检测从所述容器发射的荧光水准，其中所述荧光水准通过电荷耦合装置来加以检测。 [0061 ] "刑事侦查"是指可能导致提出刑事起诉的任何行为。
[0062] 在一些实施例中，公开一种以下方法，所述方法涵盖:使固体载体与生物样本接 触，将所述固体载体存放到容器中，在所述容器内进行rtPCR，以及在rtPCR进行时检测从所 述容器发射的荧光水准，其中所述荧光水准通过电荷耦合装置来加以检测。
[0063] "生物样本"是指由如真核生物、原核生物或病毒的生物体制成的集合。
[0064] 在一些实施例中，公开一种以下方法，所述方法涵盖:使固体载体与试样接触，将 所述固体载体存放到容器中，在所述容器内进行多重rtPCR，以及在rtPCR进行时检测从所 述容器发射的荧光水准，其中所述荧光水准通过电荷耦合装置来加以检测。
[0065] "试样"是指全血、血浆、血清、唾液、汗液、阴道分泌物、精液、组织、尿液、脑脊髓液 以及触碰核酸。"触碰核酸"或"转移核酸"是指在由生物体接触之后可能留在表面上的核 酸。举例来说，指纹可以含有核酸并且表示触碰核酸。
[0066] 在一些实施例中，公开一种以下方法，所述方法涵盖:使固体载体与试样接触，将 所述固体载体存放到容器中，在所述容器内进行rtPCR，以及在rtPCR进行时检测从所述容 器发射的荧光水准，其中所述荧光水准通过电荷耦合装置来加以检测，其中所述试样是全 血。
[0067] 在一些实施例中，公开一种以下方法，所述方法涵盖:使固体载体与试样接触，将 所述固体载体存放到容器中，在所述容器内进行rtPCR，以及检测从所述容器发射的荧光水 准，其中所述荧光水准通过电荷耦合装置来加以检测，其中所述试样是尿液。
[0068] 在一些实施例中，公开一种以下方法，所述方法涵盖:使固体载体与试样接触，将 所述固体载体存放到容器中，在所述容器内进行rtPCR，以及在rtPCR进行时检测从所述容 器发射的荧光水准，其中所述荧光水准通过电荷耦合装置来加以检测，并且其中所述试样 不是尿液。
[0069] 在一些实施例中，公开一种以下方法，所述方法涵盖:使固体载体与试样接触，将 所述固体载体存放到容器中，在所述容器内进行rtPCR，以及检测从所述容器发射的荧光水 准，其中所述荧光水准通过电荷耦合装置来加以检测，其中所述试样是触碰DNA。在一些实 施例中，所述触碰DNA是指纹。
[0070] 在一些实施例中，公开一种以下方法，所述方法涵盖:使固体载体与试样接触，将 所述固体载体存放到容器中，在所述容器内进行多重rtPCR，以及在rtPCR进行时检测从所 述容器发射的荧光水准，其中所述荧光水准通过电荷耦合装置来加以检测。
[0071] 在一些实施例中，公开一种以下方法，所述方法涵盖:使固体载体与试样接触，将 所述固体载体存放到容器中，在所述容器内进行多重rtPCR，以及在rtPCR进行时检测从所 述容器发射的荧光水准，其中所述荧光水准通过电荷耦合装置来加以检测，其中所述试样 是全血。
[0072] 在一些实施例中，公开一种以下方法，所述方法涵盖:使固体载体与试样接触，将 所述固体载体存放到容器中，在所述容器内进行多重rtPCR，以及在rtPCR进行时检测从所 述容器发射的荧光水准，其中所述荧光水准通过电荷耦合装置来加以检测，其中所述试样 是尿液。
[0073] 在一些实施例中，公开一种以下方法，所述方法涵盖:使固体载体与试样接触，将 所述固体载体存放到容器中，在所述容器内进行多重rtPCR，以及在rtPCR进行时检测从所 述容器发射的荧光水准，其中所述荧光水准通过电荷耦合装置来加以检测，其中所述试样 是触碰DNA。在一些实施例中，所述触碰DNA是指纹。
[0074] 在一些实施例中，公开一种以下方法，所述方法涵盖:使固体载体与表面接触，将 所述固体载体存放到容器中，将至少一个引物对存放到所述容器中，在所述容器内进行 rtPCR，以及在rtPCR进行时检测从所述容器发射的荧光水准，其中由至少一个引物对产生 的扩增子是真核核酸的复制，并且其中所述荧光水准通过电荷耦合装置来加以检测。
[0075] 在一些实施例中，公开一种以下方法，所述方法涵盖:使固体载体与表面接触，将 所述固体载体存放到容器中，将至少一个引物对存放到所述容器中，在所述容器内进行 rtPCR，以及在rtPCR进行时检测从所述容器发射的荧光水准，其中由所述至少一个引物对 产生的扩增子是原核核酸的复制，并且其中所述荧光水准通过电荷耦合装置来加以检测。
[0076] 在一些实施例中，公开一种以下方法，所述方法涵盖:使固体载体与表面接触，将 所述固体载体存放到容器中，将至少一个引物对存放到所述容器中，在所述容器内进行 rtPCR，以及在rtPCR进行时检测从所述容器发射的荧光水准，其中由所述至少一个引物对 产生的扩增子是病毒核酸的复制，其中所述荧光水准通过电荷耦合装置来加以检测，并且 其中所述病毒核酸不是巨细胞病毒。
[0077] 在一些实施例中，公开一种以下方法，所述方法涵盖:使固体载体与表面接触，将 所述固体载体存放到容器中，将至少一个引物对存放到所述容器中，在所述容器内进行多 重rtPCR，以及在rtPCR进行时检测从所述容器发射的荧光水准，其中由至少一个引物对产 生的扩增子是真核核酸的复制，并且其中所述荧光水准通过电荷耦合装置来加以检测。
[0078] 在一些实施例中，公开一种以下方法，所述方法涵盖:使固体载体与表面接触，将 所述固体载体存放到容器中，将至少一个引物对存放到所述容器中，在所述容器内进行多 重rtPCR，以及在rtPCR进行时检测从所述容器发射的荧光水准，其中由所述至少一个引物 对产生的扩增子是原核核酸的复制，并且其中所述荧光水准通过电荷耦合装置来加以检 测 。
[0079] 在一些实施例中，公开一种以下方法，所述方法涵盖:使固体载体与表面接触，将 所述固体载体存放到容器中，将至少一个引物对存放到所述容器中，在所述容器内进行多 重rtPCR，以及在rtPCR进行时检测从所述容器发射的荧光水准，其中由所述至少一个引物 对产生的扩增子是病毒核酸的复制，其中所述荧光水准通过电荷耦合装置来加以检测，并 且其中所述病毒核酸。
[0080] "引物"是指可以粘接到互补核酸链并且可以例如通过聚合酶来延伸的经分离寡 核苷酸。引物对是指粘接到DNA目标相对链上的两个引物。
[0081] 在目标的起始量与所产生扩增子的量之间很大程度上存在定量关系。rtPCR检测 扩增子在扩增反应期间的积聚。在rtPCR分析中采用多种方式来检测PCR产物。这些方法包 括非特异性双链嵌入染料(如SYBRTC绿)和基于探针的技术，所述基于探针的技术具有不 与混杂分子(如引物二聚物)结合的优点。
[0082] "探针"是指可以附着有可检测标记或报告分子的经分离寡核苷酸。
[0083] rtPCR分析中所采用的基于探针的技术的实例包括5'-核酸外切酶、分子信标、杂 交探针以及Scorp i on探针。
[0084] 5'-核酸外切酶(TaqMan?)探针是含有优选地位于5'端和3'端的荧光团和淬灭剂 部分的寡核苷酸。由于高效分子内淬灭，完整探针极少发射荧光。然而，在PCR扩增期间，探 针与其目标序列特异性地杂交，并且Taq聚合酶的5'_3'_核酸外切酶活性使探针在荧光团 与淬灭剂部分之间裂解。TaqMan?探针的酶促裂解使荧光团和淬灭剂组分在空间上分离，造 成与目标扩增相关的荧光发射显著增加。
[0085] "荧光团"是指固有地发荧光、或在与生物化合物或金属离子结合后或在由酶代谢 时展现荧光变化的部分。已知许多荧光团，其实例包括香豆素 （c 〇 u m a r i η )、吖啶 (acridine)、咲喃、丹磺酰(dansyl)、花青(cyanine)、萘、苯并咲喃、喹啉、喹唑啉酮、Π 引噪、 苯并挫（benzazole)、硼聚氮杂吲?达生（borapolyazaindacene)、噁嗪（oxazine)和咕吨 (xanthene)、其中后者包括焚光素、罗丹明（rhodamine)、罗萨明（rosamine)以及对甲氨基 UKrhodol)。
[0086] "淬灭剂"是指可以至少部分地减弱由荧光团发射的光的任何荧光调节部分。这种 减毒被称为"淬灭"。荧光团在淬灭基团存在下的激发产生比预期的强度低或甚至完全不存 在的发射信号淬灭典型地经由在受激发荧光团与淬灭基团之间的能量转移来进行。
[0087] 分子信标是在分离时为非荧光，但在与目标序列杂交时变为荧光的单链寡核苷酸 探针。非杂化分子信标形成茎-环结构，其具有与分子的一个末端共价连接的荧光团和与另 一个末端连接的淬灭剂，使得信标的发夹将荧光团部分放在与淬灭剂极为接近处。当分子 信标与目标序列杂交时，荧光团和淬灭剂部分变为在空间上分离的，使得所述荧光团不再 被淬灭并且所述分子信标发荧光。分子信标的二级结构向杂交探针赋予高特异性。
[0088] 杂交探针是单独标记有荧光团部分的寡核苷酸。每一个杂交探针分析需要两个这 类寡核苷酸，一个标记有供体荧光团并且另一个标记有受体荧光团。通常采用荧光素作为 供体，并且通常使用Cy5?、LCRed?640以及LCRed?705作为受体。供体荧光团的激发产生 与受体荧光团吸收光谱重叠的发射光谱。杂交探针对被设计成用于识别目标分子内的相邻 核苷酸序列。在分离时，受体寡核苷酸未激发，并且不产生荧光信号。然而，在与多核苷酸目 标序列杂交期间，使供体和受体探针极为接近，允许从供体到受体的荧光共振能量传递。来 自受体焚光团的焚光信号仅在两个探针都与目标分子杂交时发射。当并入PCR反应中时，每 个扩增循环监测一次来自受体探针的荧光，以促进对产物积聚的实时测量，其中由受体发 射的荧光量与所合成的目标量成比例。
[0089] 5'-核酸外切酶、分子信标和杂交探针分析是探针和目标序列位于单独DNA链上的 双分子系统。Scorpion探针贯穿单分子结合事件操作，其中探针和经扩增目标序列位于相 同DNA链上。单分子结合事