层析柱硅胶填装上样方法
【技术领域】
[0001]本发明属于层析柱技术领域，具体的说，涉及一种层析柱硅胶填装上样方法。
【背景技术】
[0002]层析分离是化工和制药行业常用的目标物分离、纯化方法，中药现代化的其中目标之一就是把中药的有效成分分离纯化，研发出高效、低毒、服用方便的新型药物制剂，硅胶层析分离是植物提取物中有效活性成分分离纯化的主要方法。
[0003]硅胶层析分离生产，分离载体硅胶的填装和上样是两个非常关键的步骤，直接关系到硅胶层析分离的效果和质量，目前规模化硅胶层析分离生产过程中，分离载体硅胶的填装和上样没有规范化的操作，造成分离质量不稳定，严重影响生产。
【发明内容】
[0004]为解决以上技术问题，本发明的目的在于提供一种层析柱硅胶填装上样方法，分离的质量稳定，规范化操作，而且操作更加简单方便。
[0005]本发明目的是这样实现的:
[0006]—种层析柱硅胶填装上样方法，其关键在于按以下步骤进行:
[0007]a、配制样品溶液:向待分离样品中加入溶剂溶解得到样品溶液；
[0008]b、配制溶剂-硅胶混悬物:向硅胶中加入溶剂；
[0009]c、分离准备:关闭层析柱底阀，向层析柱中加入1/3层析柱体积的溶剂，然后向层析柱中缓慢加入溶剂-硅胶混悬物，同时缓慢开启层析柱底阀，保持加入速率与流出速率相等，同时保持液面高出硅胶面14.5?15.5cm，溶解-硅胶混悬物加入完毕后，关闭层析柱底阀，层析柱静置沉降；
[0010]d、分离提纯:开启层析柱底阀至液面刚好下至硅胶面时关闭，在硅胶面上垫一张直径略小于柱直径的滤纸;再将样品溶液加入层析柱内，开启层析柱底阀，当溶液下降至硅胶面时，再加入溶剂洗涤层析柱内壁和样品溶液的容器，洗涤液归入层析柱后，加入洗脱液开始层析分离提纯。
[0011 ]优选地，上述步骤a和d中的溶剂加入体积量< 4%层析柱体积。
[0012]优选地，上述步骤b中的溶剂体积与娃胶重量比为3.5mL/g。
[0013]有益效果:
[0014]本发明一种层析柱硅胶填装上样方法，分离的质量稳定，规范化操作，而且操作更加简单方便。
【具体实施方式】
[0015]
[0016]含量70%紫杉醇粗品的主要杂质是三尖杉宁碱和7-表紫杉醇，紫杉醇和7-表紫杉醇是同分异构体，紫杉醇和三尖杉宁碱分子结构非常相似，它们之间的层析分离难度较大，以此作为实例，具有一定的代表性。下面结合实施例对本发明作进一步说明。
[0017]实施例1:
[0018]〈1>称取1000g含量70%的紫杉醇粗品，加3500ml二氯甲烷搅拌溶解完全，得样品溶液。
[0019]〈2>称取35kg 200?300目层析硅胶，加23L二氯甲烷溶剂，搅拌均匀，得二氯甲烷-娃胶混悬物。
[0020]〈3>关闭直径273mm、高150cm的层析柱底阀，加入溶剂二氯甲烷29L，加入二氯甲烷-硅胶混悬物，开启层析柱底部阀门，调节阀门开度，保持溶剂液面在硅胶面上15cm左右，二氯甲烷-硅胶混悬物加入完毕，关闭层析柱底阀，让硅胶柱床静置沉降12小时。
[0021]〈4>开启层析柱底阀，液面下降至硅胶面时，在硅胶面上垫一张直径略小于层析柱直径的滤纸，加入样品溶液，样品溶液液面下降至硅胶面时，用3L 二氯甲烷洗涤柱内壁和烧杯，洗涤液完全进入层析柱后，加洗脱液二氯甲烷-乙酸乙酯-异丙醇混合溶液，开始层析分离。
[0022]〈5>层析流份分段合并，浓缩，干燥，得紫杉醇主段600g，紫杉醇含量99.15%。
[0023]最后需要说明的是，上述描述仅仅为本发明的优选实施例，本领域的普通技术人员在本发明的启示下，在不违背本发明宗旨及权利要求的前提下，可以做出多种类似的表示，这样的变换均落入本发明的保护范围之内。
【主权项】
1.一种层析柱硅胶填装上样方法，其特征在于按以下步骤进行: a、配制样品溶液:向待分离样品中加入溶剂溶解得到样品溶液； b、配制溶剂-硅胶混悬物:向硅胶中加入溶剂； c、分离准备:关闭层析柱底阀，向层析柱中加入1/3层析柱体积的溶剂，然后向层析柱中缓慢加入溶剂-硅胶混悬物，同时缓慢开启层析柱底阀，保持加入速率与流出速率相等，同时保持液面高出硅胶面14.5?15.5cm，溶解-硅胶混悬物加入完毕后，关闭层析柱底阀，层析柱静置沉降12h; d、分离提纯:开启层析柱底阀至液面刚好下至硅胶面时关闭，在硅胶面上垫一张直径略小于柱直径的滤纸;再将样品溶液加入层析柱内，开启层析柱底阀，当溶液下降至硅胶面时，再加入溶剂洗涤层析柱内壁和样品溶液的容器，洗涤液归入层析柱后，加入洗脱液开始层析分离提纯。2.根据权利要求1所述的层析柱硅胶填装上样方法，其特征在于:所述步骤a和d中的溶剂加入体积量< 4%层析柱体积。3.根据权利要求2所述的层析柱硅胶填装上样方法，其特征在于:所述步骤b中的溶剂体积与硅胶重量比为3.5mL/go
【专利摘要】本发明公开了一种层析柱硅胶填装上样方法，其特征在于按以下步骤进行：a、配制样品溶液；b、配制溶剂-硅胶混悬物；c、分离准备：关闭层析柱底阀，向层析柱中加入溶剂，然后向层析柱中缓慢加入溶剂-硅胶混悬物，溶解-硅胶混悬物加入完毕后，关闭层析柱底阀，层析柱静置沉降；d、分离提纯：开启层析柱底阀至液面刚好下至硅胶面时关闭，在硅胶面上垫一张直径略小于柱直径的滤纸；再将样品溶液加入层析柱内，开启层析柱底阀，当溶液下降至硅胶面时，再加入溶剂洗涤层析柱内壁和样品溶液的容器，洗涤液归入层析柱后，加入洗脱液开始层析分离提纯。本发明一种层析柱硅胶填装上样方法，分离的质量稳定，规范化操作，而且操作更加简单方便。
【IPC分类】B01D15/20, C07D305/14
【公开号】CN105457337
【申请号】CN201510791845
【发明人】徐道礼, 徐胜博, 雷茂林
【申请人】重庆臻源红豆杉发展有限公司
【公开日】2016年4月6日
【申请日】2015年11月17日