专利名称：一种使用组合菌液恢复受石油污染水源的方法
技术领域：
本发明属于微生物技术和环境生物技术领域，具体涉及一种利用组合菌液还原受 石油污染水源的方法。
背景技术：
我国每年石油消耗量将达到4. 5亿吨，其中需进口约1亿吨。石油资源匮乏、石油 价格猛涨，给我国经济带来很大压力。当前特别是要切实抓好石油天然气的节约和合理使 用。我国人口多，资源少，生态环境脆弱，经济和社会发展还面临着环境与资源的压力，环境 污染和生态恶化的问题还比较突出。大力发展循环经济，实现资源的高效利用和循环使用， 是实现可持续发展的重要途径，也是从中国国情出发的必然选择，也是企业顺应形势要求 的重大决策。生物修复技术就是在这种背景下被开发，并在20世纪90年代得到迅速发展 的一项污染治理工程技术。石油是由上千种化学性质不同的物质组成的复杂混合物，主要包括饱和烃、芳香 烃类化合物、浙青质、树脂类等。石油的开采、冶炼、使用和运输过程的污染和遗漏事故，以 及含油废水的排放、污水灌溉，各种石油制品的挥发、不完全燃烧物飘落等引起一系列水源 的石油污染问题。特别是石油开采过程产生的落地原油，已成为水源污染的重要来源。许多研究表明，一些石油烃类进入动物体内后，对哺乳类动物及人类有致癌、致 畸、致突变的作用。水源的严重污染会导致石油烃的某些成分在粮食中积累，影响粮食的品 质，并通过食物链，危害人类健康。进行含油污水的生物修复，首先需要了解含油污水中微 生物的特性，大多数研究表明水源中存在的微生物种类多样，未被污染水体中的复杂微生 物群落都包含着天然的石油降解菌群。水体被石油污染后，烃类污染物能引导具备降解能 力的微生物产生诱导酶，正是通过这种自然选择以及基因突变作用，能够适应新的微生物 生态环境的微生物种群，逐渐被驯化成为石油降解菌，这样就可以通过这些降解菌来还原 受石油污染的水体，降解石油。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种利用组合菌液来降 解污染水源中的石油的方法，能够降解石油、还原水体。为实现上述目的，本发明提供一种利用组合菌液还原受石油污染水源的方法，包 括以下步骤—种使用组合菌液还原受石油污染水源的方法，其特征在于，包括以下步骤A1， 采集污染水样；A2，从所述污染水样中将原油降解菌进行富集、分离和纯化培养；A3，使用 所述原油降解菌配置组合菌液;A4，使用所述组合菌液加入所述受石油污染水源中。所述的方法，其特征在于，所述步骤A1具体执行一下操作从油井中采集含油污 染水样，其中油井深度为800-1000m，温度为26°C -30°C，所述污染水样经除杂、混均。所述的方法，其特征在于，所述步骤A2具体执行以下操作A21，取经除杂、混勻的所述污染水样添加到装有无机培养基的三角瓶中，在恒温摇床上进行振荡培养7d，30°C条 件下培养7d后取其中的培养物到新鲜的无机培养基中再培养7d，得到富集培养物；A22，移 取A21得到的富集培养物接入富集培养基中，在温度30°C下培养7d, A23，取A22得到的培 养物到新鲜的富集培养基中30°C条件下重复培养7d，A24，取A23得到的培养物到新鲜的富 集培养基中30°C条件下重复培养7d，得到驯化培养液；A25，在无菌的条件下，用接种环蘸 取A24得到的所述驯化培养液，在含油无机盐培养基的平板上划线后，平板倒置于30°C恒 温培养箱中培养24h，得到典型菌落；A26，将A25得到的所述典型菌落在分离培养基的平板 上反复划线纯化后得到单一菌落，分别将纯化的单一菌落的菌株接种至斜面培养基上培养 后，保存于冰箱中。所述的方法，其特征在于，所述无机培养基的组成为1. 0g的1(2朋04-3H20U. 0g的 KH2P04、0. 5g 的 MgS04 7H20、1. Og 的 NH4N03、0. 02g 的 CaCl2、0. 03g 的 FeCl3、lL 去离子水相 混合，pH 7. 5。根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述富集培养基的组成为无机培养 基、2g的原油相混合，pH 7 7. 5。含油无机盐培养基的组成为无机培养基、2g的原油、 20g的琼脂相混合。所述的方法，其特征在于，所述步骤A3具体执行以下操作A31，分别将纯化的单 一菌落的菌株接入到种子培养基中，于30°C下，培养24h后得到培养液，A32，分别吸取所 述培养液接入降解液体培养基中，于30°C、150r/min摇床培养7d,并分别测定单一菌落的 菌株的原油降解率；A33，利用16srDNA分子生物学方法，鉴定原油降解率超过70%的细菌 种类，将其中的归属于假单胞菌、黄杆菌、棒杆菌的菌株分别接入到种子培养基进行扩大培 养，培养温度为30°C，培养24h后，分别吸取浓度为108 1012个/ml的lmL假单胞菌的菌 悬液、浓度为108 1012个/ml的20mL黄杆菌的菌悬液和度为108 1012个/ml的lmL棒 杆菌的菌悬液，充分混合配成所述组合菌液。所述的方法，其特征在于，所述种子培养基的组分为葡萄糖20g，蛋白胨5g，酵母 提取物3g, NaCl 5g，1L的蒸馏水，pH 7. 5。所述的方法，其特征在于，所述降解液体培养基的组分为无机盐培养基，原油lg.所述的方法，其特征在于，所述步骤A4具体执行以下操作按照待处理污水的体 积百分比3%的比例，接向装有含油污水的生物反应器中种入所述组合菌液，加入MgS04 2g/L, CuS04 0. 5g/L, MnS04 0. 5g/L, FeS04 7H200. 5g/L, CaCl2 0. 5g/L，在温度为 28°C 30°C，通气量0. 002 0. 008m/s的条件下，将反应器搅拌桨的转速调至110 150r/min。本发明的有益效果是，(1)高效石油降解菌株可产生双加氧酶，对石油中含碳量在C13-C31的组分降解 率均在90%以上；(2)降解正十八烷的最适温度为30°C、pH值7. 0和Nacl浓度为2%，在低温和高 盐碱条件下仍具有良好的降解能力；(3)降解烷烃的同时能迅速产生脂肽类生物表面活性剂，使表面张力 58. llmN m-1 下降到 36. 6mN m_l。
图1为本发明中为接种了组合菌液的新鲜含油污水和没有接种组合菌液的新鲜 含油污水的原油降解率随时间的变化曲线，横轴为降解时间，纵轴为原油的降解率；图2为本发明中接种、未接种组合菌液的新鲜含油污水和新鲜含油污水、灭菌含 油污水原油降解变化曲线，横轴为降解时间，纵轴为单位重量污水中原油的重量。
具体实施例方式以下结合附图和具体实施例，对本发明进行详细说明。本发明提供的一种利用组合菌液来降解含油污水的方法，试验用选择性培养基和 富集培养基，对试验场含油污水的样品进行菌种、菌群的培养分离，选择优化出试验用降解 石油污水的菌种、菌群。具体按以下步骤进行步骤1，从油井中采集污染水样从油井取出含油污水样，其中油井深度为800-1000m ；温度为26°C _30°C，水样经 除杂、混勻；步骤2，原油降解菌的富集和分离、纯化培养取上步的污水样10ml添加到装有200mL无机盐培养基的三角瓶中，在30°C、200r/ min的恒温摇床上进行振荡培养7d，培养7d后取其中的培养物到新鲜的同样的无机盐培养 基中再培养7d、30°C重复培养，得到富集培养物；移取10ml的富集培养物接入新鲜的富集培养基中，在温度30°C下培养7d，7d后 取其中的培养物到新鲜的同样的富集培养基中再培养7d、30°C重复培养、共重复3次，7天 为一周期，经过3个周期的驯化后，得到驯化培养液；在无菌的条件下，用接种环蘸取驯化 培养液，在含油无机盐培养基的平板上划线后，平板倒置于30°C恒温培养箱中培养24h，得 到典型菌落，然后将典型菌落在含油无机盐培养基的平板上反复划线、纯化后得到纯化的 单菌落，分别将纯化的单菌落的菌株接种至斜面培养基上培养后，保存于4°C冰箱中备用。 其中(1)无机盐培养基的组成为:K2HP04 3H20 1. 0g，KH2P04 1. 0g、MgS04 7H20 0. 5g， NH4N03 1. Og, CaC12 0. 02g, FeC13 0. 03g, 1L 去离子水相混合，pH 7. 5 ； (2)富集培养基的 组分为(1L)无机盐培养基，原油2g相混合，pH 7 7. 5 ；(3)含油无机盐培养基的组分为(1L)无机盐培养基，原油2g，琼脂20g相混合。步骤3，组合菌液配置分别将上步得到的纯化的单菌落菌株接入到种子培养基中，于30°C下，培养24h 后得到培养液，分别吸取5mL培养液接入50mL降解液体培养基中，于30°C，150r/min摇床 培养7d，并分别测定单菌落菌株的原油降解率；利用16S rDNA分子生物学方法，鉴定原油 降解率超过70%的细菌种类，将其中具有高效降解能力，并归属于假单胞菌、黄杆菌、棒杆 菌的菌株分别接入到种子培养基进行扩大培养，温度为30°C，培养24h后，分别吸取浓度为 108 1012个/ml的lmL假单胞菌的菌悬液、浓度为108 1012个/ml的20mL黄杆菌的 菌悬液和度为108 1012个/ml的lmL棒杆菌的菌悬液，充分混合配成组合菌菌液制剂。其中(1)种子培养基的组分为(1L):葡萄糖20g，蛋白胨5g，酵母提取物3g，NaCl 5g，lL的蒸馏水，pH 7.5。(2)降解液体培养基的组分为(1L):无机盐培养基，原油lg。步骤4，组合菌液对原油的降解率
将占污水体积3%的组合菌液制剂接种入装有含油污水的生物反应器中，根据培 养基成分比例加入 MgS04 2g/L, CuS04 0. 5g/L, MnS040. 5g/L, FeS04 7H20 0. 5g/L, CaC12 0. 5g/L，在温度为28°C 30°C，通气量0. 002 0. 008m/s的条件下，以3 llh为周期，将 反应器搅拌桨的转速调至110 150r/min，使组合菌群能够在反应器中协同降解含油污水 中的石油烃。其中步骤3中16S rRNA基因PCR扩增及序列测定具体步骤为(一)菌体收集将镜检纯化的供试菌株分别接种到5mlLB培养液中，28°C、130r/ min震荡培养3-5d，取1. 5ml菌液于离心管中，8000r/min离心5min，弃去上清液，然后，重 复上述操作两次，收集菌体。(二)DNA 提取第一天加入lml 1XTE (Tris 10mM,EDTA ImM，pH 8)，洗涤菌体 2-3 次，即加入 lml 1XTE 溶液后，用手摇动后，在涡旋震荡机上震荡，打散菌体，然后SOOOrpm离心5min，弃去上清， 重复此步骤2次。然后，加入600iilTE缓冲液(含20ia，50mg/ml溶菌酶，即580 ylTE缓 冲液，20 u 1溶菌酶)，并转移到1. 5ml灭过菌的离心管中，旋涡震荡，37°C在水浴锅温育lh。 加入30iU 10% SDS,10u 1蛋白酶K(20mg/ml)，并充分混勻，37°C温浴过夜。第二天1.加20SDS，并翻转混勻(非涡旋震荡)。加130 ill 5M NaCl，并用手剧 烈振荡。在冰上放置30min后，并用手剧烈振荡。2. 12000rpm离心25min。用剪去枪尖的枪头吸取上层水相，转移至新的离心管中， 收集上清液，然后在收集的上清液中加入约700 yl的P C I，充分振荡使其呈乳浊液。 12000rpm离心5min，用剪去枪尖的枪头吸取上层水相，转移至新的离心管中，收集上清。重 复用P C I抽提2-3次至没有蛋白膜出现。3.力卩700iil的C I，非涡旋振荡，12000rpm离心lOmin，若有必要，可重复这一步。
4.收集上清液，加1/10倍体积(约50 ii 1)的3M，PH 5. 2NaAC和1倍体积(500 u 1) 预冷的异丙醇(以沉淀核酸)，轻微反转振荡试管(非涡旋)，使DNA析出。5. 12000rmp离心lOmin，去除上清液，并加500 yl的70%乙醇，用手轻微振荡，洗 涤DNA沉淀中的无机盐和有机溶剂。6. 12000rmp离心15min，并弃去上清乙醇，干燥DNA。7.力卩50 ill纯水，轻敲管壁，使DNA重新悬浮起来。8.力口 3 ii 1 10mg/ml RNAase 并在 37°C温浴 3h。9.加 ddH20 47 iil，用 1/10 (10 u 1)体积的 3M PH 5. 2NaAC 和 1 体积的异丙醇(预 先冷却)，轻微翻转摇晃使DNA沉淀(非涡旋)，12000rpm20min,弃去上清。10.用500 ill的70%乙醇洗DNA沉淀，12000rpm离心5min，去上清并干燥DNA。11.干燥后，加ddH20，轻敲离心管使DNA重新悬浮起来。12.放离心管置4°C冰箱过夜，使DNA能充分溶解。13.电泳检查，并_20°C保存。(三)PCR 扩增
1.16SrRNA 引物选用来源于E. coli 16SrRNA基因序列保守区域的序列合成引物PI和P6，配成 10iiM浓度。正向引物P1 :5，-AGA GTT TGA TCC TGG CTC AGA ACG AAC GCT-3，其序列对应于 E. coli第8-37碱基位置。反向引物P6 :5，-TAC GGC TAC CTT GTT ACG ACT TCA CCC C-3，，此序列对应于 E. coli 第 1479-1506 碱基位置。2. PCR反应体系16SrRNA PCR反应体系体积为50 yl，反应体系组成如下
Reaction Buffer(10X)5. 0u 1MgC12(25mM)3. 0u 1dDNTPs (25mM) 4. 0 u 1正向引物(150iiM) 1.0 ill反向引物(150iiM) 1.0 illDNA 聚合酶(5U/ u 1)0. 25u 1模板DNA (约 20-30ng) 2. 0 u 1补足超纯水至50. 0 ill3.扩增反应条件如下(1)95°C预变性 4min(2)94°C变性 lmin(3)54°C退火 lmin(4)721延伸2111土11(5)重复⑵-⑷步骤32循环(6) 72 °C 最终延伸 7min32个循环后，利用1 %的琼脂糖凝胶进行电泳检测。在16S PCR-RFLP分析的基础 上，选择各个基因型的代表的菌株进行了全序列测定。在NCBI网站上进行Blast比对，采 用16SrDNA进行了分类和鉴定，其16SrDNA的核苷酸序列如说明书后附表所示。真菌的分类鉴定依据中国真菌志进行。菌株鉴定结果表明，供试菌株分别归属于不动细菌属，奈瑟氏球菌属，邻单胞菌 属、黄单胞菌属、动胶菌属、黄杆菌属、假单胞菌属、棒杆菌属、青霉属、葡萄孢属。本发明的组合菌液，从渣油、落地油、含油污水及原油中经过富集、筛选、分离和纯 化出石油降解率为98%的菌株，具有降解石油的特性。通过菌体细胞或其发酵液降解石油中的C13-C31，具体过程为在菌体细胞或其发酵液作用下，直链烷烃首先被通过氧化烷烃末端的一个甲基转 变为相应的醇，源于烷烃的醇在醇脱氢酶的作用下被氧化为相应的醛，醛则通过醛脱氢酶 的作用氧化成脂肪酸，一种情况是直接经历随后的3 -氧化，即形成羧基并脱落两个碳单 元，另一种情况是经历羟基化形成羟基脂肪酸，然后在非专一羟基酶的参与下被氧化为二 羧酸，最后再经历氧化序列，其途经如下式所示R-CH2-CH3+02 — R-CH2-CH2-0H — R_CH2_CH0 — R-CH2_C00H
H3C-(CH2)n-CH3+02 — H3C_ (CH2) n_CH20H — H3C-(CH2) n-CHO — H3C_ (CH2) n-COOH — HOH2C- (CH2) n-COOH — OHC- (CH2) n-COOH — HOOC- (CH2) n-COOH，其中 n 的范围是 1-22h3c- (ch2) u-ch3 — h3c- (ch2) 10-ch (oh) _ch3 — h3c_ (ch2) 10-coch3 — h3c_ (ch2) 9-ch2_0-
coch3 — h3c- (ch2) 9-ch2oh+ch3cooh以下验证本发明组合菌液降解原油的功效，下面的实例将对本发明提供的方法予 以进一步说明，但不限制本发明。具体方法如下本实例中采用有机玻璃质料的、容积为20L的带有搅拌桨和通气装置的间歇式生 物反应器进行试验。用当地取得的含油污水作碳源，即污染物，根据试验用接种量将选择优化出的各 菌种、菌群进行放大培养，配成菌液制剂。具体方法为在无菌的条件下，将其中的假单胞 菌、黄杆菌、棒杆菌分别接入种子培养基进行扩大培养，培养温度30°C，培养24h后，分别吸 取浓度为108 1012个/ml的lmL假单胞菌的菌悬液、浓度为108 1012个/ml的20mL 黄杆菌的菌悬液和度为108 1012个/ml的lmL棒杆菌的菌悬液，充分混合配成组合菌菌 液制剂。将占污水体积3 %的组合菌液制剂接种入装有含油污水的生物反应器中，根据培养 基成分比例加入 MgS04 2g/L，CuS04 0. 5g/L，MnS040. 5g/L，FeS04.7H20 0. 5g/L,CaCl2 0. 5g/ L，在温度为28°C 30°C，通气量0. 002 0. 008m/s的条件下，以3 llh为周期，将反应 器搅拌桨的转速调至110 150r/min，使组合菌群能够在反应器中协同降解含油污水中的 石油烃。降解过程持续5d，在降解过程中以3种细菌单独的降解体系和灭菌的含油污水含 油污水体系作为对照，空白对照为不加任何物质和菌体的体系作为监控样品。处理后的含油污水中石油烃降解的结果如图1至图2。图1为本发明为接种了组 合菌液的新鲜含油污水和没有接种组合菌液的新鲜含油污水的原油降解率随时间的变化 曲线，横轴为降解时间，纵轴为原油的降解率；此图表明投加组合菌液于一定的原油污染水 体中可以提高菌体数量，加快石油降解。由此看出，高效石油降解菌株可产生双加氧酶(菌 株的摇瓶产物加吲哚后显蓝色，这是能否产生双加氧酶的特征性定性显色反应)，对石油中 含碳量在ci3 C31的组分降解率均在90%以上。图2为本发明中接种、未接种组合菌液的 新鲜含油污水和新鲜含油污水、灭菌含油污水原油降解变化曲线，横轴为降解时间，纵轴为 单位重量污水中原油的重量；此图表明新鲜含油污水和灭菌的含油污水在处理中的差别以 及接种组合菌液的新鲜含油污水、未接种组合菌液的新鲜含油污水的原油降解率是明显不 同的，说明本发明的组合菌液取得了良好的降解效果。本发明提供高效降解菌烷烃降解谱的测定烷烃降解谱的测定在FJ培养液中加 入5m L正己烷及用正己烷溶解的10000mg*L-l的菲(内标)25 y L，充分振荡溶解后离心。 用正己烷对萃取液重复萃取两次，合并萃取液后定容至25mL，用干燥的无水硫酸钠脱水，取 1 U L上清液进行GC-MS测定。气相色谱仪为Thermotrace GCULTRA，色谱柱为TRB-5，FID检 测器。色谱条件80°C保持5min，以3°C min_l升至165°C，保持2min，然后以5°C min_l 升至270°C，保持lOmin。进样口温度250°C，检测器温度280°C，无分流比。本发明提供高效降解菌烷烃降解谱的测定在烷烃培养液中加入5mL色谱纯正己 烷及15iiL正十五烷(内标)，充分振荡萃取后，于4°C 10000r min-1离心5min。吸取上 清液至20mL刻度试管中，残液用5mL正己烷重复萃取两次，合并后定容至15mL。稀释10倍后用干燥的无水硫酸钠脱水，取1 P L进行气相色谱测定。气相色谱仪为0V101，色谱柱为 SPB-5，FID检测器。色谱条件130°C保持5min，以10°C-min-1升至220°C，保持5min。进 样口、检测器温度均为250°C。本发明提供的高效降解菌表面张力的测定每间隔8h取培养后的30mL石蜡培 养液，采用分光光度计于600nm处测细菌生长量，12000r min-1离心lOmin去除菌体，用 JYW-200A自动界面张力仪(承德实验机有限责任公司)测上清液的表面张力。本发明属于含油污水的异位生物修复技术。本发明是将具有石油烃降解能力的不 同种类的细菌分别通过液体培养后按照一定比例混合制成液体微生物制剂，采用本发明提 供的微生物制剂具有在水体中活性高、迁移迅速、能够与污染物充分接触并能够协同降解 石油烃污染物的优点。本方法可以保证异位生物修复过程中微生物生长代谢的最佳条件， 通过通气为微生物降解石油烃提供了足够氧，剧烈搅拌使得菌体及其产生的酶、表面活性 剂能够充分的与石油烃相接触，强化微生物在水体中的迁移和营养物质等的传质过程，从 而提高异位生物修复过程的效率。应当理解的是，对本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换， 而所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。
权利要求
一种使用组合菌液还原受石油污染水源的方法，其特征在于，包括以下步骤A1，采集污染水样；A2，从所述污染水样中将原油降解菌进行富集、分离和纯化培养；A3，使用所述原油降解菌配置组合菌液；A4，使用所述组合菌液加入所述受石油污染水源中。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤Al具体执行一下操作从油井 中采集含油污染水样，其中油井深度为800-1000m，温度为26°C -30°C，所述污染水样经除 杂、混均。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤A2具体执行以下操作A21，取 经除杂、混勻的所述污染水样添加到装有无机培养基的三角瓶中，在恒温摇床上进行振荡 培养7d，30°C条件下培养7d后取其中的培养物到新鲜的无机培养基中再培养7d，得到富集 培养物；A22，移取A21得到的富集培养物接入富集培养基中，在温度30°C下培养7d, A23, 取A22得到的培养物到新鲜的富集培养基中30°C条件下重复培养7d，A24，取A23得到的培 养物到新鲜的富集培养基中30°C条件下重复培养7d，得到驯化培养液；A25，在无菌的条件 下，用接种环蘸取A24得到的所述驯化培养液，在含油无机盐培养基的平板上划线后，平板 倒置于30°C恒温培养箱中培养24h，得到典型菌落；A26，将A25得到的所述典型菌落在分离 培养基的平板上反复划线纯化后得到单一菌落，分别将纯化的单一菌落的菌株接种至斜面 培养基上培养后，保存于冰箱中。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述无机培养基的组成为1.0g的 K2HPO4 · 3Η20、1· Og 的 ΚΗ2Ρ04、0· 5g 的 MgSO4 · 7Η20、1· Og 的 ΝΗ4Ν03、0· 02g 的 CaCl2、0. 03g 的 FeCl3UL去离子水相混合，pH 7.5。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述富集培养基的组成为无机培养基、 2g的原油相混合，pH 7 7. 5。含油无机盐培养基的组成为无机培养基、2g的原油、20g 的琼脂相混合。
6.根据权利要求3至5任一所述的方法，其特征在于，所述步骤A3具体执行以下操作 A31，分别将纯化的单一菌落的菌株接入到种子培养基中，于30°C下，培养24h后得到培养 液，A32，分别吸取所述培养液接入降解液体培养基中，于30°C、150r/min摇床培养7d，并分 别测定单一菌落的菌株的原油降解率；A33，利用16SrDNA分子生物学方法，鉴定原油降解 率超过70%的细菌种类，将其中的归属于假单胞菌、黄杆菌、棒杆菌的菌株分别接入到种子 培养基进行扩大培养，培养温度为30°C，培养24h后，分别吸取浓度为IO8 IO12个/ml的 ImL假单胞菌的菌悬液、浓度为IO8 IO12个/ml的20mL黄杆菌的菌悬液和度为IO8 IO12 个/ml的ImL棒杆菌的菌悬液，充分混合配成所述组合菌液。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述种子培养基的组分为葡萄糖20g，蛋 白胨5g，酵母提取物3g，NaCl 5g，IL的蒸馏水，pH 7. 5。
8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述降解液体培养基的组分为无机盐培 养基，原油lg。
9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤A4具体执行以下操作按照待 处理污水的体积百分比3%的比例，接向装有含油污水的生物反应器中种入所述组合菌液， 加入 MgS042g/L，CuSO4O. 5g/L，MnSO4O. 5g/L，FeSO4 · 7H20 0. 5g/L，CaCl2O. 5g/L，在温度为 28°C 30°C，通气量0. 002 0. 008m/s的条件下，将反应器搅拌桨的转速调至110 150r/mirio
全文摘要
本发明公开一种使用组合菌液还原受石油污染水源的方法，其特征在于，包括以下步骤A1，采集污染水样；A2，从所述污染水样中将原油降解菌进行富集、分离和纯化培养；A3，使用所述原油降解菌配置组合菌液；A4，使用所述组合菌液加入所述受石油污染水源中；采用本发明的方法，高效石油降解菌株可产生双加氧酶，对石油中含碳量在C13-C31的组分降解率均在90％以上；降解正十八烷的最适温度为30℃、pH值7.0和Nacl浓度为2％，在低温和高盐碱条件下仍具有良好的降解能力；降解烷烃的同时能迅速产生脂肽类生物表面活性剂，使表面张力58.11mN·m-1下降到36.6mN·m-1。
文档编号C02F3/34GK101851027SQ20101018537
公开日2010年10月6日 申请日期2010年5月28日 优先权日2010年5月28日
发明者李军, 苏永杰, 邓振山 申请人:延安市微生物研究所