TLA-4的结合"。在某些示例性的实施方式中，本发明的抗体或抗原结合 片段的酸性 / 中性Kd 比率可以是大约 3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、 8·5、9·0、9·5、10·0、10·5、11·0、11·5、12·0、12·5、13·0、13·5、14·0、14·5、15·0、20·0、25·0、 30·0、40·0、50·0、60·0、70·0、100·0 或更大。
[0055] 可以获得具有pH-依赖性的结合特性的抗体，例如通过筛查抗体群的与在中性pH 时相比，在酸性pH时减小的（或增强的）与特定抗原的结合。此外，在氨基酸的水平上对结合 抗原的结构域的修饰可以产生具有pH-依赖性特性的抗体。例如，通过把结合抗原的结构域 (例如在CDR内）的一个或更多个氨基酸替换为组氨酸，可以获得相对于在中性pH时，在酸性 pH时具有减小的结合抗原的抗体。正如本文中所用的那样，表达"酸性pH"是指6.0或更小的 pH〇
[0056] 在本发明的组合物和方法的上下文中所用的抗体可以包括包含一个或更多个突 变的Fc结构域，所述突变增强或减小抗体与FcRn受体的结合，例如在酸性pH时，与在中性pH 时相比增强或减小抗体与FcRn受体的结合。例如，本发明包括在所述Fc结构域的Ch2或Ch3区 包含突变的抗体(例如抗-VEGF，抗-VEGF受体，抗-CTLA-4等），其中所述的突变在酸性环境 中（例如在内体中，那里的pH范围为大约5.5至大约6.0)增大所述Fc结构域与FcRn的亲和 力。当向动物施用时，这样的突变可以导致所述抗体的血清半寿期增大。这样的Fc修饰的非 限定性的例子包括，例如在位置250(例如E或Q);250和428(例如L或F);252(例如L/Y/F/W或 T)、254(例如S或T)和256(例如S/R/Q/E/D或T)的修饰;或在位置428和/或433(例如H/L/R/ S/P/Q或Κ)和/或434(例如H/F或Υ)的修饰;或在位置250和/或428的修饰;或在位置307或 308(例如308F、V308F)和434的修饰。在一种实施方式中，所述的修饰包括428L(例如M428L) 和 434S(例如 N434S)修饰；428L、259I(例如 V259I)和 308F(例如 V308F)修饰；433K(例如 H433K)和 434(例如 434Y)修饰；252、254和 256(例如 252Y、254T 和 256E)修饰；250Q 和428L 修 饰（例如T250Q和M428L);以及307和/或308修饰（例如308F或308Ρ)。
[0057]例如，本发明包括包含抗体(例如抗-VEGF，抗-VEGF受体，抗-CTLA-4等）的方法和 组合物，所述抗体包含Fc结构域，该Fc结构域含有一对或更多对或组的选自由下列组成的 组的突变：250Q和248L(例如T250Q和M248L) ;252Y、254T和256E(例如M252Y、S254T和 T256E); 428L和434S(例如M428L和N434S);以及433K和434F(例如H433K和N434F)。在本发明 的保护范围内考虑了本文公开的前述Fc结构域突变和所述抗体的可变结构域中的其它突 变的所有可能的组合。
[0058]本发明人已经证明：在小鼠模型系统中，与VEGF拮抗剂（例如VEGF Trap)和抗-CTLA-4IgG2b抗体的组合相比，VEGF拮抗剂(例如VEGF Trap)和抗-CTLA-4IgG2a抗体的组合 提供优越的抗-肿瘤效果(参见，例如本文下面的实施例4)。提供ADCC和CDC效应子活性的小 鼠 IgG2a的人抗体等同物是IgGl。因此，本发明包括包含VEGF拮抗剂和抗-CTLA-4抗体的组 合物和方法，其中所述抗-CTLA-4抗体具有提供ADCC和⑶C效应子活性的Fc同种型，例如 IgGl〇
[0059] 包含VEGF拮抗剂和抗-CTLA-4抗体的药物组合物
[0060] 本发明包括包含VEGF拮抗剂和抗-CTLA-4抗体的药物组合物。根据本发明的这个 方面的药物组合物可以进一步包含药学上可接受的载体或稀释剂。用于联合配制生物学治 疗剂的方法是本领域中已知的并且可以被本领域普通技术人员使用来制造本发明的药物 组合物。
[0061] 正如本文中所用的那样，表述〃药学上可接受的载体或稀释剂〃包括合适的载体、 赋形剂和提供合适的转移、递送、耐药性等等的其它药剂。可用于本发明的上下文中的示例 性的制齐 1J能够在Remington's Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Company, Easton，PA中找到。可以接受的制剂包括，例如粉剂、糊剂、软膏、凝胶剂、蜡状物、油状物、月旨 质、含有脂质（阳离子的或阴离子的）的小泡(例如LIPOFECTIN?)、DNA缀合物、无水的吸收糊 剂、水包油和油包水乳剂、乳剂碳蜡(各种分子量的聚乙二醇）、半固体凝胶和含有碳蜡的半 固体混合物。也参见Powell等人〃Compendium of excipients for parenteral formulations"PDA(1998)J Pharm Sci Technol 52:238-311.
[0062] 治疗方法和施用方法
[0063] 本发明包括用于抑制或减轻受试者中肿瘤生长的方法。根据本发明的这个方面的 方法包括给所述受试者施用治疗有效量的VEGF拮抗剂和治疗有效量的抗-CTLA-4抗体。可 以通过测量在施用本发明的治疗组合(例如施用VEGF拮抗剂和抗-CTLA-4抗体)前后受试者 中肿瘤的尺寸来评估对肿瘤生长的抑制和/或减弱。与在施用本发明的治疗组合之前相比， 在施用本发明的治疗组合后，肿瘤尺寸的减小或肿瘤生长速度的减小指示在受试者中肿瘤 生长的抑制或减弱。在某些实施方式中，本发明的方法导致肿瘤消退。根据本发明的某些实 施方式，肿瘤生长的减弱意味着在施用本发明的治疗组合后肿瘤的生长速度比在施用本发 明的治疗组合之前肿瘤的生长速度至少小大约5 %、10 %、15 %、20 %、25 %、30 %、35 %、 40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95% 或 100%。正如本文中 所用的那样，〃肿瘤生长的减弱〃也包括肿瘤体积的减小(例如肿瘤消退）。
[0064] 本发明也包括用于增加或延长遭受肿瘤折磨的受试者存活的方法。根据本发明的 这个方面的方法包括给所述受试者施用治疗有效量的VEGF拮抗剂和治疗有效量的抗_ CTLA-4抗体。增长或延长患有肿瘤的受试者的存活意味着:与不接受任何治疗或一般性地 接受被谈论的肿瘤的护理标准的情况相似的携带肿瘤的受试者相比，在施用本发明的治疗 组合(例如施用VEGF拮抗剂和抗-CTLA-4抗体)后，受试者具有更长的存活时间。改善的存活 时间意味着与不接受任何治疗或一般性地接受被谈论的肿瘤的护理标准的情况相似的携 带肿瘤的受试者相比，大约1个星期、2个星期、4个星期、2个月、4个月、6个月、8个月、10个 月、12个月、14个月、16个月、18个月、20个月、22个月、24个月、26个月、28个月、30个月、36个 月、40个月或更长的存活。
[0065] 本发明也包括用于在受试者中诱导肿瘤免疫的方法。根据本发明的这个方面的方 法包括给所述受试者施用治疗有效量的VEGF拮抗剂和治疗有效量的抗-CTLA-4抗体。根据 本发明的这个方面的某些实施方式，在用VEGF拮抗剂和抗-CTLA-4抗体治疗所述受试者之 前，所述受试者可能遭受肿瘤折磨，并且在这样的治疗之后，所述受试者变成对未来的肿瘤 免疫或抗性的。正如本文中所用的那样，诱导肿瘤免疫意味着在接受本发明的治疗组合后， 受试者对未来的肿瘤有抗性或实质上有抗性。肿瘤免疫也意味着以前遭受肿瘤折磨并且被 成功地治疗(例如通过施用本发明的治疗组合）的受试者在未来将不会经历相同或相似类 型肿瘤的发展。
[0066] 根据某些实施方式，本发明的方法可以包括以分开的剂型向所述受试者施用所述 的VEGF拮抗剂和抗-CTLA-4抗体。例如，可以以分开的注射、灌输或本领域已知的其它药物 递送手段向所述受试者递送所述的VEGF拮抗剂和抗-CTLA-4抗体。当分开施用时，可以同时 地或顺序地给所述受试者施用分开的剂型（即一个包含VEGF拮抗剂，而另一个包含抗-CTLA-4抗体）。如果同时地施用，在小于大约1分钟的时间跨度内向所述受试者施用两种药 剂。如果顺序地施用，在第一个时间点施用一种药剂，并且在第二个较晚的时间点施用另一 种药剂。第二个时间点可以是在第一个时间点之后1分钟、2分钟、5分钟、10分钟、20分钟、30 分钟、1小时或更长。在某些实施方式中，首先施用VEGF拮抗剂，之后施用抗-CTLA-4抗体。在 其它实施方式中，首先施用抗-CTLA-4抗体，之后施用VEGF拮抗剂。
[0067]根据本发明的方法，可以以分开的剂型以相同的施用频度(例如一星期一次、每两 个星期一次、每四个星期一次、每八个星期一次、每十个星期一次、每十二个星期一次等）向 受试者施用VEGF拮抗剂和抗-CTLA-4抗体。备选地，可以以分开的剂型以不同的施用频度向 受试者施用这两种药剂。例如，可以以比抗-CTLA-4抗体更高的频度向受试者施用VEGF拮抗 剂;或者可以以比VEGF拮抗剂更高的频度向受试者施用抗-CTLA-4抗体。
[0068]根据某些实施方式，本发明的方法可以包括以单一剂型向受试者施用VEGF拮抗剂 和抗-CTLA-4抗体。正如本文中所用的那样，〃单一剂型〃是指包含VEGF拮抗剂和抗-CTLA-4 抗体两者的组合物。在某些实施方式中，所述的单一剂型可包含一种或更多种药学上可接 受的载体或稀释剂，正如本文别处所公开的那样。用于把两种或更多种生物学治疗剂联合 配制成单一剂型的方法是本领域中已知的，并且视情况而定，可以被用在本发明的这个方 面的上下文中。
[0069] 本发明的方法和组合物可用于治疗产生于大脑和脑膜、口咽、肺和支气管树、胃肠 道、男女生殖道、肌肉、骨头、皮肤和附件、结缔组织、脾、免疫系统、造血细胞和骨髓、肝脏和 尿道以及特殊的感觉器官例如眼睛中的原发性和/或转移性肿瘤。根据本发明的方法和组 合物，能够治疗的具体的癌症包括，例如肾细胞癌、胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌、肝细胞癌、结 肠直肠癌、恶性间皮瘤、多发性骨髓瘤、卵巢癌、成胶质细胞瘤和黑素瘤。
[0070] 在某些实施方式中，本发明的方法和组合物可用于治疗受试者中抗-VEGF-抗性的 肿瘤。〃抗-VEGF-抗性的肿瘤〃，正如本文中所用的那样，是指对采用抗-VEGF药剂例如抗-VEGF抗体、抗-VEGF受体抗体或任何其它VEGF-特异性的结合蛋白（包括例如VEGF-trap，正 如本文中所定义的那样)的治疗不应答或仅仅部分应答的肿瘤。例如，抗-VEGF-抗性的肿瘤 可以是例如当其与一定量的平常能够抑制或减弱至少一种肿瘤的生长的VEGF拮抗剂接触 时，继续在体外或在体内（例如在细胞培养物中或当被植入动物中时）生长的肿瘤。抗_ VEGF-抗性的肿瘤可以是衍生自最初只对抗-VEGF治疗应答的肿瘤细胞，但是通过选择、突 变或适应已经获得对一种或更多种抗-VEGF药剂的抗性的肿瘤。
[0071 ]使用本发明的方法和组合物能够治疗的受试者包括被诊断患有癌症或被鉴定患 有肿瘤的任何受试者。在某些实施方式中，所述受试者是已经被诊断或鉴定患有至少部分 地对抗-VEGF治疗有抗性的肿瘤的患者。用于诊断患者患有抗-VEGF抗性的肿瘤的方法对于 本领域普通技术人员将会是已知的并且能够使用常规诊断方法实施。
[0072]另外的治疗剂
[0073]本发明包括包含与一种或更多种另外的治疗活性组分联合的VEGF拮抗剂和抗-CTLA-4抗体的组合物和治疗制剂以及治疗方法，所述方法包括向需要的受试者施用这样的 组合。
[0074]可以与本发明的上下文中的VEGF拮抗剂和抗-CTLA-4抗体联合和/或联合施用的 另外的治疗活性组分包括，例如下列中的一种或更多种:EGFR拮抗剂(例如抗-EGFR抗体[例 如西妥昔单抗或帕尼单抗]或EGFR的小分子抑制剂[例如吉非替尼或埃罗替尼])、另一 EGFR 家族成员例如Her2/ErbB2、ErbB3或ErbB4的拮抗剂（例如抗-ErbB2 [例如曲妥单抗或T-DM1 {KADCYLA?}]、抗-ErbB3或抗-ErbB4抗体或ErbB2、ErbB3或ErbB4活性的小分子抑制 剂）、EGFRvIII的拮抗剂(例如特异性地结合EGFRvIII的抗体）、cMET激动剂(例如抗-cMET抗 体）、IGF1R拮抗剂(例如抗-IGF1R抗体）、B-raf抑制剂(例如维罗菲尼、索拉非尼、⑶C-0879、 PLX-4720)、PDGFR-α抑制剂（例如抗-PDGFR-α抗体）、TOGFR-β抑制剂（例如抗-PDGFR-β抗体 或小分子激酶抑制剂例如，伊马替尼甲磺酸盐或舒尼替尼苹果酸盐）、PDGF配体抑制剂(例 如抗-PDGF-A，-B，-C，或-D抗体、适体、siRNA等）、VEGF受体的小分子激酶抑制剂(例如舒尼 替尼、索拉非尼或帕唑帕尼））、DLL4拮抗剂(例如在US2009/0142354中公开的抗-DLL4抗体 例如REGN421)、Ang2拮抗剂（例如在US2011/0027286中公开的抗-Ang2抗体例如H1H685P)、 F0LH1拮抗剂（例如抗-F0LH1抗体）、STEAP1或STEAP2拮抗剂（例如抗-STEAP1抗体或抗-STEAP2抗体）、TMPRSS2拮抗剂(例如抗-TMPRSS2抗体）、MSLN诘抗剂(例如抗-MSLN抗体）、CA9 诘抗剂（例如抗-CA9抗体）、uroplakin诘抗剂（例如抗-uroplakin[例如抗-UPK3A]抗体）、 MUC16拮抗剂(例如抗-MUC16抗体）、Τη抗原拮抗剂