长期服用此类西药对身体造成的伤害远比治疗效果多。而中医药治疗痛风，副作用 少，易被患者接受，从而达到长期用药，最终根治疾病的目的。但是，传统的中医药治疗痛风 方法还存在W下问题:对痛风病机的认识还缺乏共识，辨证分型较难统一；临床报道较多， 因缺乏对照，影响了治疗结果的可靠性;汤剂加减者多，固定剂型少，药物作用机制缺乏动 物试验的验证。直到现在，尚未有很好的治疗痛风药物。
[0003] 葵花盘为除葵花子后向日葵盘，中医理论认为：向日葵花盘，药性甘、寒，归肝经， 功用清热平肝，止痛止血;主治高血压病、头痛头晕、耳鸣、痛经、子宫出血、疮疹。《河北中草 药》曰："葵花盘清热燥湿，舒气散结。治头痛、头晕、风火牙痛，目赤云繫，颈前腹痛，外用于 蜂窝织炎"，具有明显消炎、利尿、降压的作用。
[0004] 在传统应用中，通常是将除葵花子后葵花盘作为牲畜饲料喂养牲畜或作为烧材取 暖做饭，没有发挥出其更大的经济效益和医疗作用，造成资源浪费。随着对葵花盘研发的逐 渐深入，出现了一些有关葵花盘活性成分提取的文献。
[0005] 胡文彬等（"葵花盘片治疗经典Ξ叉神经痛的初步疗效观察"，安徽医药，2013年， 第17卷，第5期，第828-830页)探讨了葵花盘片对71例Ξ叉神经痛患者的临床疗效，结果表 明，葵花盘片组和卡马西平片组治疗Ξ叉神经痛的总有效率差异无显著性(P〉〇.05)，卡马 西平片组治疗Ξ叉神经痛的显效率显著高于葵花盘片组(P<〇.05)，但葵花盘片组治疗Ξ叉 神经痛的不良反应明显低于卡马西平片组(P<〇.05)。
[0006] 中国专利申请CN201210466655.9利用向日葵采收过程中产生的废弃物向日葵花 盘，通过粉碎、热水浸泡和果胶酶进行酶解的方法获得了向日葵多糖，并公开了所述的多糖 具有调节免疫功能，增强免疫效应的作用。
[0007] 中国专利申请CN201510055248.2提供了一种提取率高、能耗低、操作简便的葵花 盘总黄酬的提取方法，是W开花期向日葵花盘为提取原料，利用超临界C02萃取方法进行总 黄酬的提取分离。通过该方法，总黄酬的提取率可达到1.93%，但是所述文献没有公开葵花 盘总黄酬的药理活性和临床应用。
[000引我国是向日葵的种植大国，葵花盘的资源丰富。为减少资源浪费，并获得安全、有 效的葵花盘活性成分，需要对葵花盘活性成分的提取做更为深入的研究。
【发明内容】
[0009] 为了克服本技术领域中的资源浪费现状，开发出更为安全、有效的葵花盘活性成 分，本发明提供了一种葵花盘提取物，其富含总黄酬、小分子肤和生物碱，具有降低血尿酸， 消除痛风产生的疼痛，溶解痛风石，抗炎消肿的功效，对痛风的预防和治疗具有显著的效 果，并且毒副作用较少，可长期服用。同时，用来制备本发明葵花盘提取物的方法操作简便、 提取效率高、生产成本低，适合工业化大生产。
[0010] 本发明是通过W下的技术方案来实现的。
[OOW -方面，本发明提供了一种葵花盘提取物，包含总黄酬10-20%，小分子肤1-3%和生 物碱10-30%。优选地，葵花盘提取物包含总黄酬16-20%，小分子肤2.4-3%和生物碱18-30%。
[0012] 在本发明的葵花盘提取物中，总黄酬、小分子肤和生物碱均为有效活性成分。其 中，葵花盘生物碱可W特异性结合尿酸形成葵花碱尿酸复合物，对痛风进行治疗;能抑制嚷 岭合成和嚷岭代谢，减少体内尿酸含量而消除尿酸；同时抑制炎性细胞的趋化和减少炎症 因子释放，对于急性发作的痛风关节炎具有独特的抗炎消肿效用。葵花盘里的黄酬是一种 很强的抗氧剂，可有效清除体内的氧自由基，阻止核酸的氧化，起到降低嚷岭含量的作用； 可W降低血糖和甘油立醋，降低毛细血管脆性，增加通透性可W减轻肾脏细胞压力，透过更 多尿酸。同时可W稳定肾蛋白小管，有利于肾脏代谢尿酸。黄酬还可W抑制炎性生物酶的渗 出，用W止痛。小分子肤是将大分子的蛋白质利用特制酶分解成小分子的物质，由2到10个 氨基酸残基分子组成，小分子肤可W经过肠道毛细血管直接吸收，转运全身起效，可W控制 嚷岭合成的PRPP酷胺转移酶，从而抑制嚷岭的合成抑制嚷岭代谢。小分子肤可W干扰黄嚷 岭氧化酶等嚷岭转化为尿酸的酶，从而控制体内尿酸含量。特别是对于遗传性痛风患者，由 于基因缺失，缺乏嚷岭代谢的酶，导致尿酸积累，小分子肤可W起到一定的缺失酶的作用。
[0013] 本发明的葵花盘提取物是采用破碎提取器破碎提取法提取、悬浮结晶法低溫冷冻 浓缩、酶解、超滤、低溫冷冻浓缩、干燥等工艺制成的。具体地，本发明的葵花盘提取物由包 括W下步骤的方法制备得到:称取新鲜或冷冻去巧的葵花盘，粉碎成80-150目细粉，加5-10 质量倍的15-30%乙醇溶液，置于闪式提取器中进行破碎提取，提取时间为100-300S，提取电 压为100-200V，然后利用悬浮结晶法低溫冷冻浓缩，浓缩液中加入0.003-0.005质量倍的复 合蛋白酶酶解3-化，并用中空纤维膜超滤，滤液冷冻结晶浓缩，加入适量赋形剂，喷雾干燥 即得。
[0014] 优选地，用于提取葵花盘细粉的乙醇溶液浓度为18-20%，低溫冷冻溫度为一28 °C--40°C。所述的复合蛋白酶为胃蛋白酶和膜蛋白酶按质量比为1:(1.5-3.0)混合的混合 物。所述赋形剂选自例如葡萄糖、半乳糖和/或微晶纤维素。
[0015] 因此，本发明还提供了葵花盘提取物的制备方法，所述方法包括W下步骤:称取新 鲜或冷冻去巧的葵花盘，粉碎成80-150目细粉，加5-10质量倍的15-30%乙醇溶液，置于闪式 提取器中进行破碎提取，提取时间为100-300S，提取电压为100-200V，然后利用悬浮结晶法 低溫冷冻浓缩，浓缩液中加入0.003-0.005质量倍的复合蛋白酶酶解3-化，并用中空纤维膜 超滤，滤液冷冻结晶浓缩，加入适量赋形剂，喷雾干燥即得。
[0016] 优选地，在本发明的制备方法中，用于提取葵花盘细粉的乙醇溶液浓度为18- 20%，低溫冷冻溫度为一28°C--40°C。所述的复合蛋白酶为胃蛋白酶和膜蛋白酶按质量比 为1:(1.5-3.0)混合的混合物。所述赋形剂选自例如葡萄糖、半乳糖和/或微晶纤维素。
[0017] 本发明的葵花盘提取物作为活性成分可被广泛应用于药品和/或保健品中。因此， 进一步地，本发明提供了一种药物组合物，其包含本发明的葵花盘提取物和任选的药学上 可接受的载体。所述的药物组合物可W为片剂、胶囊剂、滴丸剂、颗粒剂、散剂、微丸、溶液 剂、糖浆剂、乳剂或注射剂。例如，对于口服制剂，用法用量为口服1-2次/日，10-20g /次。适 应症为痛风、嚷岭代谢素乱、血尿酸高等疾病的预防和治疗。
[0018] 本发明的葵花盘提取物可通过多方面作用发挥其疗效，对动物急性痛风性关节炎 模型有抗炎作用，对化学或热刺激的疼痛有镇痛作用，可降低正常及高尿酸血症动物的血 尿酸，对动物的急、亚急性炎症早、后期均有抗炎作用。其治疗的机理是，通过小分子肤调节 体内嚷岭和尿酸代谢途径，阻断尿酸的代谢酶，同时黄酬类化合物具有镇痛消炎，增加肾小 管代谢尿酸的作用，葵花盘生物碱可W中和尿酸，消除尿酸，起到降低体内尿酸作用。经过 口服，尿酸病人2小时内95%病人可W达到降尿酸作用，连续服用本发明1个月，75%病人尿酸 水平恢复正常，无毒副作用。
[0019] 因此，本发明还提供了所述的葵花盘提取物或包含该葵花盘提取物的药物组合物 在制备预防和治疗痛风的药物中的用途。
[0020] 本发明与现有技术相比，积极效果在于： 葵花盘为纯天然中药或药食同源的材料，经科学提取后具有预防或治疗痛风，高尿酸 血症，W及消肿抗炎止痛的功能，并且可进一步制备成药物或保健品； 本发明的产品安全、无副作用，具有显著功效，可长期服用，具有很好的市场开发前景； 本发明葵花盘提取物的制备方法操作简便、提取效率高、生产成本低，适合工业化大生 产。
[0021]
【具体实施方式】： 为使本发明更加容易理解，下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。运些实施例只用 于说明本发明而不用于限制本发明的范围。
[0022] 实施例1: 葵花盘提取物的制备方法:称取新鲜或冷冻去巧葵花盘10kg，将葵花盘粉碎成80目细 粉，加5质量倍的20%乙醇溶液，置于闪式破碎提取器(荷泽杰普仪器有限公司）中破碎提取， 提取时间100s，提取电压150V，然后利悬浮结晶法低溫冷冻浓缩，低溫冷冻溫度为一28°C， 浓缩液中加入0.004质量倍的复合蛋白酶（胃蛋白酶和膜蛋白酶W质量比1:2混合)酶解解 3h，并用中空纤维膜超滤，滤液冷冻结晶浓缩，加入葡萄糖0.化g，喷雾干燥，分装，包装。
[0023] 实施例2: 葵花盘提取物的制备方法:称取新鲜或冷冻去巧葵花盘20kg，将葵花盘粉碎成100目 细粉，加8质量倍的20%乙醇溶液，置于闪式破碎提取器(荷泽杰普仪器有限公司）破碎提取， 提取时间200s，提取电压100V，然后利用悬浮结晶法低溫冷冻浓缩，低溫冷冻溫度为一40 °C，浓缩液加入0.003质量倍的复合蛋白酶（胃蛋白酶和膜蛋白酶W质量比1:1.5混合)酶酶 解，酶解地，并用中空纤维膜超滤，滤液冷冻结晶浓缩，加入半乳糖1kg，喷雾干燥，分装，包 装。
[0024] 实施例3 葵花盘提取物的制备方法:称取新鲜或冷冻去巧葵花盘30kg,将葵花盘粉碎成150目 细粉，加10质量倍的20%乙醇溶液，置于闪式破碎提取器(荷泽杰普仪器有限公司）破碎提 取，提取时间300s，提取电压200V，然后利悬浮结晶法低溫冷冻浓缩，低溫冷冻溫度为一30 °C，浓缩液加入0.0048质量倍的复合蛋白酶（胃蛋白酶和膜蛋白酶W质量比1:2.8混合)酶 解解，酶解化，并用中空纤维膜超滤，滤液冷冻结晶浓缩，加入微晶纤维素0 .化g，喷雾干 燥，分装，包装。
[0025] 实施例4 片剂的制备:称取实施例1的葵花盘提取物100kg，加入淀粉25kg、微晶纤维素10kg和麦 芽糊精化g，混合均匀，用40%乙醇溶液制软材，过25目筛制粒，干燥，过20目筛整粒，加入适 量硬脂酸儀，混合均匀，压片，即得。
[00%] 实施例5 胶囊剂的制备:称取实施例2的葵花盘提取物150kg，加入微晶纤维素30kg和乳糖12kg， 混合均匀，用2.0%径丙甲基纤维素溶液制软材，过40目筛制粒，干燥，过30目筛整粒，加入适 量胶体二氧化娃，混合均匀，填充至胶囊壳内，即得。
[0027] 实施例6 薄膜包衣片的制备:称取实施例1的葵花盘提取物100kg，加入淀粉25kg、微晶纤维素 12kg和簇甲基淀粉钢8kg，混合均匀，用30%乙醇溶液制软材，过20目筛制粒，干燥，过20目筛 整粒，加入适量硬脂酸儀，混合均匀，压片，即得片忍;将径丙基甲基纤维素2.5kg溶解于适 量乙醇溶液中，并对片忍喷雾包衣，干燥，即得薄膜包衣片。
[002引试验例1:药理性实验 一、试验材料 1.动物:昆明种小鼠，体重(20g ± 2g)，由吉林大学临床动物研究中屯、提供。
[0029] 2.给药样品：空白对照组(蒸馈水），本发明组(实施例1、2、3制备得到的葵花盘提 取物）。
[0030] 二、试验方法 1. 镇痛实验:取雄性小鼠40只，随机分为空白对照组，本发明组(实施例1、实施例2、实 施例）。按lOOmg kg-i给药，1次一天，空白对照组给予等量蒸馈水。连续给药5天，于末次给药 1小时后，每组各取10只小鼠腹腔注射0.7%醋酸0.1ml · ，记录各组小鼠20min内扭体次 数。结果见表1。
[0031] 表1.对醋酸所致小鼠扭体反应的影响
与空白对照组比较，冲<0.05，*冲<0.01 2. 小鼠足肿胀实验:取雄性小鼠40只，随机分为空白对照组，本发明组(实施例1、实施 例2、实施例）。按lOOmg kg-1给药，1次一天，空白对照组给予等量蒸馈水。连续给药5天，于 末次给药1小时后，每鼠左后趾皮下注射5%MSU0.08ml，化后颈椎脱白处死小鼠，沿裸关节上 0.5cm处剪下左右后足，称重，W左右后足质量之差作为炎症肿胀度。结果见表2。
[0032] 表2对MSU所致小鼠足肿胀的影响
3.小鼠血尿酸(UA)、黄嚷岭氧化酶(X0D)及尿素氮(BUN):取雄性小鼠100只，随机分为 正常组、模型组、本发明组(实施例1、实施例2、实施例3)，每组20只。除正常组外，每组均W 酵母30g · kg-1灌胃，连续一周。从第3天开始本发明组灌胃，按lOOmg · kg-1给药，连续给药 5d。小鼠摘除眼球法取血，分离血清，在波长690皿、530皿和640皿处测定UA、X0D和BUN值。结 果见表3。
[0033] 表3.对酵母膏致高尿酸血症小鼠血清UA、X0D及脚N的影响
与正常组比较冲<0.05，*冲<0.01;与模型组比较冲<0.05，*冲<0.01 n=20 Ξ、试验结果 痛风是体内嚷岭代谢障碍、尿酸过多或者肾脏排泄尿酸减少，导致尿酸盐在组织沉积 所致疾病。尿酸钢晶体会引起足部，关节，软组织炎症和疼痛。由表1-3的试验结果可W看 出，本发明的葵花盘提取物能明显减轻化学物质产生的疼痛和肿疼，表明具有镇痛消肿作 用。另外，本发明的葵花盘提取物还能显著抑制黄嚷岭氧化酶活性，减少尿酸的生成，明显 降低血中尿素氮，改善肾功能。
【主权项】
1. 一种葵花盘提取物，其特征在于包含总黄酮、小分子肽和生物碱。2. 如权利要求1所述的葵花盘提取物，其特征在于包含总黄酮10-20%，小分子肽1-3%， 生物碱10-30%;优选地，葵花盘提取物包含总黄酮16-20%，小分子肽2.4-3%，生物碱18-30%。3. 如权利要求1或2所述的葵花盘提取物，其特征在于由包括以下步骤的方法制备得 到:称取新鲜或冷冻去籽的葵花盘，粉碎成80-150目细粉，加5-10质量倍的15-30%乙醇溶 液，置于闪式提取器中进行破碎提取，提取时间为100-300S，提取电压为100-200V，然后利 用悬浮结晶法低温冷冻浓缩，浓缩液中加入〇. 003-0.005质量倍的复合蛋白酶酶解3-5h，并 用中空纤维膜超滤，滤液冷冻结晶浓缩，加入适量赋形剂，喷雾干燥即得。4. 如权利要求3所述的葵花盘提取物，其特征在于用于提取葵花盘细粉的乙醇溶液浓 度为18-20 %，低温冷冻温度为一 28 °C --40 °C。5. 如权利要求3所述的葵花盘提取物，其特征在于所述的复合蛋白酶为胃蛋白酶和胰 蛋白酶按质量比为1:(1.5-3.0)混合的混合物;所述赋形剂选自例如葡萄糖、半乳糖和/或 微晶纤维素。6. -种药物组合物，其特征在于包含如权利要求1-5之一所述的葵花盘提取物和任选 的药学上可接受的载体。7. 如权利要求6所述的药物组合物，其特征在于为片剂、胶囊剂、滴丸剂、颗粒剂、散剂、 微丸、溶液剂、糖浆剂、乳剂或注射剂。8. 如权利要求1-5之一所述的葵花盘提取物的制备方法，其特征在于包括以下步骤:称 取新鲜或冷冻去籽的葵花盘，粉碎成80-150目细粉，加5-10质量倍的15-30%乙醇溶液，置于 闪式提取器中进行破碎提取，提取时间为100-300s，提取电压为100-200V，然后利用悬浮结 晶法低温冷冻浓缩，浓缩液中加入0.003-0.005质量倍的复合蛋白酶酶解3-5h，并用中空纤 维膜超滤，滤液冷冻结晶浓缩，加入适量赋形剂，喷雾干燥即得。9. 如权利要求8所述的葵花盘提取物的制备方法，其特征在于乙醇溶液浓度为18-20%，低温冷冻温度为一 28°C_ - 40°C;复合蛋白酶为胃蛋白酶和胰蛋白酶按质量比为1: (1.5-3.0)混合的混合物;所述赋形剂选自例如葡萄糖、半乳糖和/或微晶纤维素。10. 如权利要求1-5之一所述的葵花盘提取物或如权利要求6或7所述的药物组合物在 制备预防和治疗痛风的药物中的用途。
【文档编号】A61P19/06GK105878322SQ201610294538
【公开日】2016年8月24日
【申请日】2016年5月6日
【发明人】不公告发明人
【申请人】洮南市金塔生物科技有限公司