miR-36l-5p作为内参miRNA在肿瘤诊断和监测中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及miR-361-5p的一种新用途，即，作为内参miRNA的应用。本发明还提供一种miRNA标准化定量的方法。本发明的优点在于，miR-361-5p在多数肿瘤及对照正常组织中表达最为稳定，最适合作为内参miRNA用于肿瘤miRNA的检测结果的标准化。本发明提供的内参miRNA、miRNA标准化定量的方法、定量检测miRNA的芯片或试剂盒可以使检测结果标准化，值得广泛推广。
【专利说明】mi R-361 -5p作为内参m i RNA在肿瘤诊断和监测中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及分子生物学【技术领域】，具体地说，是miR-361-5p作为内参miRNA在肿 瘤诊断和监测中的应用。
【背景技术】
[0002] 微小核糖核酸（micr〇RNA，miRNA)是一类内源性的具有调控功能的非编码RNA，长 约20~25个核苷酸。miRNA参与各种各样的调节途径，在肿瘤生成、增殖、代谢、凋亡中都发 挥着极为重要的作用，在肿瘤诊断和监测等方面也有着广阔的发展前景。
[0003] 近年来已有多种方法被用于定量检测样本中的miRNA，如qRT-PCR、探针杂交和 microarray等。上述方法会因为样本中miRNA的含量和质量、反应效率、以及试验操作等原 因产生较大的误差，此时便需要采用内参miRNA对这些方法的检测结果进行标准化来消除 这些误差，因此上述方法的准确性很大程度上取决于所采用的内参miRNA。并且在比较不同 实验室及不同实验方法所取得的检测结果时，采用内参miRNA对结果进行标准化也十分重 要。
[0004] 理想的内参miRNA需要在不同样本中均保持稳定的高表达。但目前仍缺乏对内参 miRNA的系统性评估与研究，内参miRNA的选择仍主要依据传统经验，而研究已表明目前常 用的内参miRNA在不同情况下表达具有较大差异性，难以符合标准化的要求。因此，本领域 迫切需要鉴定最佳内参的miRNA，以用于miRNA检测结果的标准化。本发明提供目前还未见 报道的最佳内参miRNA。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供miR-361_5p的一种新用途。
[0006] 为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：miR-361-5p作为内参miRNA的应用。
[0007] miR-361-5p作为内参miRNA在肿瘤诊断和监测中的应用。
[0008] -种miRNA标准化定量的方法，所述的方法包括以下步骤： (1) 测定样本中待测miRNA的绝对浓度； (2) 将步骤（1)获得的待测miRNA的绝对浓度与样本中内参miRNA的绝对浓度进行比 较，从而获得待测miRNA的相对浓度，所述的内参miRNA为miR-361-5p或包含miR-361-5p 的miRNA的组合。
[0009] 在步骤（2)中，将目的miRNA的绝对浓度与样本中miR-361-5p的绝对浓度进行比 较。
[0010] 所述的样本为肿瘤组织、肿瘤患者血液、血浆、血清、体液、细胞或者其组合。
[0011] 一种定量检测miRNA的芯片或试剂盒，所述的芯片或试剂盒特异性地检测 miR-361-5p 或包含 miR-361-5p 的 miRNA 组合。
[0012] 本发明优点在于： miR-361-5p在多数肿瘤及对照正常组织中表达最为稳定，最适合作为内参miRNA用于 肿瘤miRNA的检测结果的标准化。本发明提供的内参miRNA、miRNA标准化定量的方法、定 量检测miRNA的芯片或试剂盒可以使检测结果标准化，值得广泛推广。
【专利附图】
【附图说明】
[0013] 附图1是miR-361-5p在14种肿瘤中的表达情况。
[0014] 附图2是miR-361-5p、其它部分miRNA和常用内参在肺鳞癌、肺腺癌和食管癌中的 qRT-PCR检测结果。
【具体实施方式】
[0015] 下面结合附图对本发明提供的【具体实施方式】作详细说明。
[0016] 本发明涉及的 HiiR-36I-5P,对应序列为 5'-uuaucagaaucuccagggguac-3'（如 SEQ NO. 1所示）。
[0017] 实施例1肿瘤miRNA表达数据分析 从TCGA数据库中获得肿瘤及正常对照组织的miRNA测序结果，共包含14种常见肿 瘤的589例正常对照组织和5727例肿瘤组织样本数据，见表1。对mature miRNA和star miRNA进行分类，去掉颈环、前体和未注释的数据，并按照miRbase V21. 0的MIMAT序列号整 理mature miRNA和star miRNA，计算每种miRNA的表达量，以RPM值表不。
[0018] 表1分析所纳入的14种常见肿瘤及相应正常组织和肿瘤组织样本数量
【权利要求】
1. miR-361-5p作为内参miRNA的应用。 2. miR-361-5p作为内参miRNA在肿瘤诊断和监测中的应用。
3. -种miRNA标准化定量的方法，其特征在于，所述的方法包括以下步骤： (1) 测定样本中待测miRNA的绝对浓度； (2) 将步骤（1)获得的待测miRNA的绝对浓度与样本中内参miRNA的绝对浓度进行比 较，从而获得待测miRNA的相对浓度，所述的内参miRNA为miR-361-5p或包含miR-361-5p 的miRNA的组合。
4. 根据权利要求3所述的方法，其特征在于，在步骤（2)中，将目的miRNA的绝对浓度 与样本中miR-361-5p的绝对浓度进行比较。
5. 根据权利要求3或4任一所述的方法，其特征在于，所述的样本为肿瘤组织、肿瘤患 者血液、血楽、血清、体液、细胞或者其组合。
6. -种定量检测miRNA的芯片或试剂盒，其特征在于，所述的芯片或试剂盒特异性地 检测 miR-361-5p 或包含 miR-361-5p 的 miRNA 组合。
【文档编号】C12Q1/68GK104212895SQ201410443995
【公开日】2014年12月17日 申请日期:2014年9月3日 优先权日:2014年9月3日
【发明者】詹成, 王群, 时雨, 王琳 申请人:复旦大学附属中山医院