专利名称：一种双功能肿瘤诊断试剂及方法
技术领域：
本发明属于纳米技术、生物仿生、免疫学和生物医药的交叉领域。特别地，本发明提供一种集癌灶特异识别与显色双功能于一体的肿瘤诊断试剂，以及所述肿瘤诊断试剂用于癌组织及癌细胞诊断的方法。
背景技术：
恶性肿瘤已经成为日益常见且严重威胁人类生命和生活质量的主要疾病之一。病理切片检查最准确、可靠，是国内外公认的肿瘤诊断的“金标准”(Shi，et al.，(2008)Am.J. Clin. Pathol. , 129 :358-366 ；Taylor et al. (2006)Biotech Histochem. ,81 :3-12.；Larsson, et al. , (1988)Immunocytochemistry Theory and Practice. Boca Raton, FL:CRC Press41-73) 0目前，病理切片的主要染色方法有苏木精-伊红染色(HE)、免疫组化、免疫荧光。染色主要通过苏木精使细胞核内的染色质着紫蓝色，通用伊红使细胞质和细胞 外基质中的成分着红色，以此提供细胞形态学的信息，病理医生根据这些细胞形态学的改变，粗略的鉴定组织细胞的癌变，该染色方法操作方便、快速，但是仅能够提供组织形态学的变化，信息量少，对于较为复杂、多型性的肿瘤，就不能作出正确的判断。免疫组化或免疫荧光利用一抗与被检测组织抗原结合，荧光信号分子或酶标记的二抗、三抗与一抗结合，然后通过荧光信号或酶底物反应显色，提供所要检测抗原的定位和半定量信息，进而鉴定组织细胞的癌变、坏死、炎性细胞浸润等病理改变。免疫组化或免疫荧光能够提供某特定抗原的分布、含量及细胞形态学的详细信息，对病理学的深入研究十分有意义，但是免疫染色需要一抗、二抗甚至三抗的多步孵育，PBS反复冲洗，及酶或是荧光分子的标记，步骤复杂，操作时间长。因此，有必要研究简单、快速且能够提供丰富信息量的癌组织、癌细胞检测试剂和方法，以提高临床病理诊断效率，为病人的治疗赢得时间。天然的人铁蛋白是一种球状储铁蛋白，由24个重链或轻链亚基任意比例复合而成，重链和轻链亚基具有高度同源性，分子量分别为21kDa和19kDa(Theil，(1987)Annu.Rev. Biochem. ,56 :289-315)。人体不同器官不同组织中铁蛋白的亚基组成不同，心脏中以重链亚基为主，而肝脏则以轻链亚基较多，两种亚基也会因环境需求作改变，为生物体提供弹性的铁离子供应。然而只有重链亚基才能够利用氧气将二价铁离子转为三价铁离子，使铁离子能顺利进入铁蛋白，所以增加重链亚基，能增加该细胞利用铁的能力；而增加轻链亚基，则能够增加铁储存的效率。铁蛋白球壳之中，铁离子和磷酸盐、氢氧根离子一同形成结晶，与矿物中的水合氧化铁具有类似的化学性质(Harrison, et al. , (1996)Biochim.Biophys. Acta 1275:161-203 ;Levi, et al. (1988) J. Biol.Chem. 263 :18086-18092 ；Ford,et al. (1984)Philos Trans. R. Soc. Lond B Biol. Sci. 304 :551-565)。除了在细胞内储存铁，重链亚基铁蛋白还能够特异地结合激活的淋巴细胞、白血病细胞、宫颈癌细胞、淋巴瘤细胞等(Fargion, et al. (1988)Blood 71 :753-757 ；Moss,et al. (1992) J. Lab Clin. Med. 119 273 ；Bretscher, et al. (1983)EMBO J. 2 :599-603 ;Takami, et al. (1986)Biochim. Biophys Acta 884:31-38 ；Fargion, et al. (1991)Blood,78 1056-1061) o Li 等报道细胞表面的转铁蛋白受体 I (transferrin receptor I, TfRl)作为重链亚基铁蛋白的共受体，调节铁蛋白与细胞的相互作用(Li，et al.，(2010)Proc.Natl. Acad. Sci. U S A 107:3505-3510)。转铁蛋白受体是细胞获得铁元素的关键分子，是增殖细胞、肿瘤细胞快速生长所必需的，许多肿瘤如肝细胞癌、乳腺癌、胰腺癌、胃癌、结肠癌等均高表达TfRl，因此TfRl成为肿瘤识别和治疗的特异靶点(Larrick，et al. (1979)J.Supramol. Struct. 11 :579-586 ；Daniels, et al. (2006)Clin. Immunol. ,121 144-158 ；Ryschich,et al. (2004) Eur. J. Caner 40 :1418-1422.)。利用 TfRl 是重链亚基铁蛋白的共受体，重链亚基铁蛋白可用于肿瘤特异识别。具有不同尺寸大小的纳米空腔结构的天然蛋白壳主要包括去铁蛋白、热休克蛋白(HSP，直径12nm)、DNA结合蛋白(DPs，直径9nm)、喋啶合酶(LS，直径15nm)和病毒蛋白壳，如豇豆退绿斑驳病毒(CCMV，直径28nm)和豇豆花叶病毒蛋白(CMV，直径31nm)，这些纳米空腔提供了一个纳米颗粒生长，并能有效阻止纳米颗粒在合成过程中聚集的良好空间结构，利用这一特殊结构可以在其空腔内部合成各种尺度的无机纳米颗粒，实现纳米材料在大小、形状、晶体结构上的可控合成(Turyanska L.，et al. (2009) Small, 5 :1738-1741 ；Meldrum FC.，et al. (2009)Science, 257 :522-523 ；Galvez N.，et al. (2006)J. Mater. Chem. ,16 :2757-2761 ；Hennequin B. ,et al. (2008)Adv. Mater. ,20 :3592-3593 ；Yamashita
I.，et al. (2004) Chem. Lett.，33 :1158-1159)。此外，这些不同结构的蛋白壳容易化学偶联或是基因融合上靶向分子和信号分子，实现癌症的靶向识别和检测，比如去铁蛋白通过基因融合RGD能够实现癌细胞靶向识别(Uchida M.，et al. (2006) J. Am. Chem. Soc.，128 16626-16633)，通过化学标记信号分子Cy5. 5或纳米空腔装载同位素64Cu、钆壳实现肿瘤活体成像(Lin X.，et al. (2011) Nano Lett. ,11 :814-819 ；Geninatti CS.，et al. (2006)Cancer Res. ,66 :9196-201.)。我们课题组于2007年首次发现氧化铁纳米颗粒具有类似过氧化物酶的催化活性，即在过氧化氢存在下，氧化铁纳米颗粒能够与DAB，TMB等辣根过氧化物酶的底物反应，生成与过氧化物酶相同的反应产物，从而产生与过氧化物酶相类似的催化作用。基于这一发现我们提出了氧化铁纳米颗粒模拟酶的概念(Gao L, et al. , (2007) Nature Nanotech.,2 :577-583 ;中国专利 200610057413. 9)。
发明内容
本发明利用纳米材料的过氧化物酶活性，结合肿瘤识别蛋白，提供了一种新型肿瘤诊断试剂及方法。本发明所提供的肿瘤诊断试剂由蛋白壳及纳米颗粒核组成，蛋白壳能够特异识别癌组织及细胞，纳米颗粒核具有过氧化物酶催化活性，能够同辣根过氧化酶的底物反应显色。本发明所提供的肿瘤诊断试剂能够实现组织特异识别、显色一步完成，和传统免疫方法相比，无需一抗、二抗、三抗的多步孵育，抗体无需酶或是信号分子标记，操作简单、方便、快速。因此，本发明一方面提供双功能肿瘤诊断试剂，其特征在于它是由特异识别癌组织和/或癌细胞的蛋白壳及具有过氧化物酶催化活性的无机纳米核组成。本发明的特异识别癌组织和/或癌细胞的蛋白壳可从本领域中公开的众多特异识别癌组织和/或癌细胞的蛋白中选择。在一些实施方案中，本发明所述蛋白壳是基因重组的或是天然的去铁蛋白。在一些实施方案中，去铁蛋白可以由12个或是24个重链亚基和轻链亚基任意比例自组装而成。本发明中，天然去铁蛋白可以来源于真核生物、原核生物，优选地来源于哺乳动物。在一些实施方案中，本发明的蛋白壳是基因重组的全重链亚基铁蛋白。在一些实施方案中，本发明所述蛋白壳还是热休克蛋白(HSP，直径12nm)、DNA结合蛋白(DPs，直径9nm)、喋啶合酶(LS，直径15nm)或病毒蛋白壳，病毒蛋白壳包括豇豆退绿斑驳病毒(CCMV，直径28nm)和豇豆花叶病毒蛋白(CMV，直径31nm)，在一些实施方案中，本发明所述蛋白壳化学偶联或是基因融合靶向分子和/或信号分子。在一些所述方案中，本发明所述靶向分子包括多肽或核酸适配体。在一些所述方案中，本发明所述靶向分子是抗体。在一些实施方案中，本发明所述信号分子包括荧光、放射核素。
在一些实施方案中，本发明所述无机纳米核具有过氧化物酶催化活性，能够与底物反应显色，包括但不限于磁性氧化铁纳米颗粒、硫化铁纳米颗粒、贵金属掺杂氧化铁纳米颗粒、双金属合金纳米颗粒或氧化铺纳米颗粒。在一些实施方案中，本发明所述蛋白壳是基因重组的全重链亚基铁蛋白。在一些实施方案中，本发明所述的无机内核为磁性氧化铁纳米颗粒。本发明另一方面提供肿瘤诊断试剂盒，其包括本发明所述的双功能肿瘤诊断试齐IJ。在一些实施方案中，所述试剂盒还包括过氧化物酶底物。在一些实施方案中，所述过氧化物酶的底物包括DAB、TMB。在一些实施方案中，本发明的试剂盒还包括说明书。本发明又一方面提供本发明所述双功能肿瘤诊断试剂在制备肿瘤诊断试剂中的用途。如上所述，本发明的双功能肿瘤诊断试剂由蛋白壳及纳米颗粒核组成，蛋白壳能够特异识别癌组织及细胞，纳米颗粒核具有过氧化物酶催化活性，能够同辣根过氧化酶的底物反应显色，因此可用于诊断肿瘤。本发明又一方面提供仿生蛋白，其由特异识别癌组织和/或癌细胞的蛋白壳及具有过氧化物酶催化活性的无机纳米核组成。在一些实施方案中，本发明的仿生蛋白是仿生铁蛋白。在一些实施方案中，本发明所述蛋白壳是基因重组的或是天然的去铁蛋白。在一些实施方案中，去铁蛋白可以由12个或是24个重链亚基和轻链亚基任意比例白组装而成。在一些实施方案中，天然去铁蛋白可以来源于真核生物、原核生物，优选地来源于哺乳动物。在一些实施方案中，本发明的蛋白壳是基因重组的全重链亚基铁蛋白。本发明还提供该仿生蛋白在制备肿瘤检测试剂中的用途。如上所述，本发明的仿生蛋白由蛋白壳及纳米颗粒核组成，蛋白壳能够特异识别癌组织及细胞，纳米颗粒核具有过氧化物酶催化活性，能够同辣根过氧化酶的底物反应显色，因此可用于诊断肿瘤。本发明又一方面提供检测个体中肿瘤的方法，其包括从所述个体获得机体组织或细胞样品，将该样品与本发明所述的双功能肿瘤诊断试剂或本发明的仿生蛋白接触，力口入底物直接显色，由此测定所述个体中肿瘤的存在。在一些实施方案中，所述组织为临床病人或是动物模型的穿刺活组织标本、术后病理切片或尸体剖检组织。在一些实施方案中，所述细胞为机体循环系统中脱落细胞、组织溶解细胞或体外培养细胞。本发明所述试剂和方法可应用于临床癌症筛查、早期诊断、癌细胞转移诊断、治疗监控、肿瘤成像、尸体剖检组织病理分析或术后癌症复发评价。本发明所提供的肿瘤诊断试剂能够实现组织特异识别、显色一步完成，和传统免疫方法相比，无需一抗、二抗、三抗的多步孵育，抗体无需酶或是信号分子标记，操作简单、方便、快速。
结合下面的附图对本发明的优选实施方案进行说明。图I :其中，A :仿生铁蛋白的TEM电镜图；B :仿生铁蛋白具有过氧化物酶活性，催化HRP底物TMB产生颜色反应；C :仿生铁蛋白具有过氧化物酶活性，催化HRP底物DAB产生颜色反应。图2 :流式分析结直肠癌细胞HT29和仿生铁蛋白的相互作用。A :细胞表面受体竞争结合；a PBS对照，b Cy5. 5标记的仿生铁蛋白染色，c :过量未标记的仿生铁蛋白封闭细胞表面受体；B :过量抗转铁蛋白受体(Transferrin receptor I, TfRl)的抗体竞争结合仿 生铁蛋白受体位点，a :PBS对照，b Cy5. 5标记的仿生铁蛋白，c :过量抗TfRl的抗体封闭受体位点；C :仿生铁蛋白的细胞结合饱和曲线。图3 :仿生铁蛋白特异识别小鼠移植肿瘤，对肿瘤组织的着色区及染色效果和抗体具有可比性，(标尺为100 u m)。图4 :仿生铁蛋白特异识别人肝癌组织切片，不识别正常肝组织或是肝炎肝、硬化等组织。A-D 4例肝细胞癌；E :正常肝组织F :肝组织慢性炎G :结节性肝硬化H :胆汁性肝硬变I :肝细胞癌J :正常肝组织K :肝细胞癌L :肝组织慢性炎，(标尺为100 u m)。图5 :仿生铁蛋白对多种人癌组织及正常组织的染色。Al :结肠癌II级，A2 :结肠粘膜组织，BI :乳腺非特殊性浸润性导管癌I级，B2 :乳腺纤维腺病，Cl :卵巢浆液性乳头状腺癌III级，C2 :卵巢组织，Dl :前列腺癌4级，D2 :前列腺平滑肌组织，El :肺鳞状细胞癌III级，E2 :肺组织伴淤血，Fl :食道细胞癌III级，F2 :食道慢性炎伴上皮增生，Gl :胸腺癌，G2 :胸腺组织，Hl :宫颈鳞状细胞癌III级，H2 :宫颈慢性炎。图6 :荧光标记的仿生铁蛋白壳对多种人癌组织的特异识别。Al :结肠癌III级，A2 :结肠粘膜慢性炎伴上皮增生，BI :乳腺非特殊性浸润性导管癌I级，B2 :乳腺组织，Cl 卵巢浆液性乳头状腺癌III级，C2 :卵巢组织，Dl :结肠腺癌II级，D2 :结肠粘膜组织，El 前列腺癌4级，E2 :前列腺增生症伴PIN I级，Fl :肺鳞状细胞癌III级，F2 :肺组织，Gl :卵巢浆液性乳头状腺癌III级，G2 :卵巢组织，Hl :肺鳞状细胞癌III级，H2 :肺组织伴淤血，Il :食道鳞状细胞癌III级，12 :食道慢性炎伴上皮增生，Jl :胸腺癌，J2 :胸腺组织，Kl :宫颈鳞状细胞癌II级，K2 :宫颈组织，LI :宫颈鳞状细胞癌III级，L2 :宫颈慢性炎，(标尺为50 u m)。图7 :本发明所用质粒的图谱。
具体实施例方式下列实施例的描述是为了说明目的，而不意于限制本发明的范围。实施例I仿生铁蛋白的制备通过基因重组全重链人铁蛋白壳，利用人体生物矿化原理，将铁离子转载进入蛋白壳，再氧化成氧化铁纳米颗粒，我们仿生合成了包裹有磁性氧化铁纳米内核的全重链人铁蛋白，命名为仿生铁蛋白，用于肿瘤检测。具体操作如下首先构建人全重链亚基铁蛋白基因序列的重组质粒 pET12b_HFn (Santambrogio P. et al. , (2000), Protein Expr.Purif.，19 :212-218)。人骨骼肌总 cDNA 文库购自 Invitrogen 公司(D8090-01, Carlsbad,CA，USA)，利用PCR技术将全重链人铁蛋白基因从cDNA中分离并扩增，设计的两个引物如下正向 PCR 引物:5，-A GTC GCC CAT ATG ACG ACCGCG TCC-3’，酶切位点为 NdeI (如下划线所示)，加有7个酶切位点保护碱基；反向PCR引物5’ -GCC GGA TCC TTA GCT TTC ATTATC AC-3’，酶切位点为BamHI (如下划线所示)，加有3个酶切位点保护碱基。552bp的基因产物为全重链人铁蛋白目的基因产物，序列如下ATGACGACCGCGTCCACCTCGCAGGTGCGCCAGAACTACCACCAGGACTCAGAGGCCGCCATCAACCGCCAGATCAACCTGGAGCTCTACGCCTCCTACGTTTACCTGTCCATGTCTTACTACTTTGACCGCGATGATGTGGCCTTGAAGAACTTTGCCAAATACTTTCTTCACCAATCTCATGAGGAGAGGGAACATGCTGAGAAACTGATGAAGCTGCAGAACCAACGAGGTGGCCGAATCTTCCTTCAGGATATCAAGAAACCAGACTGTGATGACTGGGAGAGCGGGCTGAATGCGATGGAGTGTGCATTACATTTGGAAAAAAATGTGAATCAGTCACTACTGGAACTGCACAAACTGGCCACTGACAAAAATGACCCCCATTTGTGTGACTTCATTGAGACACATTACCTGAATGAGCAGGTGAAAGCCATCAAAGAATTGGGTGACCACGTGACCAACTTGCGCAAGATGGGAGCGCCCGAATCCGGCTTGGCGGAATATCTCTTTGACAAGCACACCCTGGGA GACAGTGATAATGAAAGCTAG。然后将获得的 PCR 目的基因产物和 pET_12b plasmid (Novagen,Inc. ,Madison，WI，USA)用限制性内切酶NdeI和BamHI酶切，目的基因连接到载体pET_12b上，获得包含有人全重链亚基铁蛋白基因序列的重组质粒pET12b-HFn，下图为质粒图谱，其中酶切位点用红色箭头标出，抗生素抗性为氨苄。获得的质粒pET12b_HFn转染到表达菌株BL21DE3 (购自北京全式金生物技术有限公司)中表达重链亚基铁蛋白。将培养的表达目的蛋白菌液超声裂解，离心去除大肠杆菌残片，上清液65°C加热10分钟，沉淀杂蛋白，离心去除，上清液在排阻色谱S印harose 4B柱子上分离纯化，获得重链亚基铁蛋白，电泳鉴定纯度，BCA测定蛋白浓度。仿生铁蛋白生物矿化简述如下将浓度IOOmM的氯化钠溶液除气，同纯化后的铁蛋白壳加入氮气环境下的密闭反应器中，反应温度维持在65°C，pH值稳定在8. 5，按照每个铁蛋白壳1000-5000个Fe的比率加入(NH4)2Fe(SO4)2 6H20，双氧水作为氧化剂和Fe同时加入，加入的量按照H2O2 Fe2+=I 3，双氧水和Fe加完后体系继续反应5分钟，加热200 u L浓度300mM的柠檬酸钠络合剩余的Fe，仿生磁性铁蛋白形成原理见下面公式(I)。收集产品经排阻色谱纯化，去除变性的杂蛋白，得到磁化的全重链亚基的仿生铁蛋白。
3Fe:-. 4. + 2H:0 ——> Fe,O4 4- 6 HT I ^图IA为合成的仿生铁蛋白的TEM电镜表征图，由图可见仿生铁蛋白分散均匀，蛋白壳外直径约约为12nm,内径约为8nm。实施例2仿生铁蛋白的过氧化物酶活性基于我们课题组的报道，磁性氧化铁纳米颗粒具有类似过氧化物酶的催化活性(Gao L, et al. (2007)Nature Nanotech.，2 :577-583.)，由于仿生铁蛋白内包裹有氧化铁的内核，因此应当具有类氧化物酶的活性。我们使用辣根过氧化物酶的底物检测仿生铁蛋白的酶活性，具体方法如下在仿生铁蛋白中加入30% H2O2和TMB或是DAB，观察颜色变化。如图IB所示，当TMB中加入仿生铁蛋白和H2O2后，变成深蓝色，DAB中加入仿生铁蛋白和H2O2后，变为深棕色，和辣根过氧化物酶出现同样的颜色反应，说明仿生铁蛋白具有类过氧化物酶的活性。实施例3仿生铁蛋白结合肿瘤细胞为了研究仿生铁蛋白与人肿瘤细胞的结合，选取常见的人肿瘤细胞与荧光分子标记的仿生铁蛋白进行孵育，应用细胞流式检测仿生铁蛋白与各肿瘤细胞的结合。实验方法如下按照说明书提供的标记方法，将NHS活化的Cy5. 5 (Cy5. 5-NHS,购自GE Healthcare)标记到仿生铁蛋白上。培养各株细胞至I X IO5左右，胰酶消化，0. 3%的BSA/PBS洗细胞三次，加入50 u g/ml的Cy5. 5标记的仿生铁蛋白，4°C孵育45分钟。然后再用0. 3%的BSA/PBS洗细胞三次，最后重悬于PBS中，流式检测样品荧光。结果如表I所示，在所检验的12株肿瘤细胞中，仿生铁蛋白与其中的11株有反应活性，分别属于肝细胞癌、结直肠癌、乳腺癌、黑色素瘤、单核细胞淋巴瘤、宫颈癌、白血病和前列腺癌。证明仿生铁蛋白能够和大部分癌细胞特异结合。表-I流式分析仿生铁蛋白和人肿瘤细胞的反应活性
权利要求
1.双功能肿瘤诊断试剂，其特征在于它是由特异识别癌组织和/或癌细胞的蛋白壳及具有过氧化物酶催化活性的无机纳米核组成。
2.根据权利要求I所述的双功能肿瘤诊断试剂，其特征在于所述蛋白壳包括去铁蛋白、热休克蛋白、DNA结合蛋白、喋啶合酶、和具有纳米空腔结构的病毒蛋白壳，所述纳米空腔结构的病毒蛋白壳包括豇豆退绿斑驳病毒和豇豆花叶病毒蛋白。
3.根据权利要求2所述的双功能肿瘤诊断试剂，其特征在于所述去铁蛋白由12个或是24个重链亚基和轻链亚基任意比例白组装而成。
4.根据权利要求3所述的双功能肿瘤诊断试剂，其特征在于所述去铁蛋白是天然去铁蛋白或是基因重组的去铁蛋白，其中天然去铁蛋白来源于真核生物或原核生物，优选来源于哺乳动物。
5.根据权利要求1-4中任意一项所述的双功能肿瘤诊断试剂，其特征在于所述蛋白壳包括化学偶联或是基因融合靶向分子和/或信号分子的蛋白壳，所述靶向分子包括多肽或核酸适配体，所述多肽包括抗体，所述信号分子包括荧光分子、放射核素和酶。
6.根据权利要求1-4中任意一项所述的双功能肿瘤诊断试剂，其特征在于所述无机纳米核包括磁性氧化铁纳米颗粒、硫化铁纳米颗粒、贵金属掺杂氧化铁纳米颗粒、双金属合金纳米颗粒和氧化铺纳米颗粒。
7.根据权利要求1-4中任意一项所述的双功能肿瘤诊断试剂，其特征在于所述蛋白壳是基因重组的全重链亚基铁蛋白，所述的无机内核为磁性氧化铁纳米颗粒。
8.肿瘤诊断试剂盒，其包括权利要求1-7中任意一项所述的双功能肿瘤诊断试剂和过氧化物酶底物。
9.仿生铁蛋白及其在制备肿瘤检测试剂中的用途，该仿生铁蛋白由蛋白壳及无机纳米核组成，所述蛋白壳是基因重组的全重链亚基铁蛋白，所述的无机内核为磁性氧化铁纳米颗粒。
10.检测个体中肿瘤的方法，包括从所述个体获得机体组织或细胞样品，将该样品与权利要求1-7中任意一项所述的双功能肿瘤诊断试剂接触,加入底物直接显色，由此测定所述个体中肿瘤的存在，优选地所述组织为临床病人或是动物模型的穿刺活组织标本、术后病理切片或尸体剖检组织；所述细胞为机体循环系统中脱落细胞、组织溶解细胞或体外培养细胞。
全文摘要
本发明涉及一种双功能肿瘤诊断试剂及方法。本发明属于纳米技术、生物仿生、免疫学和生物医药的交叉领域。特别地，本发明提供双功能肿瘤诊断试剂，其由特异识别癌组织和/或癌细胞的蛋白壳及具有过氧化物酶催化活性的无机纳米核组成。本发明还提供包括该试剂的试剂盒、使用该试剂检测个体中肿瘤的方法。本发明的双功能肿瘤诊断试剂和方法可应用于癌症筛查、早期诊断、治疗监控、癌细胞转移分析、术后复发评价或癌症基础研究。本发明的双功能肿瘤诊断试剂集肿瘤特异识别与显色双功能于一体，能够实现肿瘤特异识别与显色一步完成，无需二抗、三抗或是HRP等酶或信号分子的标记，操作简单方便。
文档编号G01N33/68GK102778567SQ20111012243
公开日2012年11月14日 申请日期2011年5月12日 优先权日2011年5月12日
发明者冯静, 卢迪, 曹长乾, 杨东玲, 梁敏敏, 潘永信, 范克龙, 阎锡蕴 申请人:中国科学院地质与地球物理研究所, 中国科学院生物物理研究所