专利名称：肿瘤诊断剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种新型肿瘤诊断剂，该肿瘤诊断剂含有δ-氨基乙酰丙酸、其衍生物、或它们的盐。
背景技术：
早期检测对于治疗肿瘤最为重要。通常，人们通过测量血液中的每种肿瘤对应的物质(通常被称为肿瘤标志物)来检测各种肿瘤。所述的肿瘤标志物可定义为“在产生癌细胞的物质中或是在因体内正常细胞与癌细胞相互作用而产生的物质中，可通过对血液、组织、和排泄物(尿液和粪便)等进行检查从而用作癌症诊断或治疗的标志物的那些物质”。
然而，由于除癌症之外的其它疾病也能引起人体产生少量的多种肿瘤标志物，因此，在慢性炎症等疾病中，这些肿瘤标志物经常表现出假阳性结果。例如，据信，由于诸如胃、大肠、胰腺、和肺等之类的多个器官的细胞可产生癌胚抗原(CEA)，所以其可引起约20％的假阳性结果。此外，由于多种肿瘤的合适的肿瘤标志物还没有被发现，所以，就目前的情况而言，还不存在可针对所有肿瘤的肿瘤标志物。
另一方面，已知的是，在施用δ-氨基乙酰丙酸(ALA)或其衍生物后，因诱导产生的原卟啉IX会在肿瘤内积聚，从而使其在术中诊断和治疗中发挥作用(专利文献1和2)。
专利文献1JP-A-11-12197专利文献2JP-T-11-501914发明内容本发明欲解决的问题
然而，根据上述方法，必须制备δ-氨基乙酰丙酸的同位素标记物(参见专利文献1)，并且必须将收集到的体液(体液内含有细胞)与ALA酯混合，并将该混合物暴露于光下(参见专利文献2)。
此外，人们已经试图分析癌症患者血液样品中的卟啉，但是由于卟啉的浓度低，所以上述分析尚不能诊断肿瘤。
因此，本发明的目的是提供一种这样的肿瘤诊断剂，其可通过分析从体内或体外收集到的样品(以施用ALA后的血液和尿液为代表)中的卟啉类化合物来针对所有肿瘤施行早期检测，治疗效果监测和预后诊断。
解决问题的方法考虑到这种现状，本发明人对能够针对所有肿瘤的新型诊断剂进行了大量的研究，结果发现，在施用δ-氨基乙酰丙酸、其衍生物、或它们的盐之后测定从体内或体外收集到的样品中的卟啉类化合物，可高度灵敏地检测肿瘤，从而完成本发明。
换言之，本发明涉及以下(1)到(11)项(1)一种选自由式(I)代表的δ-氨基乙酰丙酸、其衍生物、或它们的盐的化合物，其可用作肿瘤诊断剂，该肿瘤诊断剂用于在施用该肿瘤诊断剂之后通过测定从体内或体外收集到的样品中的卟啉类化合物来进行诊断，式(I)为R2R1NCH2COCH2CH2COR3(I)，其中，R1和R2各自独立代表氢、烷基、酰基、烷氧基羰基、芳基或芳烷基；R3代表羟基、烷氧基、酰氧基、烷氧基羰基氧基、芳氧基、芳烷氧基或氨基。
(2)由式(I)代表的δ-氨基乙酰丙酸、其衍生物、或它们的盐作为肿瘤诊断剂的用途，其中该肿瘤诊断剂用于在施用该肿瘤诊断剂之后通过测定从体内或体外收集到的样品中的卟啉类化合物来进行诊断，式(I)为R2R1NCH2COCH2CH2COR3(I)，其中，R1和R2各自独立代表氢、烷基、酰基、烷氧基羰基、芳基或芳烷基；R3代表羟基、烷氧基、酰氧基、烷氧基羰基氧基、芳氧基、芳烷氧基或氨基。
(3)由式(I)代表的δ-氨基乙酰丙酸、其衍生物、或它们的盐在制造肿瘤诊断剂中的用途，其中该肿瘤诊断剂用于在施用该肿瘤诊断剂之后通过测定从体内或体外收集到的样品中的卟啉类化合物来进行诊断，式(I)R2R1NCH2COCH2CH2COR3(I)，其中，R1和R2各自独立代表氢、烷基、酰基、烷氧基羰基、芳基或芳烷基；R3代表羟基、烷氧基、酰氧基、烷氧基羰基氧基、芳氧基、芳烷氧基或氨基。
(4)根据上述(1)到(3)中任意一项所述的化合物或用途，其中所述肿瘤的组织为脑、鼻道、鼻腔、气管、支气管、口腔、咽、食道、胃、乳房、结肠直肠、肺、卵巢、中枢神经系统、肝脏、膀胱、尿道、输尿管、胰腺、颈管、腹腔、肛管或子宫颈。
(5)根据上述(1)到(4)中任意一项所述的化合物或用途，其中，所述卟啉类化合物为原卟啉IX、尿卟啉I、尿卟啉III、粪卟啉I、粪卟啉III、七羧基卟啉I、七羧基卟啉III、六羧基卟啉I、六羧基卟啉III、五羧基卟啉I、五羧基卟啉III、异粪卟啉、副卟啉(ハルデロポルフイリン)、异副卟啉(イソハルデロポルフイリン)、中卟啉IX、次卟啉IX或8(13)-氢基-3，7，12，17-四甲基-13(8)-乙烯基-21H，23H-卟吩-2，18-二丙酸(ペンプトポルフイリン)。
(6)根据上述(1)到(5)中任意一项所述的化合物或用途，其中，以每次0.001毫克/每千克体重到10克/每千克体重的剂量施用所述的δ-氨基乙酰丙酸、其衍生物、或它们的盐。
(7)根据上述(1)到(6)中任意一项所述的化合物或用途，其可用于经口施用、腹膜内施用、静脉施用、肌内施用、患病部位局部应用、经皮吸收或直肠施用。
(8)根据上述(1)到(7)中任意一项所述的化合物或用途，其中，所述的从体内或体外收集到的样品为血液、体液、组织、尿液、粪便、唾液、汗液、脑脊液、精液或泪液。
(9)根据上述(1)到(8)中任意一项所述的化合物或用途，其中，在施用所述的δ-氨基乙酰丙酸、其衍生物、或它们的盐的0.1小时到10小时之后从体内或体外收集所述样品。
(10)根据上述(1)到(9)中任意一项所述的化合物或用途，其中，测量尿卟啉I和尿卟啉III的量，并根据尿卟啉I/尿卟啉III的浓度比来检测肿瘤。
(11)根据上述(1)到(10)中任意一项所述的化合物或用途，其中，使用HPLC(高效液相色谱法)、TLC(薄层色谱法)、荧光检测法或免疫测定法来测量所述卟啉类化合物。
发明效果根据本发明的肿瘤诊断剂，可方便地施行针对肿瘤的早期检测，治疗效果监测和预后诊断，而不限于特定的肿瘤。
图1是示出通过荧光检测法测定的在荷瘤小鼠和正常小鼠中的原卟啉IX和尿卟啉的浓度变化图。
实施本发明的最佳方式传统上，人们没有尝试过这样的方法施用δ-氨基乙酰丙酸、其衍生物、或它们的盐，从体内或体外收集样品，然后测定样品中的卟啉类化合物。本发明的肿瘤诊断剂是一种通过施用δ-氨基乙酰丙酸、其衍生物、或它们的盐，然后测量从体内或体外收集到的样品中的卟啉类化合物来检测肿瘤的诊断剂。
本发明的肿瘤诊断剂的活性成份为δ-氨基乙酰丙酸、其衍生物(如上述式(I)所示)、或它们的盐。
在式(I)中，R1或R2所代表的烷基优选为具有1到24个碳原子的直链或支链烷基、更优选为具有1到18个碳原子的烷基、最优选为具有1到6个碳原子的烷基。具有1到6个碳原子的烷基包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、和仲丁基等。酰基优选为具有1到12个碳原子的直链或支链的烷酰基、烯基羰基或芳酰基、更优选为具有1到6个碳原子的烷酰基。酰基包括甲酰基、乙酰基、丙酰基、和丁酰基等。烷氧基羰基优选为碳原子总数为2到13的烷氧基羰基、更优选为具有2到7个碳原子的烷氧基羰基。烷氧基羰基包括甲氧基羰基、乙氧基羰基、正丙氧基羰基、和异丙氧基羰基等。芳基优选为具有6到16个碳原子的芳基，例如苯基和萘基。芳烷基优选为由具有6到16个碳原子的芳基和上述具有1到6个碳原子的烷基构成的基团，例如苄基。
由R3代表的烷氧基优选为具有1到24个碳原子的直链或支链烷氧基、更优选为具有1到16个碳原子的烷氧基、最优选为具有1到12个碳原子的烷氧基。烷氧基包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、戊氧基、己氧基、辛氧基、癸氧基、和十二烷氧基等。酰氧基优选具有1到12个碳原子的直链或支链的烷酰氧基、更优选具有1到6个碳原子的烷酰氧基。烷酰氧基包括乙酰氧基、丙酰氧基、和丁酰氧基等。烷氧基羰基氧基优选为碳原子总数为2到13的烷氧基羰基氧基、更优选为碳原子总数为2到7的烷氧基羰基氧基。烷氧基羰基氧基包括甲氧基羰基氧基、乙氧基羰基氧基、正丙氧基羰基氧基、和异丙氧基羰基氧基等。芳氧基优选为具有6到16个碳原子的芳氧基，例如苯氧基和萘氧基。芳烷氧基优选为具有上述芳烷基的基团，例如苄氧基。
在式(I)中，R1和R2都优选为氢。R3优选为羟基、烷氧基或芳烷氧基，更优选为羟基或具有1到12个碳原子的烷氧基，最优选为甲氧基或己氧基。
δ-氨基乙酰丙酸衍生物包括δ-氨基乙酰丙酸甲酯、δ-氨基乙酰丙酸乙酯、δ-氨基乙酰丙酸丙酯、δ-氨基乙酰丙酸丁酯、δ-氨基乙酰丙酸戊酯、和δ-氨基乙酰丙酸己酯等，并且特别优选为δ-氨基乙酰丙酸甲酯或δ-氨基乙酰丙酸己酯。
关于δ-氨基乙酰丙酸或其衍生物的盐，优选为可药用的无机酸或有机酸的酸加成盐，但是没有特别限定。无机酸加成盐包括盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、硝酸盐、和磷酸盐等，而有机酸加成盐包括乙酸盐、乳酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、延胡索酸盐、和抗坏血酸盐等，并且优选为δ-氨基乙酰丙酸盐酸盐或δ-氨基乙酰丙酸磷酸盐。
可通过采用化学合成法、微生物法或酶法的方法中的任何一种方法来制备这些盐。其实例包括在专利文献JP-A-4-9360、JP-T-11-501914、日本专利申请No.2004-99670、2004-99671和2004-99672中描述的那些方法。
可采用将δ-氨基乙酰丙酸、其衍生物、或它们的盐与药用载体混合这种常规方法来本制备发明的肿瘤诊断剂。其剂型包括经口施用制剂，例如颗粒剂、细粒剂和片剂；注射剂，例如溶液剂和用时溶解的粉末剂；经皮制剂，例如膏剂、溶液剂、霜剂和凝胶剂；以及栓剂等。
可应用本发明的肿瘤诊断剂的肿瘤为恶性肿瘤或非恶性肿瘤。恶性肿瘤以浸润方式增殖，并且表现出诸如转移等恶性症状。在恶性肿瘤中，来源于上皮细胞的肿瘤占大部分，并且肉瘤、淋巴瘤和白血病也被包括在其中。非恶性肿瘤表现为除恶性肿瘤之外的其它疾病，例如良性疾病，并且并不一定意味着它们的治疗是容易的。
虽然对肿瘤组织没有特别限定，但是其包括脑、鼻道、鼻腔、气管、支气管、口腔、咽、食道、胃、乳房、结肠直肠、肺、卵巢、中枢神经系统、肝脏、膀胱、尿道、输尿管、胰腺、颈管、腹腔、肛管和子宫颈等。
本发明肿瘤诊断剂的施用方法包括经口施用、静脉施用、肌内施用、患病部位局部应用、腹膜内施用、经皮吸收和直肠施用等，并且优选腹膜内施用、经口施用、患病部位局部应用或静脉施用。
本发明肿瘤诊断剂的剂量随施用方法、施用途径、症状、体重和肿瘤类型的不同而不同，但是就经口施用而言，剂量为每次0.001毫克/每千克体重到10克/每千克体重、优选为0.1毫克/每千克体重到1000毫克/每千克体重、更优选为1毫克/每千克体重到100毫克/每千克体重。
关于在施用本发明的肿瘤诊断剂之后从体内或体外收集到的样品，其实例包括血液、体液、组织、尿液、粪便、唾液、汗液、脑脊液、精液、泪液等，但是并不受限定于这些。为了便于收集样品，以血液、尿液或粪便作为样品是优选的。从施用后直到从体内或体外收集到样品的时间段可随施用方法和肿瘤组织的不同而不同，但是该时间段为约0.1小时到10小时(其间，卟啉类化合物存在的量达到最大值)、特别是0.5小时到5小时。就此而论，需要在进行随后的测量前对收集到的样品进行常规处理。
虽然对待测卟啉类化合物的种类没有特别限定，但是其实例包括原卟啉IX、尿卟啉I、尿卟啉III、七羧基卟啉I、七羧基卟啉III、六羧基卟啉I、六羧基卟啉III、五羧基卟啉I、五羧基卟啉III、粪卟啉I、粪卟啉III、异粪卟啉、副卟啉、异副卟啉、中卟啉IX、次卟啉IX、和8(13)-氢基-3，7，12，17-四甲基-13(8)-乙烯基-21H，23H-卟吩-2，18-二丙酸等，并且优选原卟啉IX、尿卟啉I、尿卟啉III、粪卟啉I或粪卟啉III。
可通过诸如HPLC(高效液相色谱法)、TLC(薄层色谱法)或采用荧光检测器的方法之类的检测方法，或诸如免疫测定法之类的生物检测法来测量上述卟啉类化合物。对检测方法没有特别限定，只要能有效鉴定卟啉类化合物即可，并可根据目的和方便程度任意地选择检测方法。在这些检测方法中，HPLC和TLC适用于详细诊断，这是因为这些方法能够将各种卟啉类化合物单独地鉴定出来。就HPLC而言，两种或多种卟啉类化合物所形成的峰可能会由于色谱柱的情况和液体流动条件的限制而发生重叠，但是这种情况对于只判断肿瘤存在与否仍是可行的。虽然在合适的波长下，荧光检测器可以鉴定特定的卟啉，但是由于各卟啉类化合物的荧光发生波长彼此接近，使得这种方法不适于精确测定单独的卟啉。如下文实施例所示，荧光检测器适于鉴定卟啉类化合物。免疫测定法可以测量特定的卟啉，并且还可以测量卟啉类化合物的总量。
如下文实施例所示，与正常小鼠相比，在由植入荷瘤细胞的小鼠(荷瘤小鼠)得到的样品中，其卟啉浓度较高，从而表明本发明的肿瘤诊断剂可明显区分肿瘤组织与正常组织。此外，就特定种类的卟啉(例如尿卟啉I和尿卟啉III)的存在比值(如尿卟啉I/尿卟啉III)而言，由于荷瘤小鼠和正常小鼠之间存在明显差异，所以，基于这些差异可以发现，使用本发明的肿瘤诊断剂、以特定种类卟啉的存在比值为指标可检测肿瘤。
使用本发明的肿瘤诊断剂的诊断原理是基于在施用δ-氨基乙酰丙酸、其衍生物、或它们的盐之后，以原卟啉IX为代表的卟啉作为代谢物会在肿瘤内积聚。针对产生这种现象的原因，多个机构正在进行研究，并且据信，将原卟啉IX代谢为血红素的亚铁螯合酶在肿瘤内活性可能较低，但是迄今尚不明确。
实施例以下参照实施例来进一步详细说明本发明，然而，本发明不受限于下列实施例。
实施例1以1×106个细胞的剂量将小鼠荷瘤细胞(MH 134细胞肝腹水癌细胞)腹腔植入小鼠(C3H/He系，5周龄，雌性)体内，并将该小鼠饲养0到14天。在腹腔植入荷瘤细胞后10天时，向该腹腔植入荷瘤细胞的小鼠经口施用50微升浓度为0.12M的δ-氨基乙酰丙酸盐酸盐、δ-氨基乙酰丙酸甲酯盐酸盐、δ-氨基乙酰丙酸己酯盐酸盐或δ-氨基乙酰丙酸磷酸盐。并在其后的0小时、0.25小时、0.5小时、2小时、3小时、4小时、或6小时的时候，分别从经口施用上述化合物的小鼠收集10微升到20微升的血液样品。将如此收集到的血液在2000×g的条件下离心5分钟，向5微升上清液(血浆)中加入300微升乙酸乙酯/醋酸(2/1，体积比)，然后进行混合，向该混合物中进一步加入300微升浓度为0.6M的NaOH溶液，然后进行混合，并收集NaOH层。向剩余的有机层中加入300微升浓度为0.5M的盐酸溶液，并收集盐酸水溶液层。测定氢氧化钠层和盐酸水溶液层的荧光强度(盐酸层激发波长400nm，荧光波长600nm；氢氧化钠层激发波长400nm，荧光波长619nm)，并根据标准溶液计算各样品的浓度。此外，将δ-氨基乙酰丙酸盐酸盐、δ-氨基乙酰丙酸甲酯盐酸盐、δ-氨基乙酰丙酸己酯盐酸盐或δ-氨基乙酰丙酸磷酸盐也经口施用(0.12M，50μl)给正常小鼠作为对照，并进行相同处理。所得结果示于图1-1到1-8。
从图1-1到1-8可明显看出，在施用δ-氨基乙酰丙酸盐酸盐、δ-氨基乙酰丙酸甲酯盐酸盐、δ-氨基乙酰丙酸己酯盐酸盐或δ-氨基乙酰丙酸磷酸盐之后2个小时的时候，在腹腔植入荷瘤细胞的小鼠中，原卟啉IX和尿卟啉的浓度达到最大值。与此形成对比的是，在上述2个小时的时候，在正常小鼠中几乎检测不到尿卟啉。因此发现，本发明的肿瘤诊断剂是一种能够明显区分肿瘤组织和正常组织的诊断剂。
实施例2以1×106个细胞的剂量将小鼠荷瘤细胞(MH 134细胞)腹腔植入小鼠(C3H/He系，5周龄，雌性)体内，并将该小鼠饲养0到14天。在腹腔植入荷瘤细胞之后10天时，将50微升浓度为0.12M的δ-氨基乙酰丙酸盐酸盐经口施用给所述小鼠，并在其后2个小时的时候，收集10微升到20微升的血液样品。然后，将收集到的各血液样品在2000×g的条件下离心5分钟，向5微升上清液(血浆)中加入50微升乙酸乙酯/醋酸(2/1，体积比)，然后进行混合，向该混合物中进一步加入50微升浓度为0.6M的NaOH溶液，然后进行混合，并收集NaOH层。采用HPLC测量样品(分析条件如下使用激发波长为406nm、荧光波长为610nm的荧光检测器；用由12.5％乙腈、1M醋酸铵和0.27mM的EDTA组成的溶液(pH5.15，使用醋酸调节)作为洗脱液；使用由Shiseido公司制造的ODS-AG型CAPCELLPAK(4.6mmφ×250mm，粒径为5微米)作为色谱柱；在流速为1.0mL/分钟和25℃的条件下进行测量)，并根据标准溶液的峰面积计算各样品的浓度。所得结果示于表1中。
表1使用HPLC测定血液中的尿卟啉I和尿卟啉III
ND未检出从表1可以明显看出，在施用δ-氨基乙酰丙酸盐酸盐之前的正常小鼠中和腹腔植入荷瘤细胞的小鼠中、以及在施用δ-氨基乙酰丙酸盐酸盐之后的正常小鼠中均未检出尿卟啉I和尿卟啉III，但是在腹腔植入荷瘤细胞以后再施用δ-氨基乙酰丙酸盐酸盐的小鼠中，却检出尿卟啉I和尿卟啉III，其中检测出的尿卟啉III的量多，其中尿卟啉I/尿卟啉III为0.53。根据这个结果发现本发明的诊断剂是一种可根据尿卟啉I和尿卟啉III的量及它们的比值来明显区分肿瘤组织和正常组织的诊断剂。
实施例3以1×106个细胞的剂量将小鼠荷瘤细胞(MH 134细胞)腹腔植入小鼠(C3H/He系，5周龄，雌性)体内，并将该小鼠饲养0到14天。在腹腔植入荷瘤细胞后10天时，将50微升浓度为0.12M的δ-氨基乙酰丙酸盐酸盐经口施用给所述小鼠，并在其后2个小时的时候，收集尿样，并且在施用化合物之前的尿样也已被收集。采用HPLC测量如此收集的样品(分析条件如下使用激发波长为406nm、荧光波长为619nm的荧光检测器；用由12.5％乙腈、1M醋酸铵和0.27mM的EDTA组成的溶液(pH5.15，使用醋酸调节)作为洗脱液；使用由Shiseido公司制造的ODS-AG型CAPCELLPAK(4.6mmφ×250mm，粒径为5微米)作为色谱柱；在流速为1.0mL/分钟和25℃的条件下进行测量)测量如此收集的样品，并根据标准溶液计算各样品的浓度。此外，还要将50微升浓度为0.12M的δ-氨基乙酰丙酸盐酸盐施用给正常小鼠以便作为对照，然后进行相同的处理。所得结果示于表2中。
表2使用HPLC测定尿中的尿卟啉I和尿卟啉III
ND未检出从表2可以明显看出，在施用δ-氨基乙酰丙酸盐酸盐之前的正常小鼠和腹腔植入荷瘤细胞的小鼠中均未检测出尿卟啉I和尿卟啉III，但是，在施用δ-氨基乙酰丙酸盐酸盐之后的正常小鼠和腹腔植入荷瘤细胞的小鼠中，则可检测出尿卟啉I和尿卟啉III，并且，在腹腔植入荷瘤细胞的小鼠中检测出的尿卟啉I和尿卟啉III的量均高出正常小鼠中捡测出的尿卟啉I和尿卟啉III的量的约13倍。此外，虽然正常小鼠的尿卟啉I与尿卟啉III的比值为0.94，但是不同的是，腹腔植入荷瘤细胞的小鼠的尿卟啉I与尿卟啉III的比值却为0.54。根据该结果发现，本发明的诊断剂是一种根据尿卟啉I和尿卟啉III的量以及它们的比值来明显区分肿瘤组织和正常组织的诊断剂。
实施例4以1×106个细胞的剂量将小鼠荷瘤细胞(MH 134细胞)腹腔植入小鼠(C3H/He系，5周龄，雌性)体内，并将该小鼠饲养0到14天。在腹腔植入荷瘤细胞后10天时，将50微升浓度为0.12M的δ-氨基乙酰丙酸盐酸盐经口施用给所述小鼠，并在其后2个小时的时候，收集小鼠粪便。向如此收集到的湿重为10毫克的粪便样品中，加入100微升乙酸乙酯和醋酸的混合液(乙酸乙酯/醋酸为4/1，体积比)，然后使混合物均化并用滤纸过滤，采用HPLC测量10微升的滤液(分析条件如下使用激发波长为406nm、荧光波长为619nm的荧光检测器；用溶液A(80％乙腈/7％乙酸/50mM乙酸铵的混合液)和溶液B(10％乙腈/4％乙酸/50mM乙酸铵的混合液)作为洗脱液，从A/B(20/80)到A/B(90/10)进行线性梯度洗脱30分钟，然后用溶液A保留20分钟；使用由Shiseido公司制造的ODS-AG型CAPCELLPAK(4.6mmφ×250mm，粒径为5微米)作为色谱柱；在流速为1.0mL/分钟和25℃的条件下进行测量)，并根据标准溶液的峰面积计算各样品的浓度。此外，还要将50微升浓度为0.12M的δ-氨基乙酰丙酸盐酸盐施用给正常小鼠以便作为对照，然后进行相同的处理。所得结果示于表3中。
表3使用HPLC测定粪便中的尿卟啉和粪卟啉
ND未检出从表3可以明显看出，在施用δ-氨基乙酰丙酸盐酸盐之前的正常小鼠和腹腔植入荷瘤细胞的小鼠中均未检测出尿卟啉和粪卟啉，并且在施用δ-氨基乙酰丙酸盐酸盐之后的正常小鼠中也没有检测出尿卟啉和粪卟啉，但是在施用δ-氨基乙酰丙酸盐酸盐之后的腹腔植入荷瘤细胞的小鼠中却检测出1.75pmol的尿卟啉和0.21pmol的粪卟啉，从而表明本发明的诊断剂是一种能够明显区分肿瘤组织和正常组织的诊断剂。
实施例5将通过以1×106个细胞的剂量将人肝癌细胞(HepG2细胞)皮下植入裸鼠(BALB/cA-nu，5周龄，雄性)体内的方法得到的小鼠、和通过以1×106个细胞的剂量将人宫颈癌细胞(HeLa细胞)皮下植入裸鼠(BALB/cA-nu，5周龄，雄性)体内的方法得到的小鼠饲养0到10天。在植入人肝癌细胞和人宫颈癌细胞之后10天时，将50微升浓度为0.12M的δ-氨基乙酰丙酸磷酸盐经口施用给每只所述的小鼠，并在其后4个小时的时候，收集小鼠尿液。
采用HPLC测量如此收集的尿液(分析条件如下使用激发波长为406nm、荧光波长为619nm的荧光检测器；用溶液A(80％乙腈/7％乙酸/50mM乙酸铵的混合液)和溶液B(10％乙腈/4％乙酸/50mM乙酸铵的混合液)作为洗脱液，从A/B(20/80)到A/B(90/10)进行线性梯度洗脱13分钟，然后用溶液A洗脱10分钟；使用由Shiseido公司制造的ODS-AG型CAPCELLPAK(4.6mmφ×250mm，粒径为5微米)作为色谱柱；在流速为1.0mL/分钟和25℃的条件下进行测量)，并根据标准溶液计算各样品的浓度。此外，通过测量尿液中肌酸酐(CRE)的量，并计算卟啉/CRE的量从而校正尿液浓度。此外，还将50微升浓度为0.12M的δ-氨基乙酰丙酸磷酸盐施用给正常小鼠以便作为对照，并进行相同的处理。所得结果示于表4中。
表4使用HPLC测定尿液中的尿卟啉和粪卟啉
从表4可以明显看出，在施用δ-氨基乙酰丙酸磷酸盐之后，在植入人肝癌细胞的小鼠尿液中含有的尿卟啉的量是正常小鼠尿液中含有的尿卟啉的量的约15倍，在植入人肝癌细胞的小鼠中含有的粪卟啉的量是正常小鼠尿液中含有的粪卟啉的量的约1.5倍。此外，还可看出，在施用δ-氨基乙酰丙酸磷酸盐之后，在植入人宫颈癌细胞的小鼠的尿液中含有的尿卟啉的量是正常小鼠尿液中含有的尿卟啉的量的约94倍，在植入人宫颈癌细胞的小鼠的尿液中含有的粪卟啉的量是正常小鼠尿液中含有的粪卟啉的量的约2.7倍。
根据以上结果，可以发现，即使在使用人癌细胞的情况下，本发明的肿瘤诊断剂也是一种能够明显区分正常组织和异常组织的诊断剂。
虽然通过参考本发明的具体实施方案详细说明了本发明，但是在不脱离本发明实质和范围的情况下对本发明进行各种改变和修改对于本领域内技术人员来说是显而易见的。
本专利申请基于2004年9月29日提交的日本专利申请No.2004-284078和2005年8月11日提交的日本专利申请No.2005-232996，这些申请的全部内容已以引用的方式并入本文。本文引用的所有参考文献都全部并入本文。
工业实用性根据本发明的肿瘤诊断剂，可方便地施行早期检测、治疗效果监测和预后诊断，而不受限于特定的肿瘤。
权利要求
1.一种选自由式(I)代表的δ-氨基乙酰丙酸、其衍生物、或它们的盐的化合物，其用作肿瘤诊断剂，该肿瘤诊断剂用于在施用该肿瘤诊断剂之后通过测定从体内或体外收集到的样品中的卟啉类化合物来进行诊断，式(I)为R2R1NCH2COCH2CH2COR3(I)，其中，R1和R2各自独立代表氢、烷基、酰基、烷氧基羰基、芳基或芳烷基；R3代表羟基、烷氧基、酰氧基、烷氧基羰基氧基、芳氧基、芳烷氧基或氨基。
2.由式(I)代表的δ-氨基乙酰丙酸、其衍生物、或它们的盐作为肿瘤诊断剂的用途，其中该肿瘤诊断剂用于在施用该肿瘤诊断剂之后通过测定从体内或体外收集到的样品中的卟啉类化合物来进行诊断，式(I)为R2R1NCH2COCH2CH2COR3(I)，其中，R1和R2各自独立代表氢、烷基、酰基、烷氧基羰基、芳基或芳烷基；R3代表羟基、烷氧基、酰氧基、烷氧基羰基氧基、芳氧基、芳烷氧基或氨基。
3.由式(I)代表的δ-氨基乙酰丙酸、其衍生物、或它们的盐在制造肿瘤诊断剂中的用途，其中该肿瘤诊断剂用于在施用该肿瘤诊断剂之后通过测定从体内或体外收集到的样品中的卟啉类化合物来进行诊断，式(I)R2R1NCH2COCH2CH2COR3(I)，其中，R1和R2各自独立代表氢、烷基、酰基、烷氧基羰基、芳基或芳烷基；R3代表羟基、烷氧基、酰氧基、烷氧基羰基氧基、芳氧基、芳烷氧基或氨基。
4.根据权利要求1到3中任意一项所述的化合物或用途，其中所述肿瘤的组织为脑、鼻道、鼻腔、气管、支气管、口腔、咽、食道、胃、乳房、结肠直肠、肺、卵巢、中枢神经系统、肝脏、膀胱、尿道、输尿管、胰腺、颈管、腹腔、肛管或子宫颈。
5.根据权利要求1到4中任意一项所述的化合物或用途，其中，所述卟啉类化合物为原卟啉IX、尿卟啉I、尿卟啉III、粪卟啉I、粪卟啉III、七羧基卟啉I、七羧基卟啉III、六羧基卟啉I、六羧基卟啉III、五羧基卟啉I、五羧基卟啉III、异粪卟啉、副卟啉、异副卟啉、中卟啉IX、次卟啉IX或8(13)-氢基-3，7，12，17-四甲基-13(8)-乙烯基-21H，23H-卟吩-2，18-二丙酸。
6.根据权利要求1到5中任意一项所述的化合物或用途，其中，以每次0.001毫克/每千克体重到10克/每千克体重的剂量施用所述的δ-氨基乙酰丙酸、其衍生物、或它们的盐。
7.根据权利要求1到6中任意一项所述的化合物或用途，其可用于经口施用、腹膜内施用、静脉施用、肌内施用、患病部位局部应用、经皮吸收或直肠施用。
8.根据权利要求1到7中任意一项所述的化合物或用途，其中，所述的从体内或体外收集到的样品为血液、体液、组织、尿液、粪便、唾液、汗液、脑脊液、精液或泪液。
9.根据权利要求1到8中任意一项所述的化合物或用途，其中，在施用所述的δ-氨基乙酰丙酸、其衍生物、或它们的盐的0.1小时到10小时之后从体内或体外收集所述样品。
10.根据权利要求1到9中任意一项所述的化合物或用途，其中，测量尿卟啉I和尿卟啉III的量，并根据尿卟啉I/尿卟啉III的浓度比来检测肿瘤。
11.根据权利要求1到10中任意一项所述的化合物或用途，其中，使用HPLC(高效液相色谱法)、TLC(薄层色谱法)、荧光检测法或免疫测定法来测量所述卟啉类化合物。
全文摘要
本发明所提供的肿瘤诊断剂是一种可针对所有肿瘤施行早期发现、治疗效果监测和预后诊断的肿瘤诊断剂。本发明的肿瘤诊断剂是一种含有由式(I)代表的δ－氨基乙酰丙酸、其衍生物、或它们的盐的肿瘤诊断剂，式(I)为R
文档编号G01N30/88GK101031324SQ20058003298
公开日2007年9月5日 申请日期2005年9月22日 优先权日2004年9月29日
发明者大仓一郎, 蒲池利章, 小仓俊一郎, 石塚昌宏, 田中彻 申请人:克斯莫石油株式会社