7-氨基-4-甲基香豆素-β-D-吡喃葡萄糖苷、其制备方法及其用图
【专利摘要】本发明涉及药物领域，具体涉及7?氨基?4?甲基香豆素?β?D?吡喃葡萄糖苷(I)，本发明公开了其制备方法：7?氨基?4?甲基香豆素与葡萄糖在含KH2PO4和MgSO4的水溶液中反应生成。本发明还公开了其抗肿瘤方面的用途。
【专利说明】
7-氨基-4-甲基香豆素 -fH)-吡喃葡萄糖苷、其制备方法及其 用途
技术领域
[0001 ]本发明涉及药物领域，具体涉及7-氨基-4-甲基香豆素-0-D-吡喃葡萄糖苷及其制 备方法，本发明还公开了其抗肿瘤方面的用途。
【背景技术】
[0002] 肿瘤为一类严重威胁人类生命健康的疾病，我国肿瘤发病人数和死亡人数均呈逐 年上升趋势。目前，肿瘤的治疗方法中，化疗占有重要的地位且发展最快，但大多数化疗药 物会产生严重的毒副作用，如肝脏、肾脏毒性等，给患者带来了严重痛苦，影响了治疗效果。 因此寻找新的高效、低毒的抗肿瘤药物受到越来越多的关注。随着对中药的不断地开发和 认识以及多年的临床和实验证实，很多中药具有良好的抗肿瘤作用，毒副作用小而且资源 丰富，因此中药单体的开发和结构改造以及对其药理作用机制的研究已经成为当今世界上 新药开发的热点。香豆素类化合物广泛分布于各种植物中，具有广泛的生物活性，研究显示 香豆素糖苷在抗肿瘤方面有显著的活性。但大部分研究都集中于香豆素〇-糖苷，而有关香 豆素 N-糖苷的抗肿瘤活性少见报道。
[0003] N-糖苷是糖类化合物的一个重要部分。许多来自于微生物的天然N-糖苷，如来自 链霉菌的十字孢碱，放线菌的蝴蝶霉素以及安丝菌素糖苷都具有卓越的抗肿瘤活性。与苷 元相比，糖苷的水溶性更好，同时保持或提高了活性。与〇-糖苷相比，N-糖苷与其结构类似， 活性相同，而且更稳定，不在酸性条件下水解也不受糖苷酶酶解。因此，化学合成N-糖苷是 目前药物研究的热点之一。到目前为止，化学合成N-糖苷主要包括叠氮还原法、由糖基供体 制备等多种方法。而这些方法一般需要多步的保护和去保护步骤，反应过程繁琐，结构立体 选择性差，而且反应条件苛刻，甚至使用剧毒且危险试剂。因此，寻找一种高效、环保、安全 的合成方法意义重大。
[0004] 本发明的目的是提供一种高效环保的香豆素 N-糖苷的合成方法，以及提供一种具 有良好抗肿瘤活性的潜在药物。
【发明内容】
[0005] 本发明公开了结构式I的化合物：
[0007]命名为7-氨基-4-甲基香豆素 -0-D-吡喃葡萄糖苷。本发明同时也包括结构式I的 化合物的溶剂化物。
[0008] 表1 7-氨基-4-甲基香豆素-0-D-吡喃葡萄糖苷13C-NMR和1H-NMR数据如下：
[0010] 药理试验证明，本发明的式I化合物具有明显的抗肿瘤活性，其溶剂化物具有同样 的药理功效。
[0011] 本发明的式I化合物优选用化学合成方法以7-氨基-4-甲基香豆素为原料进行转 化制备，方法如下：
[0013] 上述7-氨基-4-甲基香豆素-0-D-吡喃葡萄糖苷的制备方法，是将7-氨基-4-甲基 香豆素溶于含KH 2P04和MgS04的缓冲溶液中，加入等摩尔比的葡萄糖反应，再经分离纯化得 到成品。
[0014] 上述7-氨基-4-甲基香豆素-0-D-吡喃葡萄糖苷的制备方法中，缓冲溶液的配制方 法如下:准确称取KH2PO4 3.0g、MgS〇4 0.75g，加蒸馏水定容至1.0L。
[0015] 上述7-氨基-4-甲基香豆素-0-D-吡喃葡萄糖苷的制备方法中，将摩尔比为1:1的 7-氨基-4-甲基香豆素和葡萄糖加入到缓冲溶液中反应，反应中7-氨基-4-甲基香豆素的重 量(mg)和溶剂的体积(mL)的比为1:6-1:20;室温搅拌溶解，溶解澄清后，25 °C搅拌，搅拌速 率为80r/min，反应72-120小时后，终止反应。将反应液冷冻干燥，得到的固体粉末经硅胶拌 样后柱层析分离，以氯仿-甲醇为洗脱系统，即可得产物7-氨基-4-甲基香豆素-0-D-吡喃葡 萄糖苷。
[0016] 前述的7-氨基-4-甲基香豆素-0-D-吡喃葡萄糖苷的制备方法中，作为进一步的改 进，缓冲溶液的pH调至6 ? 0-6 ? 5。
[0017] 前述的7-氨基-4-甲基香豆素 P-D-吡喃葡萄糖苷的制备方法中，作为进一步的改 进，反应体系的温度优选为30-45 °C。
[0018] 前述的7-氨基-4-甲基香豆素 -0-D-吡喃葡萄糖苷的制备方法中，作为进一步的改 进，反应时间优选为120-168小时。
[0019]药理试验证明，本发明的结构式I化合物具有显著的抗肿瘤活性，以下是试验方法 及结果：
[0020] 7-氨基-4-甲基香豆素-0-D-吡喃葡萄糖苷抗肿瘤活性研究
[0021] 1、MTT法检测7-氨基-4-甲基香豆素 -0-D-吡喃葡萄糖苷对多种肿瘤细胞株的抑制 作用
[0022] 本实验所测试的肿瘤细胞株有人胃癌SGC-7901、人肺癌A549、人乳腺癌MDA-MB-435s、人前列腺癌PC-3，以含10 %胎牛血清的DMEM培养基在37°C，5%C02条件下培养。取对 数期肿瘤细胞，以0.1%的胰酶消化后用RPMI 1640培养基(含10%新生牛血清)制成单细胞 悬液，以2X103个细胞/孔的密度接种于96孔培养板（180yL/孔），37°C、5%C0 2培养过夜，每 孔加入5个不同浓度的7-氨基-4-甲基香豆素-0-D-吡喃葡萄糖苷，使其终浓度分别为0.01、 0.10、1.00、10.00及100.OOwno 1 /L。同时，实验中另设计阴性对照组(等体积不加药物且含 有1%〇DMSO的培养基)和阳性对照组(5-FU即5-氟脲嘧啶的终浓度分别为分别为0.01、0.10、 1.00、10.00及 100.0 Ownol/L)。37°(：、5 %C02培养72h后采用MTT法检测7-氨基-4-甲基香豆 素-0-D-吡喃葡萄糖苷对细胞的生长抑制率。具体操作如下:培养板于1000r/min离心5min， 换无血清的培养液，加入MTT母液（5mg/mL) 20此/孔，在培养箱中孵育3h后小心吸除MTT溶 液，加入DMS0 150yL/孔，振荡器震荡10min使结晶溶解，于570nm，650nm处测定吸光值，进行 双波长检测。采用GraphPad Prism 5.〇1软件，计算7-氨基-4-甲基香豆素-0-〇-吡喃葡萄糖 苷的IC5Q(半数抑制浓度）。
[0023] 结果如下：
[0024]表2 7-氨基-4-甲基香豆素-0-D-吡喃葡萄糖苷对不同肿瘤细胞株增殖的抑制作 用 IC5Q(yM)
[0026]由表2的实验结果可知，7-氨基-4-甲基香豆素-0-D-吡喃葡萄糖苷对测试的四种 肿瘤细胞增殖都有一定的抑制作用，且对A549细胞增殖的抑制作用优于5-FU。
[0027] 2、7_氨基-4-甲基香豆素-0-D-吡喃葡萄糖苷对人正常肝细胞株L-02增殖的抑制 作用
[0028]由表2的实验结果可知，7-氨基-4-甲基香豆素-0-D-吡喃葡萄糖苷对人肺癌A549 细胞增殖具有较强抑制作用，因此我们检测其对人正常肝细胞L-02增殖的抑制作用。具体 实验操作如下：正常肝细胞L-02以含有10%胎牛血清的培养基悬浮，2 X103个细胞/孔的密 度接种于96孔培养板（180此/孔），37°C、5%⑶2培养过夜，每孔分别加入不同浓度的7-氨 基-4-甲基香豆素-0-D-吡喃葡萄糖苷和5-氟脲嘧啶，阴性对照组加入等体积不加药物且含 有1%〇DMSO的培养基，37°C、5 % C02培养72h后MTT法检测药物对细胞的生长抑制率。
[0029] 结果如下：
[0030] 表3 7-氨基-4-甲基香豆素-0-D-吡喃葡萄糖苷对人正常肝细胞L-02增殖的抑制 作用 IC5Q(yM)
[0032]由表3实验结果可知，与5-氟尿嘧啶相比，7-氨基-4-甲基香豆素-0-D-吡喃葡萄糖 苷显示出对L-02细胞较低的细胞毒性。其IC5Q值为5-FU的1.6倍。
[0033]本发明的7-氨基-4-甲基香豆素-0-D-吡喃葡萄糖苷可与药学上可接受的载体混 合，用于制备治疗用药物组合物。可制备成药剂学上通用的剂型，如胶囊、片剂、丸剂、口服 液、颗粒剂、酊剂、缓释剂等胃肠道给药剂型及注射剂、透皮贴剂、外用制剂等胃肠外给药剂 型。
【具体实施方式】 [0034] 实施例1
[0035] 7-氨基-4-甲基香豆素-0-D-吡喃葡萄糖苷的制备：
[0036] 取7-氨基-4-甲基香豆素200mg，溶于缓冲溶液中（KH2P〇4 3.0g/L、MgS〇4 0.75g/L， pH6.5)，其中7-氨基-4-甲基香豆素的重量(mg)和溶剂的体积(mL)的比为1:10。加入等摩尔 比的葡萄糖，室温搅拌溶解，溶解澄清后，40 °C搅拌，搅拌速率为80r/min，反应120小时后， 终止反应。将反应冷冻干燥，得到的固体粉末383mg，称取100-200目硅胶l.Og与残渣均匀拌 样，柱层析200~300目20g干法装柱，氯仿-甲醇梯度洗脱，在氯仿-甲醇=85:15的洗脱馏分 中，可得目标产物7-氨基-4-甲基香豆素-0-D-吡喃葡萄糖苷，经甲醇重结晶，得到白色粉末 156mg〇
[0037]其碳谱和氢谱见表1。
[0038] 实施例2 [0039] 片剂
[0040]取实施例1制得的7-氨基-4-甲基香豆素-0-D-吡喃葡萄糖苷100g与淀粉50g，糊精 50g混合，用适量30 %乙醇作湿润剂，制成软材，常规方法制粒，加入适量硬脂酸镁混合，制 成片剂。
【主权项】
1. 结构式I的化合物或其药学上可接受的溶剂化物：2. 权利要求1的化合物及其制备方法，其特征是:7-氨基-4-甲基香豆素与葡萄糖在含 K出P04和MgS化的缓冲溶液中反应生成。3. 权利要求2的制备方法，其中化学合成方法如下：将7-氨基-4-甲基香豆素溶于含 K出P04和MgS〇4的缓冲溶液中，加入葡萄糖揽拌溶解，溶解澄清后，25°C揽拌，72-120小时后， 终止反应。将反应液冷冻干燥，得到固体粉末，通过硅胶柱层析分离得到目标化合物。4. 权利要求3的制备方法，其中缓冲溶液的配制方法如下：称取K化P042.0-4 . Og、 MgS〇4〇. 5-1.5g，加蒸馈水定容至1. OL，调节pH至5.0-7.0。5. 权利要求3的制备方法，7-氨基-4-甲基香豆素的重量(mg)和缓冲溶液的体积(ml)的 比为 1:6-1:20。6. 权利要求3的制备方法，7-氨基-4-甲基香豆素与葡萄糖的摩尔比为1:1-1:10。7. 权利要求3的制备方法，溶解和揽拌溫度为20-45 °C。8. 权利要求3的制备方法，揽拌速率为20-200r/min。9. 权利要求3的制备方法，反应时间为24-168h。10. -种药物组合物，其中含有权利要求1的化合物或其药学上可接受的溶剂化物及药 学上可接受的载体。11. 权利要求1的化合物或其药学上可接受的溶剂化物用于制备抗肿瘤药物的用途。
【文档编号】C07H17/075GK105968153SQ201610296687
【公开日】2016年9月28日
【申请日】2016年5月3日
【发明人】余伯阳, 张剑, 樊妮, 许家琦, 杜晨晖, 徐益祥
【申请人】中国药科大学