专利名称：一种红花红色素的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种红花红色素的制备方法，属植物资源天然化合物利用领域。
背景技术：
红花(Carhamus tincwrius L.)又叫草红花和红蓝花，属菊科红花属，一年生草本植物。其资源分布较广，在很多国家均有栽培。全世界红花年种植面积约110万公顷，我国是主要种植国之一，种植面积在3-4万公顷，主产区集中在新疆，其次为四川、云南、河南等省区。我国红花栽培历史悠久，张骞出使西域时带回红花种子，汉代就有关于红花栽培和药用的记载。红花是我国传统大宗中药材。其功效是活血化瘀、消炎镇痛，具有降血脂、降血压、消淤血、消肿痛、舒筋活络等作用，是中医治疗心脑血管疾患的要药。据李时珍《本草纲目》记载，红花系经用水浸泡，并绞除黄汁后的红花入药，据现代文献中有红花红色素具有明显的活血化瘀，降低血压的作用的报道。在汉代宫廷和民间有用红花作为美唇和胭脂的记载。在中国古代印染术中多以红花作为红色染料，在现代纺织业中有用红花红色素染丝绸制品的报道。
发明内容
本发明目的在于，提供一种红花红色素的制备方法，该方法将红花干燥花绒，用水浸泡淋洗，除尽花绒中的黄色素，离心，取药渣，再加入去离子水，用碳酸钾水溶液调节 PH8. 0-12. 0,室温反应，过滤，用柠檬酸水溶液调节pH2. 0-7. 0,，加入盐析剂，室温放置，过滤，取沉淀，真空干燥，粉碎，用乙醇提取，并用乙酸乙酯和乙醇反复重结晶，真空干燥，即可得到暗红色粉末红花红色素，再用高效液相色谱仪测定，纯度大于90%。该方法沉淀快，杂质少，操作简洁、周期短、影响因素少，成本低，无污染，有利于产业化、规范化和标准化。该方法采用盐析理论和操作手段，使其沉淀快，操作简洁、周期短、影响因素少，成本低，无污染，有利于产业化、规范化和标准化。通过本发明所述的方法获得的红花红色素经用光谱测定，其数据与文献相一致，确定为红花红色素，可作为标准品、药物单体化合物、化妆品或食品染色剂、也可作为染织业的优良天然染料。本发明所述的一种红花红色素的制备方法，按下列步骤进行a、将红花的干燥花绒，用30_40°C水浸泡淋洗8次，第一次加入10倍量的去离子水浸泡3小时，离心，以后每次加8倍量去离子水，每次浸泡2小时，最后一次浸泡液的颜色经离心后为无色或淡黄色，取药渣；b、按药渣重量比加入1-40倍量的去离子水，用IM浓度的碳酸钾水溶液调节 PH 8. 0-12.0，室温反应1-40小时，离心，过滤，取反应液，用IM浓度的柠檬酸水溶液调节 ρΗ2· 0-7. 0 ；C、将步骤b的反应液中按体积比1-40%加入盐析剂，室温放置1-40小时，过滤，取沉淀；d、在温度4-40°C下真空干燥，粉碎，用浓度为95 %乙醇提取，回收乙醇，并用乙酸乙酯和乙醇反复重结晶，真空干燥，得暗红色粉末，为红花红色素粗品；e、将红花红色素粗品，用浓度为95%乙醇溶解，过滤，再以甲醇-水体积比8 2 梯度洗脱，洗脱速度为0. 2-1. 0柱体积/小时，收取多份红花红色素流份，合并，浓缩，即可获得纯红花红色素，用高效液相色谱仪测定，其纯度大于90%。步骤C中加入的盐析剂为氯化钠、氯化铵、硫酸钠或硫酸铵。本发明所述的红花红色素制备方法，该方法采用盐析技术，迫使体系中的红花红色素快速析出并沉淀，杂质少，方法简单，操作简洁，周期短，影响因素少，所用试剂和原料少，成本低，无污染，有利于产业化、规范化和标准化。通过该方法获得的红花红色素有望成为新药研发的单一天然化合物，可作为高级唇膏唇彩和胭脂的化妆品原料，可作为天然食品染色剂，可作为染织业的优良天然染料。在如今滥用化学合成添加剂的今天，人们渴望回归自然，返璞归真，天然色素的应用将成为关注的焦点。
具体实施例方式实施例1a、将红花的干燥花绒10kg，用30°C水浸泡淋洗8次，第一次加入10倍量的去离子水浸泡3小时，离心，以后每次加8倍量去离子水，每次浸泡2小时，最后一次浸泡液的颜色经离心后为无色或淡黄色，取药渣；b、按药渣重量比加入1倍量的去离子水，用IM浓度的碳酸钾水溶液调节pH 8. 0， 室温反应1小时，离心，过滤，取反应液，用IM浓度的柠檬酸水溶液调节pH 2. 0 ；C、将步骤b的反应液中按体积比1 %加入盐析剂氯化钠，室温放置1小时，使体系处于盐析状态，迫使红花红色素从体系中沉淀，过滤，取沉淀；d、在温度4°C下真空干燥，粉碎，用浓度为95%乙醇提取，回收乙醇，并用乙酸乙酯和乙醇反复重结晶，真空干燥，得暗红色粉末，为红花红色素粗品200克，得率约为 2. 0% ；e、取红花红色素粗品2克，用浓度为95%乙醇溶解，过滤，按常规操作加样于葡聚糖凝胶LH-20柱，以甲醇-水8 2梯度洗脱，按0.2-1. 0柱体积/小时速度洗脱，收取多份红花红色素流份，合并，浓缩，即可获得纯红花红色素60克，得率约为0. 6%，用高效液相色谱仪测定，其纯度大于90%。实施例2a、将红花的干燥花绒10kg，用35°C水浸泡淋洗8次，第一次加入10倍量的去离子水浸泡3小时，离心，以后每次加8倍量去离子水，每次浸泡2小时，最后一次浸泡液的颜色经离心后为无色或淡黄色，取药渣；b、按药渣重量比加入10倍量的去离子水，用IM浓度的碳酸钾水溶液调节pH 10. 0，室温反应10小时，离心，过滤，取反应液，用IM浓度的柠檬酸水溶液调节pH 4. 0 ；C、将步骤b的反应液中按体积比10%加入盐析剂氯化铵，室温放置10小时，使体系处于盐析状态，迫使红花红色素从体系中沉淀，过滤，取沉淀；d、在温度10°C下真空干燥，粉碎，用浓度为95%乙醇提取，回收乙醇，并用乙酸乙酯和乙醇反复重结晶，真空干燥，得暗红色粉末，为红花红色素粗品200克，得率约为 2. 0% ；
e、取红花红色素粗品2克，用浓度为95%乙醇溶解，过滤，按常规操作加样于葡聚糖凝胶LH-20柱，以甲醇-水8 2梯度洗脱，按0.2-1. 0柱体积/小时速度洗脱，收取多份红花红色素流份，合并，浓缩，即可获得纯红花红色素60克，得率约为0. 6%。用高效液相色谱仪测定，其纯度大于90%。实施例3a、将红花的干燥花绒10kg，用40°C水浸泡淋洗8次，第一次加入10倍量的去离子水浸泡3小时，离心，以后每次加8倍量去离子水，每次浸泡2小时，最后一次浸泡液的颜色经离心后为无色或淡黄色，取药渣；b、按药渣重量比加入20倍量的去离子水，用IM浓度的碳酸钾水溶液调节pH 9.0， 室温反应20小时，离心，过滤，取反应液，用IM浓度的柠檬酸水溶液调节pH 5. 0 ；C、将步骤b的反应液中按体积比20%加入盐析剂硫酸钠，室温放置20小时，使体系处于盐析状态，迫使红花红色素从体系中沉淀，过滤，取沉淀；d、在温度20°C下真空干燥，粉碎，用浓度为95%乙醇提取，回收乙醇，并用乙酸乙酯和乙醇反复重结晶，真空干燥，得暗红色粉末，为红花红色素粗品200克，得率约为 2. 0% ；e、取红花红色素粗品2克，用浓度为95%乙醇溶解，过滤，按常规操作加样于葡聚糖凝胶LH-20柱，以甲醇-水8 2梯度洗脱，按0.2-1. 0柱体积/小时速度洗脱，收取多份红花红色素流份，合并，浓缩，即可获得纯红花红色素60克，得率约为0. 6%，用高效液相色谱仪测定，其纯度大于90%。实施例4a、将红花的干燥花绒10kg，用38°C水浸泡淋洗8次，第一次加入10倍量的去离子水浸泡3小时，离心，以后每次加8倍量去离子水，每次浸泡2小时，最后一次浸泡液的颜色经离心后为无色或淡黄色，取药渣；b、按药渣重量比加入40倍量的去离子水，用IM浓度的碳酸钾水溶液调节pH 12. 0，室温反应40小时，离心，过滤，取反应液，用IM浓度的柠檬酸水溶液调节pH 7. 0 ；C、将步骤b的反应液中按体积比40%加入盐析剂硫酸铵，室温放置40小时，使体系处于盐析状态，迫使红花红色素从体系中沉淀，过滤，取沉淀；d、在温度30°C下真空干燥，粉碎，用浓度为95%乙醇提取，回收乙醇，并用乙酸乙酯和乙醇反复重结晶，真空干燥，得暗红色粉末，为红花红色素粗品200克，得率约为 2. 0% ；e、取红花红色素粗品2克，用浓度为95%乙醇溶解，过滤，按常规操作加样于葡聚糖凝胶LH-20柱，以甲醇-水8 2梯度洗脱，按0.2-1. 0柱体积/小时速度洗脱，收取多份红花红色素流份，合并，浓缩，即可获得纯红花红色素60克，得率约为0. 6%，用高效液相色谱仪测定，其纯度大于90%。实施例5a、将红花的干燥花绒10kg，用33°C水浸泡淋洗8次，第一次加入10倍量的去离子水浸泡3小时，离心，以后每次加8倍量去离子水，每次浸泡2小时，最后一次浸泡液的颜色经离心后为无色或淡黄色，取药渣；b、按药渣重量比加入30倍量的去离子水，用IM浓度的碳酸钾水溶液调节pH11.0，室温反应30小时，离心，过滤，取反应液，用IM浓度的柠檬酸水溶液调节PH 6.0 ；C、将步骤b的反应液中按体积比30%加入盐析剂氯化钠，室温放置30小时，使体系处于盐析状态，迫使红花红色素从体系中沉淀，过滤，取沉淀；d、在温度40°C下真空干燥，粉碎，用浓度为95%乙醇提取，回收乙醇，并用乙酸乙酯和乙醇反复重结晶，真空干燥，得暗红色粉末，为红花红色素粗品200克，得率约为 2. 0% ；e、取红花红色素粗品2克，用浓度为95%乙醇溶解，过滤，按常规操作加样于葡聚糖凝胶LH-20柱，以甲醇-水8 2梯度洗脱，按0.2-1. 0柱体积/小时速度洗脱，收取多份红花红色素流份，合并，浓缩，即可获得纯红花红色素60克，得率约为0. 6%，用高效液相色谱仪测定，其纯度大于90%。通过本发明所述的方法获得的红花红色素的鉴定紫外分光光度仪测定红花红色素样品，甲醇溶解，用紫外分光光度仪测定，应 518nm处出现最大吸收峰，与RP-HPLC法测定红花中红色素的含量[J].分析测试报.2004， 23(6) =98-100.文献一致。高效液相色谱仪测定取红花红色素样品，甲醇溶解，色谱柱=Agilent 咒-(^4.6謹\150謹，5“111)，流动相乙腈-甲醇-水(30 10 60)，用磷酸调整为 ρΗ3· 0，流速0. SmL/min，进样量15 μ L，测定波长λ 518nm.三次测试结果为保留时峰面积峰面积％
16.657158553798. 813
17. 3671565609100.000
17. 533156978499. 600分子量及结构确定质谱测定样品红花红色素用ESI电离方式对其分子量进行测定，分别采用正、负离子模式得到质谱图，结果显示1、正离子模式下出现[M+Na]+峰，其m/z为933. 10和956. 10 ；2、负离子模式下出现[Μ-ΗΓ的准分子离子峰，其m/z为909 ；结果表明所得红花红色素的相对分子量为910，可与两个Na形成稳定的盐。氢-核磁共振谱(1H-NMReOOMHz, CD3OD)
δ 3.70、3. 92(m，2X2H，glu-6-H)
δ 3.60-3. 63 (m, 2 XlH, glu-2-H)
δ 3.21-3. 22(m，2X3H，glu-3，4，5_H)
5 4.02(m，2XlH，glu-l-H)
δ 6.81(d，4XlH，J = 8. 4Hz, benzene-3-H)
δ 7.55(d，4 X1H，J = 9. OHz，benzene-2-H)
δ 7.76(d，2XlH，J = 15. 6Hz, H0)
δ 7.61(d，2XlH，J = 15. 6Hz, Hj
5 8.62(s，2XlH，benzene-OH)
碳 13-核磁共振谱(13C-NMRl50MHz, CD3OD)
δ 194，191，189为羰基碳信号；
δ 183,143,121,131 (2C),116(2C),161 为 benzene-C ；δ 85. 5为葡萄糖端基碳信号；δ 81，79，71. 3，71.0，62为葡萄糖的其它碳信号；δ 144，113，109 为 sp2 杂化碳信号；δ 88为sp3杂化碳信号。氢-氢相关(H-HCOSY) δ 3. 92，3. 94 与 3. 68，3. 70，3. 92，3. 94 相关，揭示糖上的 C6H;δ 7. 76 与 Sc 143，提示 C0 ；δ 7. 61 与 δ c 121，提示 Ca ；δ 7. 55 与 Sc 131，提示 benzene-2-H ；δ 6. 81 与 Sc 116，提示 benzene-3-H ；在δ 4. 03 与 Sc 85，δ 3. 94，3. 71 与 Sc 62，δ 3. 63 与 δ c71. 3，δ 3· 3 与 Sc 79. 8，δ 3. 22与δ c 81，δ 3. 21与5C 71. 0存在直接相关，进一步提示结构中存在葡萄糖片段；此外，δ8.6与Sc 144也存在直接相关。碳-氢远程相关δ 8. 6与δ C191，194存在远程相关，提示羰基分别位于2和6 位。结合文献中的波谱数据，故鉴定化合物为红花红色素。系统化学命名为6-β-D-葡萄糖-2-[[3-β-D-葡萄糖-2，3-4-3-0Η_5-[3-(4-羟基苯基)-1-酮-2-丙烯基]-6-酮-1，4-环己二烯-基]亚甲基]-5，6-2-羟基-4-[3- (4-羟基苯基)-1-酮-2-丙烯基]-4-环己烯-1，3-2-酮。其结构式=C43H42O22,分子量910.81， C 56. 70%, H 4. 65%, 0 38.65%。
权利要求
1.一种红花红色素的制备方法，其特征在于按下列步骤进行a、将红花的干燥花绒，用30-40°C水浸泡淋洗8次，第一次加入10倍量的去离子水浸泡 3小时，离心，以后每次加8倍量去离子水，每次浸泡2小时，最后一次浸泡液的颜色经离心后为无色或淡黄色，取药渣；b、按药渣重量比加入1-40倍量的去离子水，用IM浓度的碳酸钾水溶液调节pH 8. 0-12. 0，室温反应1-40小时，离心，过滤，取反应液，用IM浓度的柠檬酸水溶液调节pH 2. 0-7. 0 ；C、将步骤b的反应液中按体积比1-40%加入盐析剂，室温放置1-40小时，过滤，取沉淀；d、在温度4-40°C下真空干燥，粉碎，用浓度为95%乙醇提取，回收乙醇，并用乙酸乙酯和乙醇反复重结晶，真空干燥，得暗红色粉末，为红花红色素粗品；e、将红花红色素粗品，用浓度为95%乙醇溶解，过滤，再以甲醇-水体积比8 2梯度洗脱，洗脱速度为0. 2-1. 0柱体积/小时，收取多份红花红色素流份，合并，浓缩，即可获得纯红花红色素。
2.根据权利要求1所述方法，其特征在于步骤c中加入的盐析剂为氯化钠、氯化铵、硫酸钠或硫酸铵。
全文摘要
本发明涉及一种红花红色素的制备方法，该方法将红花干燥花绒，用水浸泡淋洗，除尽花绒中的黄色素，离心，取药渣，再加入去离子水，用碳酸钾水溶液调节pH 8.0-12.0，室温反应，过滤，用柠檬酸水溶液调节pH 2.0-7.0，加入盐析剂，室温放置，过滤，取沉淀，真空干燥，粉碎，用乙醇提取，并用乙酸乙酯和乙醇反复重结晶，真空干燥，即可得到暗红色粉末，用高效液相色谱仪测定，纯度大于90％。该方法采用盐析操作手段，使其沉淀快，操作简洁、周期短、影响因素少，成本低，无污染，有利于产业化、规范化和标准化。通过本发明所述的方法获得的红花红色素可作为标准品、药物单体化合物、化妆品或食品染色剂、也可作为染织业的优良天然染料。
文档编号C09B61/00GK102295839SQ201110178979
公开日2011年12月28日 申请日期2011年6月29日 优先权日2011年6月29日
发明者于萍, 刘庆华, 米广涛, 陈孝娟 申请人:新疆奥斯曼生物资源有限公司