专利名称：消化系统肿瘤诊断试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明属生物试剂技术领域。具体涉及一种消化系统肿瘤诊断试剂盒。
正如《临床检验杂志》1997年第15卷第1期第57页报道的试验性肝癌的大鼠，血清中GPDA活性大约为健康鼠的2倍，而肝癌组织的匀浆和微粒体大部分的GPDA比活性都显著低于健康鼠；而用肝癌组织制取的细胞液部分的GPDA比活性，显著高于用正常肝组织制取者。说明肝癌时血清GPDA的升高，是由于微粒体内酶向外释放增多引起，与血清γ-GT升高是由于合成增多引起的机制不同。
胃癌病人血清GPDA明显下降，尽管下降机理不明，但这种现象已为诸多报道证实。饶有趣味的是，用六种不同的x-Pro-p-NA作底物，测定正常人和胃癌病人的血清GPDA，尽管不同底物测得的GPDA活性水平相差十分明显，但每种底物各自测得的胃癌病人血清GPDA活性均值，都只有正常人的一半左右。近年若干报道采用较高浓度底物，提高了GPDA活性的绝对值，但没有改变正常人和胃癌病人血清GPDA活性均值的倍比关系。
其他良性胃肠道病变，血清GPDA也可略有下降。下降幅度较大的为胃溃疡，依次为慢性胃炎和十二指肠球部溃疡。如果以正常对照组的(X-3S)为界限，低于此值为阳性，则胃溃疡、慢性胃炎和十二指肠球部溃疡的阳性率依次为18.4％、6.2％和0％，远低于胃癌的阳性率(72.5％)。良性病变时血清GPDA活性下降，可否作为癌变的早期信号，尚有待研究。但是，对血清GPDA显著下降者，应该结合临床警惕胃癌的可能。肺癌、贲门癌和食管癌病人血清GPDA活性也有不同程度下降，下降幅度依次顺序减小。如果胃癌和上述器官癌出现肝转移时，GPDA活性可明显升高。胃癌切除后，血清GPDA有回升趋势。
GPDA测定试剂中的主原料，即底物——甘氨酰脯氨酰对硝基苯胺对甲苯磺酸(GPN)，配制成液体试剂后极不稳定，只能当天使用，否则必须在零摄氏度以下冰冻保存，临用前复融混匀，一次使用，不能反复冻融，给实际应用带来很大不便，稍有疏忽极易影响测定结果的准确性。目前市场上的干粉或干粉加液体的试剂盒，都普遍存在这一弊端。
本发明试剂盒既可作连续监测法，也可在加入终止液后作两点比色法使用；工作试剂吸光度R1与R2以9∶1混合后A405nm≤1.0(水校零)精密度CV≤5％线性范围≤638U/L本发明首次研制成功了以GPN为底物，稳定的全液体型GPDA测定试剂盒。
血清中GPDA测定的临床应用价值甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶(GPDA)的生理功能尚不清楚，但由于能特异地水解N-末端为甘氨酰脯氨酰的肽键，而胶原分子中恰恰富含这种结构成份，因此推测在胶原肽的降解中起着作用。健康成人血清中GPDA水平比较恒定，而在某些病理状态下，可出现升高或降低。观察血清中GPDA水平的变化，对疾病的诊断和监护具有价值。
血清中GPDA测定的临床意义主要在于1.对肝癌和其他肝胆系统疾病的诊断价值肝癌病人血清中GPDA活性显著升高。曾有报道，血清GPDA＞200U/L(健康组为77.5±17.1U/L)的20例病人中，除一例总胆管结石外，其余十九例均为肝癌。
原发性肝癌(PHC)病人血清中GPDA升高的阳性率达83％左右，转移性肝癌可高达87.5％。两类病人血清GPDA升高的程度接近，约为健康人的1.5-2.5倍；但也有报道转移性肝癌病人可升高达健康对照组的三倍以上。
PHC病人血清GPDA活性与AFP不相关，且若干AFP阴性的亚临床期PHC病人，血清GPDA活性已见升高，说明GPDA与AFP有良好的互补作用。但是亚临床期PHC病人血清GPDA的升高程度和升高阳性率，均显著低于临床期病人，反映了血清GPDA水平与PHC的病情有关。
急性肝炎、慢活肝、肝硬变、阻塞性黄疸等，血清GPDA可有不同程度升高，升高幅度不及肝癌病人。但是，重症肝炎、酒精性肝炎时，血清GPDA升高可甚于肝癌病人。
肝血管瘤病人的血清GPDA活性，均在正常参考范围之内。因此有人主张，影象学诊断为占位性病变者，如果血清GPDA升高，应该排除肝血管瘤。
2.胃癌和其他消化道疾病、肺癌病人血清GPDA的活性水平胃癌病人血清中GPDA活性明显下降，仅及健康人组的一半左右；也有报道大约70％以上的胃癌病人，可下降到健康对照组的X-3S水平以下。胃癌切除后，血清GPDA有回升趋势。
贲门癌、食管癌和肺癌病人，血清GPDA可有不同程度下降。
胃癌和上述其他器官癌发生肝转移时，血清GPDA可显著升高。动态观察血清GPDA活性的变化，有助于监护上述器官的病情以及是否发生肝转移。
良性胃肠道病变，血清GPDA也可略有下降，下降幅度较大的为胃溃疡，依次为慢性胃炎和十二指肠球部溃疡。如果以低于正常对照组的X-3S为阳性界限，则这三种疾病的阳性率依次为18.4％、6.2％、和0％。
3.急性淋巴细胞性白血病、淋巴肉瘤、何杰金氏病和系统性红斑狼疮病人，以及病程在15个月以上的类风湿关节炎病人，血清GPDA活性可显著低于健康人。
权利要求
1.一种消化系统肿瘤诊断试剂盒，其特征在于该试剂盒是由试剂1和试剂2组成的，其中试剂1为0.5-3.7％Tris、0-300mmol/L和0-0.1％的NaN3；试剂2为0-1.3％CAPSO、0-50mmol/L或0-0.02％海藻糖0-0.5mmol/L、5-50％乙二醇或30-70％丙三醇、0-2％牛血清蛋白、0.2-1.9％GPN、5-40mmol/L和0-0.1％NaN3。
全文摘要
本发明属生物试剂技术领域。本发明公开了一种消化系统肿瘤诊断试剂盒。该试剂盒是以甘氨酰脯氨酰对硝基苯胺对甲苯磺酸(GPN)为底物的全液体型测定血清甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶活性，用于肝癌、胃癌的诊断和监护。本发明的试剂盒稳定性好，有很高的临床价值。
文档编号G01N33/96GK1428436SQ01139260
公开日2003年7月9日 申请日期2001年12月27日 优先权日2001年12月27日
发明者张抗 申请人:张抗