专利名称：人体食源性寄生虫病四联诊断试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种诊断试剂盒，尤其是涉及一种快捷诊断人体食源性寄生虫病的试剂盒。
背景技术：
随着社会的快速发展和城市化的加速，人们的饮食习惯发生了较大变化，同时由于烹调等方面的因素，人体食源性寄生虫病的发病率有所上升，要求作寄生虫病检查的人数也随之增加，一份血清需要做多项寄生虫病检测的已屡见不鲜。现有技术的诊断试剂盒只能做单项检测，不能多项同时进行，且化时较长，既造成资源浪费又不利病人早期诊断。
发明内容
本发明主要是解决现有检测方法化时较长仅限于单项检测，既造成资源浪费又不利病人早期诊断等技术问题。
本发明的上述技术问题主要是通过下述技术方案得以解决的包含反应板、抗原固相膜、金标显色系统、缓冲系统；所述的抗原是肺吸虫成虫抗原，肝吸虫成虫抗原，弓形虫速殖子抗原，猪囊尾蚴粗抗原；所述的固相膜为混合纤维素膜；所述的显色系统为氯金酸标记葡萄球菌A蛋白(SPA)；所述的缓冲系统包括磷酸盐缓冲液(PBS)和含小牛血清白蛋白(BSA)及tween-20的Tris缓冲液(TBS)。
作为优选，所述的混合纤维素膜为硝酸、醋酸混合纤维素膜，孔径为0.65μm；所述的肺吸虫抗原为1％成虫可溶性抗原，肝吸虫成虫抗原为成虫粗抗原经25％饱和硫酸銨部分纯化而成，弓形虫抗原为速殖子外膜抗原，猪囊尾蚴粗抗原由囊尾蚴的囊液制作而成；所述的磷酸盐缓冲液的PH值为7.2，浓度为0.02mol/L，Tris缓冲液PH值为8.2，浓度为0.02mol/L，小牛血清白蛋白(BSA)的含量为1-5％，tween-20的浓度为0.5-1％。
因此，本发明用一份待检血清，可以检测四种寄生虫病，具有敏感、特异、快捷、简便，几分钟内就可以得出结果的特点，适合于体检、流行病学调查和临床使用。
具体实施例方式
下面通过实施例，对本发明的技术方案作进一步具体的说明。
反应装置包括三个部分一是小扁盒，分盒底和盒盖，盒盖上有一直径0.3-0.5cm的圆孔，二是吸水填料，系市售吸水纸折叠而成，三是硝酸、醋酸纤维素混合膜。
固相点样膜的制备将硝酸、醋酸混合纤维素膜切成直径1cm的圆片，在圆片中央加箭头形质控点(采用1∶10人血清1.5μl点样)，在箭头上下左右按顺时针方向依次加1μl肺吸虫成虫抗原，肝吸虫成虫抗原，弓形虫速殖子抗原，猪囊尾蚴粗抗原，凉干后置4℃冰箱保存备用。
显色系统氯金酸标记葡萄球菌A蛋白的制备0.01％氯金酸水溶液100ml加热煮沸，在磁力搅拌下迅速加入1％柠檬酸三纳水溶液3ml，继续加热至溶液呈橙红色，如此制得的胶体金溶液直径为15nm，冷却后以每升0.1mol/L k2co3调PH至5.8，按每ml胶体金中加入8μl SPA的比例两者均匀混合，5分钟后加入1％聚乙二醇(PEG)超速离心而成。
测定方法1、在膜上加100μl含1-5％BSA和0.5-1％Teen-20 PH8.2、0.02mol/L的Tris缓冲液封闭，待渗入；2、加入待测血清50μl，待渗入；3、加PBS 100μl，待渗入；4、加SPA胶体金100μl，待渗入；5、加PBS 100μl，洗去未结合的SPA胶体金。
观察结果3分钟内若在膜上相应的抗原点处出现红色斑点为阳性，否则为阴性；膜中央的质控点(箭头)为试验有效标志，无论是阴性或阳性结果质控点均应显示红色。
权利要求
1.一种人体食源性寄生虫病四联诊断试剂盒，包含反应板、抗原固相膜、金标显色系统、缓冲系统，其特征在于a.所述的抗原是肺吸虫成虫抗原，肝吸虫成虫抗原，弓形虫速殖子抗原，猪囊尾蚴粗抗原；b.所述的固相膜为混合纤维素膜，c.所述的显色系统为氯金酸标记葡萄球菌A蛋白(SPA)；d.所述的缓冲系统包括磷酸盐缓冲液(PBS)和含小牛血清白蛋白(BSA)及tween-20的Tris缓冲液(TBS)。
2.根据权利要求1所述的人体食源性寄生虫病四联诊断试剂盒，其特征在于a.所述的混合纤维素膜为硝酸和醋酸混合纤维素膜，孔径0.65μm；b.所述的肺吸虫抗原为1％成虫可溶性抗原，肝吸虫成虫抗原为成虫粗抗原经25％饱和硫酸銨部分纯化而成，弓形虫抗原为速殖子外膜抗原，猪囊尾蚴粗抗原由囊尾蚴的囊液制备；c.所述的磷酸盐缓冲液的PH值为7.2，浓度为0.02mol/L，Tris缓冲液PH值为8.2，小牛血清白蛋白(BSA)的含量为1-5％，tween-20的浓度为0.5-1％。
全文摘要
本发明涉及一种多联快速诊断试剂盒，包含反应板、抗原固相膜、金标显色系统、缓冲系统；抗原是1％肺吸虫成虫可溶性抗原、由成虫粗抗原经25％饱和硫酸銨部分纯化而成的肝吸虫成虫抗原、弓形虫速殖子外膜抗原、由囊尾蚴囊液制作而成的猪囊尾蚴粗抗原；固相膜为硝酸、醋酸混合纤维素膜，孔径0.65μm；显色系统为氯金酸标记葡萄球菌A蛋白；缓冲系统包括pH值为7.2，浓度为0.02mol/L的磷酸盐缓冲液(PBS)和含量1－5％小牛血清白蛋白(BSA)及0.5－1％tween－20，pH值为8.2的Tris缓冲液(TBS)。
文档编号G01N33/543GK1465979SQ0216016
公开日2004年1月7日 申请日期2002年12月30日 优先权日2002年12月30日
发明者林怡, 林 怡 申请人:林怡, 林 怡