专利名称：硅胶柱层析分离中药生物碱的方法
技术领域：
本发明涉及一种从中药中提取生物碱的方法，尤其是涉及一种利用硅胶柱层析从 中药中提取生物碱的方法。
背景技术：
生物碱是广泛存在于自然界的一类含氮的有机化合物，大多数具有较复杂的氮杂 环结构，呈碱性。生物碱的发现始于19世纪初，是人们研究的最多而且最早的一类天然 的有机化合物。目前已发现的生物碱大约6000余种，并且仍以每年约100多种的速度递 增。因为大多数生物碱都具有抗癌、抗肿瘤、抗炎、抗病毒以及抗血小板凝集、抗心律失常以 及抗高血压等心血管疾病的作用，因此，它在卫生、医药等方面有着巨大的应用潜力。由于 大多数生物碱的药理作用尚有待进一步研究，这就需要从大量含有生物碱的药用植物中提 取、分离、纯化生物碱。如何运用现代高效的分离手段，简便而高效的分离，是当前生物碱研 究的一个重要方面。按照生物碱的基本结构，已可分为几十种类型。大多数生物碱几乎不溶或难溶于 水，能溶于氯仿、乙醚、酒精、丙酮、苯等有机溶剂，但生物碱与稀酸作用生成盐类后，可溶于 水溶液中。绝大多数生物碱在常压时均无挥发性，一般性质较稳定，分离纯化过程不需要特 殊环境，在贮存上除避光外，不需其他特殊条件。许多药用植物中富含生物碱，是中药有效 成份的组成部分。生物碱有效成分的分离与纯化是中药开发的难点与关键，新技术的研究 与开发能大大提高中药化学成分的收率与质量，节约大量的时间与能源。
发明内容
本发明为了解决现有技术对中药中生物碱提取成本较高、操作复杂、提纯率低、不 利于工业化生产的问题而提供了一种硅胶柱层析分离中药生物碱的方法。为了解决以上技术问题，本发明的技术方案是一种硅胶柱层析分离中药生物碱 的方法，具体工艺步骤如下(1).原料预处理将中药材洗净，60°C下烘他至恒重，用粉碎机粉碎后过60目筛，得中药粉末备 用；(2).溶解按照HCl和水1 10的比例加入浓度为0. 04%的HCl，充分搅拌，微波炉处理2 分钟，用离心机6000r/min离心20min，取上清液；取上清液后把沉淀按照上述的1和2步 骤再重复一次；合并两次上清液，用10%氨水调pH值为10 ；(3).氯仿萃取加入上清液1/5体积的氯仿萃取，同样氯仿萃取3次，合并氯仿层，利用旋转蒸发 仪减压蒸干；(4).层析
根据层析柱的体积，用300-400目硅胶干法填充至层析柱3/4处，用3倍层析柱体 积的氯仿过柱；将待纯化的液体加到层析柱的顶端，加入量不超过柱体积的1/10，打开柱 下端，使液体浸入硅胶中；以甲醇和氯仿配比为1 1的洗脱剂洗脱，从第二个柱体流出的 液体开始收集，一直收集到第六个柱体流出液为止；(5).干燥将收集液用旋转蒸发仪减压蒸干。本发明避免了使用索氏提取装置等复杂耗时的仪器设备，具有效率高，较为简便 等特征，硅胶层析具有成本低廉，重复性高，操作方便等优点。
具体实施例方式本发明的具体工艺步骤如下1.原料预处理将中药材(如荷叶、黄连、延胡索、杜仲等，根据不同需要分别提取)洗净，60°C下 烘8h至恒重(恒重延长干燥时间药材的重量并不发生变化)。用粉碎机粉碎后过60目 筛，得中药粉末备用。2.溶解按照HCl和水1 10(HC1 水=1 10)的比例加入浓度为0. 04%的HC1，充分 搅拌；WD900B型微波炉处理2分钟，用离心机6000r/min离心20min，取上清液；取上清液后 把沉淀按照上述的1和2步骤再重复一次。合并两次上清液(将2次离心的上清液合并)， 用10%氨水调pH值为10。3、氯仿萃取加入1/5体积(步骤2中合并后的上清液的1/ 的氯仿萃取(氯仿萃取就是一 种萃取方法)，同样氯仿萃取3次，合并氯仿层，利用旋转蒸发仪减压蒸干。无水乙醇溶解沉 淀，待柱层析纯化。4、层析根据层析柱(层析柱是层析技术中的主体，一般是玻璃管或有机玻璃管)的体积， 用300-400目硅胶干法填充至层析柱3/4处(干法填充先用300-400目硅胶填充至层析 柱3/8处，然后将下面的活塞与泵相通，通过减压使硅胶装实，再加入3/8体积的步骤3中 的沉淀溶解液，浸润硅胶，小心使之不产生气泡)，用3倍层析柱体积的氯仿过柱。将待纯化 的液体加到层析柱的顶端，加入量不超过柱体积的1/10，打开柱下端，使液体浸入硅胶中； 以甲醇和氯仿配比为1 1的洗脱剂洗脱，从第二个柱体流出的液体开始收集，一直收集到 第六个柱体流出液为止(以甲醇和氯仿配比为1 1为洗脱剂，70ml/min的流速进行梯度 洗脱，柱的使用压力为2-3kg/c，从第二个柱体积流出液开始收集，一直收集到第六个柱体 积液为止。)。5、干燥将收集液用旋转蒸发仪减压蒸干。微波有助于生物碱的析出，析出的生物碱粗品能打到22% -23%左右。酸性溶液有利于将生物碱与其他物质分离，分离后得到的提纯产品生物碱含量达 到94% -95%左右。用高效液相色谱法鉴定，以杜仲为例杜仲中总生物总碱和高速逆流色谱分离各组分用HPLC分析。WatersC18色谱柱Q60mmx4. 6mm, 6um)；检测波长为^Onm ；流动 相为乙醇一乙酸/乙酸钠缓冲溶液(60 40，V/V，pH 5.0)，流速l.Oml/min，进样量10uL。 HSCCC各峰组分的结构根据ESI-MS-MS、IH-NMR和13C-NMR的数据进行分析，得出总生物碱 含量在94-95%。
权利要求
1. 一种硅胶柱层析分离中药生物碱的方法，其特征在于具体工艺步骤如下(1).原料预处理将中药材洗净，60°c下烘至恒重，用粉碎机粉碎后过60目筛，得中药粉末备用；(2).溶解按照HCl和水1 10的比例加入浓度为0. 04%的HCl，充分搅拌，微波炉处理2分钟， 用离心机6000r/min离心20min，取上清液；取上清液后把沉淀按照上述的1和2步骤再重 复一次；合并两次上清液，用10%氨水调pH值为10 ；(3).氯仿萃取加入上清液1/5体积的氯仿萃取，同样氯仿萃取3次，合并氯仿层，利用旋转蒸发仪减 压蒸干；(4).层析根据层析柱的体积，用300-400目硅胶干法填充至层析柱3/4处，用3倍层析柱体积的 氯仿过柱；将待纯化的液体加到层析柱的顶端，加入量不超过柱体积的1/10，打开柱下端， 使液体浸入硅胶中；以甲醇和氯仿配比为1 1的洗脱剂洗脱，从第二个柱体流出的液体开 始收集，一直收集到第六个柱体流出液为止；(5).干燥将收集液用旋转蒸发仪减压蒸干。
全文摘要
本发明公开了一种硅胶柱层析分离中药生物碱的方法，具体工艺步骤为原料预处理、溶解、氯仿萃取、层析、干燥几个步骤。本发明避免了使用索氏提取装置等复杂耗时的仪器设备，具有效率高，较为简便等特征，硅胶层析具有成本低廉，重复性高，操作方便等优点。
文档编号C07G5/00GK102093433SQ201010588418
公开日2011年6月15日 申请日期2010年12月15日 优先权日2010年12月15日
发明者羌利民, 谭湘陵 申请人:南通远大生物科技发展有限公司, 谭湘陵