专利名称：含有的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种包含13C-尿素的组合物，和该组合物用于检测对象幽门螺杆菌感染的用途。
幽门螺杆菌是一种发现于胃粘膜中或附着于胃上皮层的细菌，现在认为它是引起常见胃病，如浅表面性胃炎、活动性和持续性慢性萎缩性胃炎、十二指肠溃疡及胃溃疡的主要原因之一。而且，据信感染幽门螺杆菌的个体发生胃肿瘤和MALT(粘膜相关淋巴样)淋巴瘤的风险高2-8倍。通常认为该细菌引起胃病的主要生物学机制是它产生的大量尿素酶，该酶能催化尿素产生氨。
据估计，幽门螺杆菌在发达国家人群中感染率超过30-40％，在发展中国家人群中感染率超过50-60％。该菌感染分布广泛给预防以及预防性治疗带来特殊问题，由于其致病作用定位在胃粘膜和上皮，尤其是考虑到这种感染无症状，因此不采用合适的诊断方法很难确诊。
幽门螺杆菌感染可通过侵入性方法来诊断，例如内窥镜检查和活组织检查；也可通过非侵入性方法来诊断，例如分析血清中抗幽门螺杆菌的抗IgG抗体和所谓的“尿素呼吸测试”(UBT)，该方法通过对象口服13C-尿素后，检测对象呼出气体中是否存在细菌尿素酶产生的13CO2来检测是否存在幽门螺杆菌。
在测试时，给予13C-尿素由其预定剂量的水溶液进行，该溶液中至少含有同位素标记尿素75毫克，并且通常与延迟胃排空的药物，如柠檬酸一起使用。不仅给予的尿素量，而且呼出样品的取样持续时间，都对该试验的有效性和灵敏度起着关键作用。通常认为，为了得到准确的定性结果最少需要20-30分钟。
为了增加患者的配合，优化组合物的成本和性能，需要能够减少给予的尿素量和减少取样次数同时维持该试验有效性和灵敏度。
本发明的目的在于提供一种包含13C-尿素的组合物，具体说，是为了揭示幽门螺杆菌的存在，本发明克服了背景技术的缺点。
具体说，一个目的是提供了上述组合物，其所包含的13C-尿素总量低于目前公认的获得预测幽门螺杆菌感染存在结果所必需的量。
另外一个目的是提供使用上述组合物鉴定幽门螺杆菌感染的方法。
具体说，一个目的是提供上述方法，得以在减少呼出气体取样次数的同时，获得精确和准确的定性定量结果。
此目标及这些和其它目的可通过适合于口服给药的组合物来完成，具体说，来鉴定对象体内是否存在幽门螺杆菌，所述组合物包含的13C-尿素浓度在0.1-2毫克/毫升范围内选择，如果该组合物是液体选择范围为35-1000毫克/毫升，如果组合物是固体选择范围为重量百分比0.07-100％。
此目标及这些和其它目的也可通过鉴定对象体内是否存在幽门螺杆菌的方法来完成，所述方法包括下述步骤(a)获取基础状态下对象的一个或多个呼出气体样品，(b)给予对象5到25毫克之间量的13C-尿素，(c)获取该对象的一个或多个呼出气体样品，和(d)检测步骤(a)和(c)取得的样品中是否含有13CO2，13CO2存在于样品(c)中表明对象胃和消化系统中有幽门螺杆菌感染。
此目标及这些和其它目的也可通过鉴定对象体内是否存在幽门螺杆菌的试剂盒来完成，所述的试剂盒包括-上述定义的组合物，其包含13C-尿素；和-适合收集对象呼出气体样品的器具。
此目标及这些和其它目的也可通过用13C-尿素产生一种组合物，给于对象以诊断幽门螺杆菌感染，组合物中所含13C-尿素的量在5-25毫克之间。
必须理解上面提到的关于本发明诸方面之一种的排他性特征是有效的，当其应用时，也可参考本发明的其它方面，即使它们没有被清楚重复。
第一个方面，本发明涉及一种适和口服给药的组合物，改组合物包含13C-尿素。
在一个高度优选的实施例中，该组合物是单剂形式的，其中每剂包含13C-尿素的量在5到25毫克之间，每剂可直接或稀释后给药。本实施例中，13C-尿素的量在5-25毫克之间，优选是在10-20毫克之间，更优选等于15毫克。任选的此组合物也可包含药学上可接受的赋形剂和运载体。本发明的组合物是为口服给药设计的，可以是固体或液体。
术语“单剂”可理解为该组合物可制成含有上述量13C-尿素的单位剂量形式；或多个剂量的容器，该容器可容纳一个或多个单位剂量，每一剂量含有上述量的13C-尿素。这些剂量可直接或任选地稀释后给药，根据偏好添加固体或液体赋形剂。
单剂也可从取出浓缩组合物开始，任选地稀释合适量而获得。
除同位素标记尿素外，该组合物的优点是包含选自柠檬酸、抗坏血酸、酒石酸、或任选的药学领域中使用的其他组分如稀释剂、乳化剂、粘合剂、调味品、甜味料中的一种或多种制剂，优选柠檬酸。水溶液中柠檬酸的量宜在0.1到3克/10毫升之间，优选140毫克/毫升。
该组合物也可能和优选包含一种或多种防腐剂，可选择那些通常用于药学领域的防腐剂。例如，Parabens就是可以使用的防腐剂。
本发明的组合物可以任何适合口服的剂型提供，例如液体剂型有溶液、悬液和乳液；和固体剂型有粉末、药片、药丸，依据选择的剂型选择药学上可接受的运载体和赋形剂。优选该组合物是水溶液形式，其中的水是药学用水，优选蒸馏水、纯化水、或它们的混合物。
本发明的组合物如果是水溶液形式，优选包装在预定剂量的单剂瓶中，体积10毫升。如需要，瓶中的内容物可以任选的加水稀释(甚至可用普通的自来水)至最大体积1000毫升，优选体积达到200毫升。
在一个实施例中，本发明的组合物是固体形式，直接由标记的尿素构成，或用药学上可接受的固体赋形剂稀释，如果剂型是固体的单剂形式，标记的尿素量宜为每剂5到25毫克之间。
第二个方面，本发明涉及鉴定幽门螺杆菌存在的方法，所述方法包括前述步骤(a)-(d)。
标记尿素的给药可以是一次性给药也可分为多个阶段给药，但发现当给予尿素的总量在5-25毫克之间是极为有利的，优选10-20毫克之间，更优选等于15毫克。
任选地，对象在给药前禁食最少8小时或过夜。
宜采用上述组合物进行13C-尿素给药，更优选采用13C-尿素的水溶液，甚至更优选13C-尿素和柠檬酸的水溶液，其中，尿素总量在5到25毫克之间，优选在10-20毫克之间，更优选等于15毫克，柠檬酸总量在100到3000毫克之间，优选等于1400毫克。
在一个优选的具体实施例中，此方法提供了收集的基础状态下对象呼出的气体，给予该对象预定剂量的药瓶，其中装有上述量的尿素和柠檬酸的水溶液，优选用水稀释后体积达到200毫升口服。
标记尿素给药后，收集对象呼出气体的样品。该收集最好在尿素给药后1分钟开始，优选给药后10分钟到30分钟。可以在一个时间点取样，更优选在不同时间间隔重复多次取样，只要在任何情况下，第一个样品是在给药后1分钟，优选给药后10分钟得到。
样品收集也可借助合适的仪器连续进行，给药后1分钟开始，直到仪器信号达到最高峰。
而且，每次取样可以是单个样品或多个样品的，在多个样品情况下，某给定时间的测量值是所取样品的算术平均值。
在一个优选的具体实施例中，一次收集呼出气体的一个样品或一式两份样品，时间间隔从给于标记尿素后大约5、10、20和30分钟中选择，优选给药后10分钟。例如让对象向一个容器内吹气的方法收集样品，吹气后密封。
宜以两个步骤收集呼出气体样品给药前的预备步骤用于计算该对象的13CO2基础值，和给予标记尿素后的步骤。检查呼出气体中是否有13CO2的步骤是依据存在细菌尿素酶时，呼出气体中生理性13CO2/12CO2的比值会发生显著变化，而13CO2可用该领域常用的各种分析技术来检测。例如，这些技术包括质谱和红外分析，通过此方法测定二种同位素13CO2/12CO2的比值。为了获得预测感染是否存在的结果，将给于标记尿素后检测到的13CO2/12CO2比值与给药前取得样品所检测的基础水平比值相比较。
第三个方面，本发明涉及一种鉴定对象体内幽门螺杆菌存在的试剂盒，该试剂盒包括上述的组合物、优选是单剂形式，和适合收集对象呼出气体样品的器具。
另一个方面，本发明涉及利用13C-尿素生产给于对象诊断幽门螺杆菌感染的组合物，该组合物中13C-尿素的量在5到25毫克之间，优选在10到20毫克之间，更优选等于15毫克。因为上述使用方法包括口服该组合物，所以可能测定对象呼出气体中13CO2的量，并因此检测出对象胃-消化系统中是否存在幽门螺杆菌感染。较佳的是，在上述用法中，标记尿素被包含在如上述定义的组合物中，优选单剂组合物。
本发明的所有方面内容是在体内定性和定量诊断胃-十二指肠幽门螺杆菌感染的应用，它相对于目前使用于类似用途的其他产品具有几项优点。具体说，给给予的13C-尿素量已大幅度减少，低于域值75或50毫克，这是目前公认的获得准确和精确结果的最低可能量。
观察发现，标记尿素量在5到25毫克之间，可清晰地区别阳性和阴性对象。除了这样一个完全出乎预期的结果外，还为制备该组合物节约了相当可观的成本和时间。
进一步说，观察发现其它任选组分，如柠檬酸，并不是有效诊断和进一步减少制备成本所必需的。
而且，取样时间减少到30分钟以下，这是通常认为获得不受假阳性或假阴性影响结果的最低域值，使得本方法尤其迅速和廉价，同时保持、有时甚至提高了后续诊断的质量。
本发明的进一步特征和优点可通过下面优选的实施例，即完全实施方式的描述变得更加明显。本领域技术人员会理解可对后文和实施例中描述的实施方式作出多种变化，但不会因此改变本发明的创造性构思。
实施例1为了评价诊断幽门螺杆菌感染所需的13C-尿素最小给药剂量，在一位先前诊断为幽门螺杆菌阳性的志愿者身上进行了预初实验。
给予该志愿者的13C-尿素剂量在5-75毫克之间不断增加，但每次实验在不同的日期独立进行。
所有实验中，该志愿者在傍晚前禁食，给药后10、20、30分钟分别获取呼出气体样品。
呼出气体样品用质谱(IRMS)分析后，分析得到的数字结果总结在表1中。
表1当千分率Delta值高于4时，认为该样品为阳性。
表中列出的结果表明，给药5毫克13C-尿素后，对象呼气测试已经显示阳性。给药后10分钟已检测到该阳性结果。
对于更大剂量标记尿素的给药，对象具有更明显的非阴性结果，提高了本方法的灵敏度。
实施例1的结果后来用红外探测得到确证。
实施例2实施例1中的实验在40个对象身上得到重复，其中20人先前诊断为阳性，20人诊断为阴性。
表2和3分别列出了给予10-15毫克13C-尿素后和10分钟后收集的呼出气体获得的诊断结果。这些数据后来用内窥镜分析、细菌培养及快速尿素酶试验确证。
表2
表3
表2、3中，缩写词的含义如下EGDS(食管-胃-十二指肠内窥镜)N正常，AG窦性胃炎，ED糜烂性十二指肠炎，OES食管炎，DU十二指肠溃疡，GU胃溃疡，RUT快速尿素酶测试pos阳性，neg阴性，G.A.Giemsa窦(幽门螺杆菌组织学特征)，Culture幽门螺杆菌的培养，CL克拉霉素(治疗抗生素) S敏感，R耐药，MZ甲硝唑S敏感，R耐药，Delta‰从基础值和取样时间(如10分钟)值的差异获得的数值，如果Delta大于4，则认为此样品阳性。
本文中涉及的Giemsa窦(幽门螺杆菌感染的组织学分析的“金标准”技术)、食管-胃-十二指肠内窥镜、快速尿素酶测试和幽门螺杆菌的培养技术是检测幽门螺杆菌感染公知的UBT的替代方法。
然而，本发明的基础UBT技术与这些技术相比有其重要优点，例如在欧洲认为它是诊断幽门螺杆菌感染的参考技术。也正是由于这个原因，本发明得到的阳性结果就可靠性和灵敏度而言是有绝对性提高的。
权利要求
1.一种适合口服给药形式的组合物，具体用于鉴定对象体内存在的幽门螺杆菌，其特征在于，所述组合物包含13C-尿素，其浓度在0.1-2毫克/毫升范围内选择，如果该组合物是液体，浓度范围为35-1000毫克/毫升，如果该组合物是固体，浓度范围是重量百分比0.07-100％。
2.如权利要求1所述的组合物，所述组合物为单一剂量单位形式，其特征在于，每剂含5到25毫克之间的13C-尿素，优选10到20毫克之间，更优选等于15毫克。
3.如前述任一权利要求所述组合物，其特征在于，该组合物至少包含选自柠檬酸、抗坏血酸、酒石酸、或其他药学领域中使用的组分如稀释剂、乳化剂、粘合剂、调味品、甜味料的任选的一种制剂。
4.如权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述的至少一种任选的制剂是柠檬酸。
5.如权利要求4所述的组合物，其特征在于，柠檬酸在水溶液中的含量在10-300毫克/毫升之间，优选等于140毫克/毫升。
6.如前述任一项权利要求所述的组合物，其特征是该组合物还包含至少一种防腐剂。
7.如权利要求6所述的组合物，其特征在于，所述至少一种防腐剂是对羟基苯甲酸酯。
8.如前述一项或多项权利要求所述的组合物，其特征是该组合物为水溶液形式。
9.如权利要求8所述的组合物，其特征在于，所述水溶液装在直接可使用或稀释后使用的单剂10-毫升瓶中。
10.如权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述组合物为多剂容器形式，从该容器中取出单剂单位直接给药或稀释后给药。
11.一种鉴定对象体内存在幽门螺杆菌的方法，其特征在于，所述方法包括下述步骤(a)获取基础状态下对象的一个或多个呼出气体样品，(b)给予该对象5到25毫克之间的13C-尿素，(c)获取该对象的一个或多个呼出气体样品，和(d)检测步骤(a)和(c)取得的样品是否含有13CO2，13CO2存在于样品(c)中表明对象胃和消化系统中有幽门螺杆菌感染。
12.如权利要求11所述的方法，其特征在于，用步骤(a)所获取的一个或多个样品来计算对象的13CO2基础值。
13.如权利要求11所述的方法，其特征在于，步骤(c)分一阶段或多阶段进行。
14.如权利要求11所述的方法，其特征在于，步骤(c)在给药步骤后1分钟开始一次或多次连续进行。
15.如权利要求13所述的方法，其特征在于，步骤(c)在给药步骤后5分钟开始一次或多次连续进行。
16.如权利要求15所述的方法，其特征在于，步骤(c)在步骤(b)后5、10、20和30分钟各进行一次。
17.如权利要求11所述的方法，其特征在于，在每隔一段间隔时间，步骤(c)多次重复进行。
18.如权利要求11所述的方法，其特征在于，所述幽门螺杆菌的鉴定是定量和/或定性鉴定。
19.一种鉴定对象体内存在幽门螺杆菌的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括-权利要求1-10之一项或多项所述的组合物，和-收集对象呼出气体样品的合适器具。
20.13C-尿素在生产给予对象以诊断幽门螺杆菌感染的组合物中的用途，其特征在于，该组合物中13C-尿素量在5到25毫克之间。
21.如权利要求11-20至少一项所述的发明，其特征在于，权利要求1-10之一项或多项所述组合物中含有13C-尿素。
22.如权利要求20-21任何一项所述的发明，其特征在于，组合物如权利要求2-3和8之一项或多项所述。
23.如权利要求22中所述的发明，其特征在于，该发明中的组合物如权利要求9所述，在给药前用水稀释至体积200毫升。
全文摘要
本发明涉及一种包含
文档编号G01N33/483GK1733931SQ20051008858
公开日2006年2月15日 申请日期2005年8月2日 优先权日2004年8月3日
发明者D·帕拉丁 申请人:Ab分析法有限公司