α?胰凝乳蛋白酶催化的傅克反应在合成双吲哚基?二氢吲哚?2?酮类化合物中的应用及方法

α?胰凝乳蛋白酶催化的傅克反应在合成双吲哚基?二氢吲哚?2?酮类化合物中的应用及方法
【专利摘要】本发明公开了α?胰凝乳蛋白酶催化的傅克反应在合成双吲哚基?二氢吲哚?2?酮类化合物中的应用及方法，在α?胰凝乳蛋白酶的催化下能将通式1和通式2在甲醇或乙醇溶液中生成双吲哚基?二氢吲哚?2?酮类化合物，该方法的催化过程简单易操作，收率最高可达97％，表现出极佳的底物适应性，不但丰富了酶的多功能性的研究，也为双吲哚基?二氢吲哚?2?酮类化合物的合成提供了一条高效的合成途径。
【专利说明】
a-膜凝乳蛋白酶催化的傅克反应在合成双间哄基-二氨间哄- 2-酬类化合物中的应用及方法
技术领域
[0001 ]本发明属于化学领域，设及a-膜凝乳蛋白酶催化的傅克反应在合成双吗I噪基-二 氨吗I噪-2-酬类化合物中的应用，还设及制备双吗I噪基-二氨吗I噪-2-酬类化合物的方法。
【背景技术】
[0002] 吗I噪因为其特殊的结构特征自1866年被发现W来，已经成为包括医药，香料，农业 化学品，颜料和材料科学等诸多领域的研究热点，运些工作清楚地显示了吗I噪在有机合成 中所占有的重要地位。
[0003] 双吗I噪类结构，存在于许多药物当中。运类衍生物被证实具有广泛的生物活性，比 如抗追原虫，抗病毒，抗菌抗肿瘤，抗惊厥，帕金森症的治疗和有效的SARS冠状病毒3CL蛋白 酶抑制剂。其中，双吗I噪基-二氨吗I噪-2-酬被发现是一类具有显著抗炎，抗HIV，抗肿瘤活性 的物质。一系列的3,3-双吗I噪基吗I噪酬被发现具有抗癌，抗病毒的活性。有趣的是，据报道， 某些双吗I噪基-二氨吗I噪-2-酬衍生物可W强烈地作用于一系列的肿瘤细胞，但是不会针对 正常的细胞。双吗I噪基-二氨吗I噪-2-酬骨架在药物化学中的广泛应用引起化学家们极大的 兴趣W开发高效实用的合成途径，在已经报道的方法当中，此类杂环合成最直接的方法是 催化說红与吗I噪之间的=组分串联反应得到对应的目标产物。
[0004] a-膜凝乳蛋白酶（a-化ymohypsin from bovine pancreas)也被称作糜蛋白酶， 是从牛的新鲜膜腺中提取分离出的肤链内切酶，是一种丝氨酸蛋白酶，能将与芳香控或其 他大型疏水性侧链(Tyr、Trp、Phe、Met、Leu)结合的肤从键的簇基端水解。作为一种被研究 的很清楚的水解酶，a-膜凝乳蛋白酶的立体结构已被阐明，是由241个氨基酸残基组成的单 一肤链，分子中包含5对二硫键。a-膜凝乳蛋白酶的分子量约为25KDa，最适抑为8-9，其活性 位点为第57位的组氨酸、第102位的天冬氨酸和第195位的丝氨酸，由运=个活性位点组成 的催化=联体结构起着催化中屯、的作用。
[0005] 在合成具有天然产物类似结构的方法研究中，用简捷高效的方法合成目标产物一 直W来是科学家们研究的兴趣所在。因此，为双吗I噪基-二氨吗I噪-2-酬类化合物的合成提 供一条高效的合成途径，也为丰富酶的多功能性的研究是非常必要的。

【发明内容】

[0006] 有鉴于此，本发明的目的之一在于提供a-膜凝乳蛋白酶在催化通式1和通式2的傅 克反应生成双吗I噪基-二氨吗I噪-2-酬类化合物中的应用;本发明的目的之二在于提供制备 双吗I噪基-二氨吗I噪-2-酬类化合物的方法。
[0007] 为实现上述发明目的，本发明提供如下技术方案：
[000引2、l、a-膜凝乳蛋白酶在甲醇溶液或乙醇溶液中催化通式1和通式2的傅克反应生 成双吗I噪基-二氨吗I噪-2-酬类化合物中的应用：
[0009；
[0010] Ri任选为H或甲基;R2任选为H、F、Cl、化、硝基、甲基或甲氧基;R3任选为H或甲基;R 4任选为H、F、化、甲基或甲氧基。
[00川优选的，所述Ri任选为H或甲基;R2任选为H、F、化、硝基或甲氧基;护为H; R4任选为 H、F、甲基或甲氧基。
[001 ^ 优选的，所述Ri任选为H或甲基;R2任选为H、F或甲氧基;护为H; R4任选为H、F、甲基 或甲氧基。
[0013] 2、制备双吗I噪基-二氨吗I噪-2-酬类化合物的方法，包括如下步骤：
[0014] W通式1、通式2为底物，a-膜凝乳蛋白酶为催化剂，甲醇溶液或乙醇溶液为溶剂， 在25~30°C下揽拌反应，制得双吗I噪基-二氨吗I噪-2-酬类化合物；
[0015]
[0016] r1任选为H或甲基;R2任选为H、F、C1、Br、硝基、甲基或甲氧基;R3任选为H或甲基;R 4任选为H、F、化、甲基或甲氧基。
[0017] 优选的，所述Ri任选为H或甲基;R2任选为H、F、化、硝基或甲氧基;护为H;R4任选为 H、F、甲基或甲氧基。
[001引优选的，所述r1任选为H或甲基;R2任选为H、F或甲氧基;R3为H; R4任选为H、F、甲基 或甲氧基。
[0019] 优选的，所述甲醇溶液或乙醇溶液为含体积分数15~30%水的溶液。
[0020] 优选的，所述通式1和通式2的摩尔比为1: 2。
[0021] 优选的，a-膜凝乳蛋白酶的酶量为0.93~1.87kU。
[0022] 优选的，制备双吗I噪基-二氨吗I噪-2-酬类化合物过程中监测反应进程，反应完成 后过滤掉a-膜凝乳蛋白酶，用乙酸乙醋洗涂，使产品都溶于滤液中，用无水硫酸钢干燥滤 液，将滤液浓缩，浓缩物W乙酸乙醋/石油酸为淋洗剂通过快速柱色谱法纯化得到目标产 物。
[0023] 本发明的有益效果在于:a-膜凝乳蛋白酶作为一种绿色环保的生物催化剂，可催 化說红(及其衍生物)和吗I噪(及其衍生物)之间的反应，在甲醇溶剂中通过傅克反应合成双 吗I噪基-二氨吗I噪-2-酬类化合物，得到了很高的收率(收率最高可达97%)，并且表现出极 佳的底物适应性。该方法扩大了 a-膜凝乳蛋白酶在催化化学转化中的应用，不但丰富了酶 的多功能性的研究，也为双吗I噪基-二氨吗I噪-2-酬类化合物的合成提供了一条高效的合成 途径。该方法的催化过程简单易操作，是有机合成双吗I噪基-二氨吗I噪-2-酬类化合物的一 种实用方法。
【附图说明】：
[0024]图1为a-膜凝乳蛋白酶催化的傅克反应的时间进程(反应条件:說红(0.30mmol)， 吗隙(0.60mmo 1)，去离子水(0.2mL)，甲醇(0.8mL)，a-膜凝乳蛋白酶(0.93kU，固体粉末)在 30°C条件下揽拌反应。收率通过硅胶柱层析分离后得到）。
[002引图2为說红与2-甲基吗I噪的傅克反应(a反应条件：說红（0.30mmol)，2-甲基吗I噪 (0.60mmo 1)，去离子水(0.2mL)，甲醇（0.8mL)，a-膜凝乳蛋白酶(0.93kU，固体粉末)在30°C 条件下揽拌反应60h; b收率通过硅胶柱层析分离后得到）。
[0026] 图3为a-膜凝乳蛋白酶催化傅克反应的对比实验。
[0027] 图4为a-膜凝乳蛋白酶催化傅克反应可能的机理。
[0028] 图5为a-膜凝乳蛋白酶催化通式1与通式2反应生成双吗I噪基-二氨吗I噪-2-酬类化 合物反应式。
【具体实施方式】
[0029] 下面将结合优选实施例进行详细的描述。实施例中未注明具体条件的实验方法， 通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。
[0030] -、a-膜凝乳蛋白酶催化的傅克反应合成双吗I噪基-二氨吗I噪-2-酬的溶剂的筛选
[0031] 采用化合物la(說红)和化合物2a(吗I噪）在不同溶剂中的反应作为模型反应进行 a-膜凝乳蛋白酶在不同溶剂中催化效果的探究，对17种不同的溶剂进行了比较，实验结果 见表1。
[0032] 当选择溶剂如二甲基亚讽，N，N-二甲基甲酯胺运类极性非质子性溶剂(表1，序号 1，2)的时候，并没有观察到反应的发生。而在二氯甲烧，1,2-二氯乙烧中（表1，序号14,15) 反应的活性明显提高，均得到了73%的收率。在极性质子性溶剂甲醇与乙醇中（表1，序号 16,17)反应选择性地生成了双吗I噪取代的产物。基于此发现，对此溶剂控制产物生成的反 应分别进行了研究。综上所述，选择1，2-二氯乙烧作为单取代傅克反应合成3-径基氧化吗I 噪衍生物的溶剂，而用甲醇为双取代傅克反应合成双吗I噪基-二氨吗I噪-2-酬类化合物的溶 剂。实验结果见表1。
[0033] 表1溶剂的筛选a
[0034
[00351
[i
[0037] a反应条件：說红（0.30mmol)，吗隙（0.45mmol)，去离子水（O.lmL)，溶剂（0.9mL)， 口-膜凝乳蛋白酶(〇.93kU，固体粉末)在25°C条件下揽拌反应。b收率通过硅胶柱层析分离后 得到。
[0038] 二、含水量对a-膜凝乳蛋白酶催化的傅克反应的影响
[0039] 在之前大量的酶催化非专一性实验中发现，有机溶剂中适量水的加入能很大程度 地影响酶催化反应的效果，因此，研究了在甲醇中不同水的含量对a-膜凝乳蛋白酶催化說 红和吗I噪之间的傅克反应的影响(表2)。在底物摩尔比为說红:吗I噪= 1:2的情况下，随着含 水量从0增加到20% (表2,序号1-5)，双取代产物的收率锐增到非常优异的93%，而在继续 增大含水量的时候反应的收率开始降低(表2,序号6-10)。因此，20%被确定为该反应的最 佳水含量。
[0040] 表2水含量对a-膜凝乳蛋白酶催化的傅克反应的影响a
[00'
[00'
[00'
[0044] a反应条件:說红(0.30mmol),吗I噪(0.60mmol),去离子水(〇-〇. 60mL),甲醇（1. 〇- 0.4mL)，a-膜凝乳蛋白酶(〇.93kU，固体粉末)在25°C条件下揽拌反应72h"b收率通过硅胶柱 层析分离后得到。
[0045] S、酶量对a-膜凝乳蛋白酶催化的傅克反应的影响
[0046] 为了最大限度地利用催化剂的催化效率，对反应体系的酶量进行了筛选，W期使 用最少的a-膜凝乳蛋白酶来催化此模型反应。从双取代反应产物的结构我们不难看出反应 是发生在一当量的說红和二当量的吗I噪之间，因为說红和吗I噪摩尔比为1:2的时候已经得 到了相当满意的收率，出于原子经济的考虑，就W此比例为最佳底物摩尔比进行酶量的考 察(表3)。在进行了一系列酶量的实验之后我们看到在酶量为0.93kU时得到了最好的93% 的收率(表3,序号3)。所W选择0.93kU的酶量为a-膜凝乳蛋白酶催化双吗I噪取代反应最佳 催化剂量。
[0047] 表3酶量对a-膜凝乳蛋白酶催化的傅克反应的影响a
[00'
[00'
[00加]a反应条件：說红（0.30mmol),日引噪（0.60mmol),去离子水（0.2mL),甲醇（0.8mL), 口-膜凝乳蛋白酶(0.31-2.18^，固体粉末)在25°(：条件下揽拌反应7211。叫欠率通过硅胶柱层 析分离后得到。
[0051 ]四、溫度对a-膜凝乳蛋白酶催化的傅克反应的影响
[0052] 鉴于溫度对于酶催化反应的重要性，研究了溫度对a-膜凝乳蛋白酶催化的双吗I噪 取代反应的影响(表4)。从表4中可W看到在15°C到30°C之间运几个溫度条件下都得到了不 错的收率(表4,序号1-4)，其中在30°C的时候得到了最佳的效果，收率达到了96% (表4,序 号4)。而在溫度继续升高时，收率开始慢慢下降，在60°C时有一个急速的下降，下降到仅仅 8% (表4,序号7)。综上结果，选定30°C为该反应最适宜反应溫度。
[0053 ] 表4温度对a-膜凝a蛋白酶催化的傅克反应的影响a
[0化4
^AACC1
[0056] a 反应条件：說红（Q.sQmmol),日引噪（O.eOmmol),去离子水（0.2mL),甲醇（0.8mL), 口-膜凝乳蛋白酶(〇.93kU，固体粉末)在不同溫度揽拌反应72h"b收率通过硅胶柱层析分离 后得到。
[0057] 五、a-膜凝乳蛋白酶催化的傅克反应的时间进程
[0058] 在对a-膜凝乳蛋白酶催化的模型反应进行了一系列反应条件的优化后，紧接着在 最优条件下对模型反应的时间进程进行了探索。进一步研究了 a-膜凝乳蛋白酶催化双吗I噪 取代反应的时间进程（图1)。从图1中可W得出在反应开始的初始阶段，双取代产物的收率 急速上升，在反应的前72小时，收率随着时间的增加而增加，并于72小时的时候达到最高的 96%，之后再延长反应时间，收率并没有继续增加。
[0059] 六、a-膜凝乳蛋白酶催化的傅克反应的对照实验
[0060] 为了验证该双取代反应是由a-膜凝乳蛋白酶催化的，做了一系列对照实验(表5)。 在用牛血清蛋白和鸡蛋清蛋白代替a-膜凝乳蛋白酶催化反应时，分别得到了 29%和16%的 收率(表5,序号12和13)，说明了反应主要是由a-膜凝乳蛋白酶催化的，排除了是被非特异 性的蛋白表面氨基酸残基催化的可能。然后依然分别用尿素和盐酸脈对酶进行了 2小时的 预处理，被尿素 W及盐酸脈处理过的酶催化双取代反应仅仅分别得到了 24%与56%的收率 (表5,序号2和4)。而与此同时尿素与盐酸脈单独催化此反应分别得到12%与40%的收率 (表5,序号3和5)，在对其做了酶活力的测定后显示被尿素处理过的酶活力仅剩9.3U/mg，而 被盐酸脈处理过的酶活力也降到17.2U/mg。因为尿素和盐酸脈可W破坏酶的S维空间结 构，所W可W认为酶的=维结构在催化该反应中起到了至关重要的作用。接下来分别对活 性位点的^个不同的氨基酸残基进行了抑制处理。用DCC对a-膜凝乳蛋白酶进行了 2小时的 处理后催化该反应时，我们发现目标产物的收率降到了 14% (表5,序号6)，而单独DCC催化 仅得到了痕量的双取代产物(表5,序号7)。而被DPEC处理过的酶催化反应得到了44%的收 率(表5,序号8)，但是DPEC本身可W催化得到30%的双取代产物(表5,序号9)。经过酶活力 的测定我们发现被DPEC处理过的酶活力仅剩8.3U/mg。最后，用PMSF对酶进行了处理，同样 得到了不错的效果，此时被PMSF处理过的酶催化得到46 %的收率(表5，序号10 )，而PMSF单 独可W催化得到40%的收率(表5,序号11)，对被PMSF处理过的酶进行酶活测定后我们发现 其活力仅有4.4U/mg。综上所述，可W认为是a-膜凝乳蛋白酶催化了說红和吗I噪间的双取代
[00 反应。[0061 ] 表5a-膜凝a蛋白酶催化的傅克反应的对照连骑a
[00
[00
[00化]a反应条件:說红(0.3〇mm〇 1)，日引噪(0.60mmo 1)，去离子水(0.2mL)，甲醇(0.8mL)， 曰-膜凝乳蛋白酶(〇.93kU，固体粉末)在30°C条件下揽拌反应。b收率通过硅胶柱层析分离后 得到。e活力定义:在溫度为25°C，抑为7.8的条件下，每分钟水解化molN-苯甲酯-レ酪氨酸 乙醋的酶量为lU"d将〇.93kU的酶溶于8M的尿素溶液(将480mg尿素溶于ImL去离子水中）于 室溫下揽拌处理2小时后将水通过冻干除去。e将〇.93kU的酶溶于6mM的盐酸脈溶液（将 573mg盐酸脈溶于ImL去离子水中）于室溫下揽拌处理2小时后将水通过冻干除去。f将 0.93kU的酶溶于ImM的DCC溶液(将206mg DCC溶于ImL去离子水中）于室溫下揽拌处理2小时 后将水通过冻干除去。g将0.93kU的酶溶于0.3mM的DEPC溶液(将43.4化DEPC溶于1血抑为 8.04的憐酸缓冲液中）于室溫下揽拌处理2小时后将水通过冻干除去。h将〇.93kU的酶溶于 0.6mM的PMSF溶液(将105mg PMSF溶于ImL四氨巧喃中）于室溫下揽拌处理2小时后将有机溶 剂旋干。
[0066] 屯、a-膜凝乳蛋白酶催化的傅克反应的底物扩展
[0067] 在对反应的条件进行了一系列优化之后，为了验证a-膜凝乳蛋白酶对催化运类型 反应的底物适应性，考察了多种不同取代基和不同取代位置的說红和吗I噪之间的反应。如 表6与图2所示，a-膜凝乳蛋白酶作为一个高效的催化剂催化得到了对应的多种不同取代的 3,3-二吗I噪基氧化二酬的产物，并获得了良好的收率。当說红的1位被甲基取代的时候与具 有不同取代基的吗I噪都显示出良好的反应性能(表6,序号4，13和14)。当說红的5位为吸电 子取代基的时候(表6,序号3，7,12,15,17和18)，与5位具有吸电子和供电子的吗I噪大都表 现出良好到优秀的反应效果，其中（表6,序号3,12，15,19和21)得到了非常好的收率。当說 红的5位为供电子基的时候得到了非常好的反应效果(表6,序号11和23)。需要注意的是当 吗I噪的1位被甲基取代后，与不同类型的說红都显示出相对较差的反应活性(表6,序号5-7， 16,20和22)。此外，我们扩展了說红跟2-甲基吗I噪的双取代傅克反应，经过72小时的反应 后，得到了 85%的收率。综合底物的收率，a-膜凝乳蛋白酶对发生在甲醇中的双取代傅克反 应表现出了非常出色的催化能力。
[0068] 表6 a-膜凝乳蛋白酶催化的傅克反应的底物扩展a
[006
[0070]
[(
[0072] a反应条件：1 (0.30mmol),2(0.60mmol),去离子水(0.2mL),甲醇(0.8mL) ,a-膜凝 乳蛋白酶(〇.93kU，固体粉末)在30°C条件下揽拌反应。b收率通过硅胶柱层析分离后得到。
[0073] 八、a-膜凝乳蛋白酶催化傅克反应的对比实验与可能的机理
[0074] 为了确定在生成双取代反应的第二步中酶是否参与了反应，做了如图3所示的对 比实验。在30°C下，将单取代的产物3a与吗I噪W摩尔比1:1的比例加入到甲醇与水的混合溶 剂中，然后分别用加入酶与不加入酶做对比，结果发现在没有酶和其他催化剂加入的情况 下，并不能自发地生成双取代的4a，而在加入酶的反应中我们得到了 97%的收率，由此可W 断定酶在第二步吗I噪基的取代中也参与了反应。
[0075] 在确定了 a-膜凝乳蛋白酶参与了每一步反应W及前面的一系列对照实验之后，基 于曰-膜凝乳蛋白酶的活性中屯、，我们提出了一个a-膜凝乳蛋白酶催化說红与吗I噪间傅克反 应可能的催化机理。如图4所示，首先，說红中3位的幾基被a-膜凝乳蛋白酶活性位点中Asp- His-Ser催化S联结构中的195位的丝氨酸活化，然后质子化的幾基被富电子的吗I噪进攻， 形成一个締胺正离子的中间体，在丝氨酸中氧负离子的作用下脱去质子，得到单取代的氧 化吗I噪。在极性质子性溶剂甲醇中，单取代的产物中径基被活泼质子夺走生成一分子水，然 后生成亚胺离子，经过分子间的亚胺締胺互变，得到了一个新的締胺正离子，然后又一分子 的吗I噪进攻此中间体，形成新的締胺正离子，再次通过丝氨酸中氧负离子夺去中间体中的 质子，最后从a-膜凝乳蛋白酶中脱落得到最终的双吗I噪基取代的氧化吗I噪。
[0076] 九、a-膜凝乳蛋白酶催化的傅克反应生成双吗I噪基-二氨吗I噪-2-酬类化合物的实 验
[0077] 根据上述优化条件获得a-膜凝乳蛋白酶催化通式1与通式2反应生成双吗I噪基-二 氨吗I噪-2-酬类化合物（图5)，其最佳条件为:在lOmL的圆底烧瓶中依次加入0.3mmol通式1 的化合物，0.6mmol通式2的化合物，0.8血甲醇，0.2mL去离子水，0.93WJa-膜凝乳蛋白酶，在 30°C下揽拌反应，用薄层色谱进行反应的监测。反应结束后，将酶过滤掉，用乙酸乙醋洗涂 滤饼使得产品都溶于滤液中，随后用无水硫酸钢干燥滤液，将滤液浓缩后得粗产品，然后将 粗产品通过快速柱色谱法纯化得到双取代目标产物(石油酸:乙酸乙醋=1:1-3:1)。
[0078] 获得的产物经氨核磁共振波谱法检测，数据如下：
[0079] 从会物iM。、.
[0080]
[0081 ] 1h 醒R(600MHz，DMS0-d6)Sl0.95(s，2H)，10.59(s，lH)，7.37(d，J = 7.7Hz，2H), 7.25-7.24(m,4H),7.03-6.99(m,3H),6.96-6.93(m,lH),6.87(s,2H),6.82-6.80(t J = 6.8&6.7,2扣.1化 NMR(150MHz，DMS0-d6)Sl79.30，141.85，137.47，135.16，128.31，126.26, 125.41,124.80,121.95,121.44,121.30,118.74,114.90,112.10,110.08,53.14.
[0082]化合物(4b):
[00^
[0084] 1h 醒R(600MHz，DMS0-d6)Sll.02(s，2H)，10.68(s，lH)，7.39(d，J = 8.1Hz，2H), 7.27(d J = 8.1Hz，2H)，7.11-6.98(m，5H)，6.94(d J = 2.2Hz，2H)，6.84(t J = 7.細z，2H) .13c 醒R(150MHz，DMS0-d6)Sl79.21，159.18，157.61，137.49，136.91，126.10，124.94, 121.54,121.12,118.89,114.68,114.58,114.25,113.00,112.84,112.19,110.86,53.67.
[0085] 化合物(4c):
[0086]
[0087] 1h NMR(600MHz，DMS0-d6)Sll.：M(s，lH)，11.10(s，2H)，8.25(dd，J = 8.7,2.3Hz， lH)，8.02(d，J = 2.2Hz，lH)，7.41(d，J = 8.2Hz，2H)，7.24(dd，J=19.4,8.4Hz，3H)，7.06(t， J = 7.細z，2H)，7.00(d，J = 2.5Hz，2H)，6.86(t，J = 7.6Hz，2H).Uc醒R(150MHz，DMS0-d6)S 179.39,148.30,142.74,137.55,135.81,125.91,125.10,121.69,120.82,120.58,119.07, 113.37,112.:34,110.39,53.08.
[008引化合物(4d):
[OC
[0090] 1h NMR(600MHz，DMS0-d6)Sll.03(s，2H)，7.42(d，J = 8.1Hz，2H)，7.37(dd，J = 16.6,7.8Hz，2H)，7.26(d J = 8.1Hz，2H)，7.19(d J = 7.8Hz，lH)，7.07(dd J=14.2,7.1Hz, 3H)，6.93(d，J = 2.4Hz，2H)，6.86(t，J = 7.細z，2H)，3.31(s，3H).UCNMR(150MHz，DMS0-d6) 5177.43,143.26,137.48,134.24,128.45,126.17,125.08,124.83,122.62,121.46, 121.20,118.80,114.64,112.11,109.09,52.70,26.71.
[00川化合物（4e):
[0092]
[0093] 1h 醒R(600MHz，DMS0-d6)Sl0.59(s，lH)，7.37(d，J = 8.3Hz，2H)，7.25-7.20(m, 4H)，7.08(t，J = 7.細z，2H)，6.98(d，J = 7.7Hz，lH)，6.92(t，J = 7.5Hz，lH)，6.88(s，2H)， 6.83(t，J=7.5Hz，2H)，3.70(s，6H).Uc 醒R(150MHz，DMS0-d6)Sl79.00，141.76，137.83， 134.99,128.94,128.35,126.53,125.36,122.01,121.47,118.86(s),113.99,110.14, 52.89,32.80.
[0094] 化合物(4f):
[0095]
[0096] iHMlR(600MHz，DMS0-d6)Sl0.44(s，lH)，7.36(d，J = 8.3Hz，2H)，7.26(d，J = 8.1Hz，2H)，7.08(t，J = 7.6Hz，2H)，6.91(d，J = 7.6Hz，3H)，6.82(ddd，J = 12.1，10.9, 5.0化，4扣，3.70(3，細），3.60(3,3扣.1化醒尺（1501化，0150-(16)8178.88，155.19，137.85， 136.33,135.14,129.00,126.54,121.49,118.87,113.98,112.66,110.37,110.20,55.80， 53.37,32.80.
[0097] 化合物(4g):
[0098
[0099] 1h NMR(600MHz，DMS0-d6)Sl0.83(s，lH)，7.44(dd，J = 8.3，1.8Hz，lH)，7.42-7.35 (m，3H)，7.29(d，J = 8.1Hz，2H)，7.12(t，J = 7.6Hz，2H)，7.01(d，J = 8.3Hz，lH)，6.97(s, 2H)，6.89(t，J = 7.5Hz，2H)，3.70(s，6H).i3CMlR(150MHz，DMS0-d6)Sl78.58，141.16， 137.90,137.39,131.26,129.05,127.89,126.39,121.72,121.23,119.10,113.79,113.26, 112.22,110.36,53.19,32.82.
[0100] 化合物(4h):
[0101：
[0102] 1h NMR(600MHz，DMS0-d6)Sl0.88(d，J=18.3Hz，2H),10.56(s，lH),7.31-7.16(m, 4H)，6.99(d，J = 7.7Hz，lH)，6.96-6.85(m，3H)，6.76(d，J = 8.1Hz，lH)，6.71-6.61(m，2H)， 6.53(d，J = 8. IHz'lH)，2.12(s，3H)，1.99(s，3H).i3c 匪R(150MHz，DMS0-d6)Sl79.83, 141.75,136.11,135.50,134.42,132.53,128.25,127.63,125.97,121.72,120.25,120.22, 120.13,118.43,110.98,110.82,109.93,52.99,13.66,13.48.
[0103] 化合物(4i):
[0104]
[010引 1h NMR(600MHz，DMS0-d6)Sll.l6(s，2H)，10.74(s，lH)，7.42(dd，J = 8.8,4.7Hz， 2H)，7.28(dd J = 9.8,7.8Hz，2H)，7.07(d，J = 7.7Hz，lH)，7.04(d J = 2.5Hz，2H)，7.02- 6.89(m，5H).Uc NMR(150MHz，DMS0-d6)Sl79.08，157.54，156.01，141.79，l：M.43，134.20， 128.58.126.80.126.35.125.39.122.21.114.81.113.16.110.29.109.90.109.73.105.74, 105.58,52.79.
[01061 化会物I Ml-').
[0107
[0108」MKCt300Mhz,DMSU-d6；610.Y9U,2H),10.58(s,lH),7.26-7.20(m,4H),7.00(d, J = 7.7Hz，lH)，6.94(t，J = 7.甜z，lH)，6.86(s，2H)，6.72-6.67(m，4H)，3.52(s，細）.l3CNMR (150MHz，DMS0-d6)8179.23,152.94,141.93,135.05,132.69,128.28,126.63,125.63， 125.44,121.94,114.17,112.51,110.93,109.91,103.90,55.64,53.02.
[0109] '1-八
[0110]
[0111] 1h NMR(600MHz，DMS0-d6)Sll.29(s，2H),10.81(s，lH)，7.47-7.42(m，4H)，7.30(t, J = 7.6Hz，lH) ,7.25-7.21 (m，3H) ,7.10 (d，J = 7.7Hz，lH) ,7.03-7.01 (m，3H) .13c 匪 R (150MHz，DMS0-d6) 8179.01，141.74,136.25,1:34.15,128.74,127.84,126.51,125.38， 124.18.123.24.122.31.114.37.111.66.110.38.52.74.
[0112] 化合物（41)，
[0113
[0114] 1h NMR(600MHz，DMS0-d6)Sll.21 (s，2H), 10.77(s，lH)，7.42(dt，J = 22.1,11.1Hz, 2H)，7.12(t，J = 8.9Hz，2H)，7.06(d，J=12.2Hz，3H)，6.94(dd，J=15.0,8.9Hz，4H).Uc NMR (150MHz，DMS0-d6)8179.00,159.29,157.65,156.06,137.99,136.08,134.19,126.92， 126.17,115.07,114.92,114.16,113.29,113.22,112.97,111.12,110.00,109.83,105.59, 105.43,53.29.
[011引化合物(4m):
[0116
[0117] 1h NMR(600MHz，DMS0-d6)Sl0.89(s，2H)，10.81(s，lH)，7.44(dd，J = 8.3，l.細z， lH)，7.32(d J = 8.9Hz，3H)，7.01(d J = 8.3Hz，lH)，6.95(d J = 2.3Hz，2H)，6.76(dd J = 8.8,2.1Hz，2H)，6.71(s，2H)，3.56(s，6H).1化匪R(150MHz，DMS0-d6)Sl78.85，153.16， 141.33,137.43,132.77,131.18,127.99,126.47,125.83,113.69,113.43,112.77,112.08, 111.14,103.69,55.72,53.33.
[011引化合物(4n):
[0119]
[0120] iHMlR(600MHz，DMS0-d6)Sl0.94(s，2H)，7.39(d，J = 8.3Hz，4H)，7.17(d，J = 6.9Hz，lH)，7.06(d，J = 27.3Hz，3H)，6.82(d，J=15.3Hz，4H)，3.61(s，細），3.33(s，3H).Uc NMR(150MHz,DMS0-d6)5l77.63,153.18,143.42,134.25,132.84,128.54,126.68,125.80, 125.25,122.77,114.10,112.72,111.26,108.97,103.73,55.63,52.77,26.63.
[0121] 化合物(4o):
[0122]
[0123] 1h NMR(600MHz，DMS0-d6)Sll.22(s，2H)，7.45(dd，J = 9.1，4.4Hz，2H)，7.36(dd，J = 11.0,7.6Hz，2H)，7.17(d J = 7.7Hz，lH)，7.06(d J = 8.5Hz，3H)，6.94(d J = 8.7Hz，4H), 3.30(s，3H).Uc NMR(150MHz，DMS0-d6)Sl77.23，157.60，156.07，143.19，l：M.24，133.58， 128.71,126.85,126. :34,125.07,122.89,114.61,113.23,109.99,109.81,109.29,105.70， 105.54,52.40,26.71.
[0124] 化合物(4p):
[01
[0126] 1h 醒R(600MHz，DMS0-d6)Sl0.92(s，2H)，10.75(s，lH)，7.35(d，J = 8.5Hz，2H), 7.16-7.05(m，3H)，7.01(d，J=1.9Hz，2H)，6.79(d，J = 8.7Hz，4H)，3.60(s，6H) .1化醒R (150MHz，DMS0-d6) 8179.:34,159.26,157.69,153.16,138.21,136.84,132.81,126.56， 125.84,114.79,114.64,113.63,113.04,112.88,112.72,111.12,110.82,103.85,55.70, 53.67.
[0127] 化合物(4q):
[012f
[01 巧]1h 匪R(600MHz，DMSO-ds)s 10.78(s，IH)，7.39(ddd，J= 10.7，8.0，3.2Hz，4H)， 7.19-7.11(m，4H)，7.11-7.05(m，lH)，7.03(d，J = 3.6Hz，2H)，6.93(td，J = 7.4,3.8Hz，2H), 3.72(s，6H).Uc NMR(150MHz，DMS0-d6)Sl79.04，159.25，157.68，138.09，137.93，136.78， 129.14,126.50,121.72,121.36,119.10,114.87,114.72,113.47,113.08,112.92,110.96, 110.31,53.54,32.79.
[01301 从合蜘一.
[0131
[0132] NMR(600MHz,DMS0-d6)5ll.43(s,lH),11.29(s,2H),8.27(ddJ = 8.7,2.0Hz, lH)，8.04(s，lH)，7.44(dd，J = 9.2,4.6Hz，2H)，7.26(d，J = 8.7Hz，lH)，7.14(d，J = 2.0Hz， 2H)，6.94(t，J = 8.5Hz，4H). 1化 NMR( 150MHz，DMS0-d6)Sl79.20，157.65，156.12，148.15， 142.95,135.07,1:34.27,127.10,126.02,120.64,113.64,113.26,110.59,110.20,110.02， 105.34,105.18,52.71.
[0133] 化合物(4s):
[0134
[013引 1h NMR(600MHz，DMS0-d6)Sll.39(s，lH)，10.98(s，2H)，8.27(dd，J = 8.6，l.Wz， lH)，8.07(d J=1.5Hz，lH)，7.34(d J = 8.7Hz，2H)，7.25(d J = 8.6Hz，lH)，7.02(d J = 2.2Hz，2H)，6.77(d，J=8.8Hz，2H)，6.74(s，2H)，3.58(s，6H).Uc NMR(150MHz，DMS0-d6)5 179.43,153.24,148.36,142.77,135.75,132.84,126.36,125.91,120.60,112.89,112.70, 111.28,110.30,103.46,55.70,53.04.
[0136]化合物(4t):
[01
[013引 1h NMR(600MHz，DMS0-d6)Sll.24(s，2H)，10.92(s，lH)，7.46(dd，J = 8.2,4.4Hz， 2H)，7.34(d J = 8.0Hz，lH)，7.30(s，lH)，7.10(d J = 8.甜z，3H)，7.00(dJ=10.2Hz，2H), 6.95( t，J = 8.6Hz，2H) ."C 匪 R( 150MHz，DMS0-d6)Sl78.80,157.66,156.13,140.74， 136.40,134.24,128.61,126.97,126.36,126.19,125.26,114.07,113.34,111.85,110.00， 109.91,105.59,105.43,53.10.
[0139]化合物(4u):
[0140；
[0141] 巧醒 R(600MHz, DMS0-d6)Sl0.82(s，1H), 7.41 (t，J= 12.3Hz，2H), 7.31 (dd，J = 15.1，8.3Hz，3H)，7.26(s，lH)，7.12(t，J = 7.甜z，2H)，7.06(d，J = 8.3Hz，lH)，6.98(s，2H)， 6.90(t，J=7.4Hz，2H)，3.71(s，6H).Uc 醒R(150MHz，DMS0-d6)Sl78.70，140.75，137.90， 137.01,129.05,128.40,126.40,126.08,125.21,121.71,121.24,119.10,113.26,111.66, 110.35,53.23,32.82.
[0142] /k厶獻-
[0143]
[0144] 1h NMR(600MHz，DMS0-d6)Sll.l9(s，2H)，10.85(s，lH)，7.47(dd，J = 8.3，1.7Hz， lH)，7.41(dt，J=14.3,7.2Hz，2H)，7.33(d，J=1.4Hz，lH)，7.02(d，J = 7.9Hz，3H)，6.95- 6.85(m，4H).Uc NMR(150MHz，DMS0-d6)Sl78.51，157.55，156.02，141.11，136.70，134.16， 131.45,127.86,126.90,126.07,114.08,113.31,112.35,110.02,109.85,105.46,105.30， 52.94.
[0145] 化合物(4w):
[01
[0147] 1h NMR(600MHz，DMS0-d6)Sll.37(s，lH)，8.27(dd，J = 8.7,2.2Hz，lH)，8.04(d，J = 2. OHz，IH)，7.40(dd J= 17.5，9.9Hz，2H)，7.30( t J = 7.5Hz，2H)，7.23(d J = 8.7Hz，IH)， 7.12(t，J = 7.7Hz，2H)，7.04(s，2H)，6.90(t，J = 7.細z，2H)，3.73(s，6H).UCNMR(150MHz， DMSO-de)5179.18,148.23,142.79,137.96,135.66,129.24,126.26,125.95,121.82, 121.02,120.65,119.24,112.45,110.46,52.89,32.85.
[014引化合物(4x):
[0149；
[0150] 1h 醒R(600MHz，DMS0-d6)Sl0.87(s，2H)，10.55(s，lH)，7.36(d，J = 8.7Hz，2H), 7.02(d，J = 7.2Hz，3H)，6.93-6.86(m，2H)，6.85(s，2H)，6.80(d，J = 8.細z，2H)，3.64(d，J = 12.1Hz，3H)，3.60(s，6H).Uc 醒R(150MHz，DMS0-d6)Sl79.31，155.30，153.10，136.47, 135.41.132.83.126.73.125.81.114.26.113.00. 111.03.110.35.104.07.55.76.53.63.
[0151] 化合物（4z):
[0152]
[015；3] 11 …"i、、u………，…"w u。/。….…(d，J = 22.8Hz，2H)，10.71(s，lH)，7.36(d，J = 8.3Hz，2H)，7.33(d J = 7.4Hz，lH)，7.29(t J = 7.5Hz，lH)，7.22(s，2H)，7.11(d J = 7.7Hz, lH)，7.00(t，J = 7.4Hz，lH)，6.94(t，J = 9.細z，4H)，2.31(s，6H).UCNMR(150MHz，DMS0-d6) 5179.58.141.94.136.00. 135.28.128.29.127.00.126.55.125.52.125.12.123.18, 121.96,121.01，114.46,111.90,110.07,53.28,21.99.
[0154]最后说明的是，W上优选实施例仅用W说明本发明的技术方案而非限制，尽管通 过上述优选实施例已经对本发明进行了详细的描述，但本领域技术人员应当理解，可W在 形式上和细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离本发明权利要求书所限定的范围。
【主权项】
1. a-胰凝乳蛋白酶在甲醇溶液或乙醇溶液中催化通式1和通式2的傅克反应生成双吲 哚基-二氢吲哚-2-酮类化合物中的应用：R1任选为H或甲基;R2任选为H、F、Cl、Br、硝基、甲基或甲氧基;R3任选为H或甲基;R 4任选 为H、F、Br、甲基或甲氧基。2. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于:所述R1任选为H或甲基;R2任选为H、F、Br、硝 基或甲氧基;R 3为H;R4任选为H、F、甲基或甲氧基。3. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于:所述R1任选为H或甲基;R2任选为H、F或甲氧 基;R 3为H;R4任选为H、F、甲基或甲氧基。4. 制备双吲哚基-二氢吲哚-2-酮类化合物的方法，其特征在于，包括如下步骤： 以通式1、通式2为底物，a-胰凝乳蛋白酶为催化剂，甲醇溶液或乙醇溶液为溶剂，在25 ~30°C下搅拌反应，制得双吲哚基-二氢吲哚-2-酮类化合物；R1任选为H或甲基;R2任选为H、F、Cl、Br、硝基、甲基或甲氧基;R3任选为H或甲基;R 4任选 为H、F、Br、甲基或甲氧基。5. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于:所述R1任选为H或甲基;R2任选为H、F、Br、硝 基或甲氧基;R 3为H;R4任选为H、F、甲基或甲氧基。6. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于:所述R1任选为H或甲基;R2任选为H、F或甲氧 基;R 3为H;R4任选为H、F、甲基或甲氧基。7. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于:所述甲醇溶液或乙醇溶液为含体积分数15 ~30 %水的溶液。8. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于:所述通式1和通式2的摩尔比为1:2。9. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于:a-胰凝乳蛋白酶的酶量为〇. 93~1.87kU。10. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于：制备双吲哚基-二氢吲哚-2-酮类化合物 过程中监测反应进程，反应完成后过滤掉胰凝乳蛋白酶，用乙酸乙酯洗涤，使产品完全溶 于滤液中，用无水硫酸钠干燥滤液，将滤液浓缩，浓缩物以乙酸乙酯/石油醚为淋洗剂通过 快速柱色谱法纯化得到目标产物。
【文档编号】C12P17/16GK106047959SQ201610505290
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年6月29日
【发明人】官智, 薛靖文
【申请人】西南大学