专利名称：降糖药—伏格列波糖及其制剂的一种高效液相的分析测定方法
技术领域：
本发明属于药物新技术领域，涉及一种用于治疗糖尿病的药物伏格列波糖及其制剂的分 析测定方法，具体地说是一种用高效液相色谱方法，采用紫外检测器，利用末段吸收，选用 适当的流动相，对治疗糖尿病的药物伏格列波糖及其制剂进行分析测定，比目前国家标准采 用柱后衍生法测定伏格列波糖的方法即简单又重复性好，准确度更高。
背景技术：
伏格列波糖片是日本武田药品工业株式会社开发研制的a -葡萄糖苷酶抑制剂类将血糖 药，因其用量小，能有效控制血糖，是对糖尿病有效性及安全性很高的一种新型药物。其结 构式如下-
伏格列波糖站构式
根据文献报道及国家药品标准，测定伏格列波糖片的方法有
(1) 原日本方法有关物质方法采用戊乙烯乌托品柱，含量测定采用氨丙基键合球形硅 胶柱，分别采用两种流动相，利用柱后衍生的方法，用荧光检测器检测进行测定。
(2) 国家药品标准收载制剂方法采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以不 同浓度辛垸磺酸钠磷酸盐缓冲液(pH3.5)为流动相，利用柱后衍生的方法，用荧光检测器检 测进行测定。
(3) 国家药品标准收载原料方法采用氨基硅垸健合硅胶为填充剂的色谱柱，以乙腈-
磷酸盐(pH5.8)(取磷酸二氢钠二水合物1.56g，加水500ml使溶解，得溶液A;取磷酸氢二 钠十二水合物3.52g，加水500ml使溶解，得溶液B，用溶液B调节溶液A的Ph为5.8) (60: 40)为流动相，荧光监测器，柱后衍生。
以上三种方法均采用柱后衍生的方法，用荧光检测器检测进行测定。该方法存在操作烦 琐，需要采用双泵，20米长的聚四氟乙烯反应管(内径0.5mm)，反应温度10(TC， 2米长聚 四氟乙烯冷却管(内径0.3 1111)，冷却温度15°C。操作起来受各种因素的影响，比如反应 管温度、反应管内径的大小、室温、冷却管温度、冷却管内径的大小，荧光试剂的配置及浓 度，荧光试剂的纯度(色谱纯或分析纯)，流动相的配比，流动相与荧光液的流速比等等。造 成重现性差，并且不同的人员用同一台仪器，操作测定的图谱差异性很大，同一个人用不同的仪器测定的图谱差异性也很大。同时我们在操作过程中发现，反应管非常容易破裂；理论 塔板数比较低，大约2000以下，与标准规定的4500相差较大。
因此，寻求一种比较稳定、重现性和重复性比较好，又比较常用和容易实现的测定方法， 用于该药物的分析测定，是非常有必要和有价值的。为严格控制药物的质量，提高药物的安 全性，起到非常重要的作用，也能体现出很好的社会效应。我们经过了大量的筛选工作，最 后摸索出一套适合伏格列波糖及其制剂的分析测定方法。采用确定的方法进行检测，有关物 质图谱的理论踏板数以伏格列波糖峰计约为9000，含量测定和溶出度图谱的理论踏板数以伏 格列波糖峰计约为13000。对称度均约为l.l。该方法快速简便，精密度高，分离效果好，结 果准确，重复性试验及回收率试验的RSD均小于2.0%，有关物质最低检出量(s/n-3)为 0.05ug/ml，相当于测定浓度的0.02%。
发明内容
本发明目的在于提供一种稳定性好、成本低、重现性好、重复性好，操作简单，理论塔 板数高，用于伏格列波糖及其制剂的分析测定方法。应用该方法测定治疗糖尿病的药物伏格 列波糖及其制剂，方便可行，准确度高。
一种用于治疗糖尿病的药物伏格列波糖及其制剂的分析测定方法，是通过以下技术方案
实现的
仪器 一套简单高效液相色谱仪，包括液相泵、紫外检测器、200ul进样阀 试剂磷酸二氢钠或其水合物(分析纯)、磷酸氢二钠或其水合物(分析纯)、乙腈(色 谱纯)
色谱柱氨基硅垸键合硅胶为填充剂 流动相乙腈-磷酸盐缓冲液(75: 25)
灵敏度0.0025AUFS 0.0050AUFS 检测波长195nm 200nm
磷酸盐缓冲液的配制取磷酸二氢钠二水合物0. 624g，磷酸氢二钠十二水合物0. 350g， 加水溶解并稀释至1000ml。
溶出度方法的选择由于伏格列波糖制剂的规格为0.2mg，用水做溶剂，直接进样其溶 剂水对伏格列波糖主峰有影响，采用乙腈稀释，使进样时的溶剂中的比例接近流动相的配比， 消除溶剂对主峰的影响。稀释至大约为溶出时的三倍，造成检测溶液浓度更低。因此采用增 加溶出度测定时的主药度，取样品2片或2粒，测定波长为195nm。
用紫外检测器，检测波长为195,灵敏度为0.0025AUFS。理论踏板数以伏格列波糖峰计 不低于5000。伏格列波糖及其制剂峰和各辅料峰及杂质峰分离度良好。以下实施例说明本发明，但不以任何方式限制本发明。 实施例l:有关物质的测定
照高效液相色谱法(中国药典2005年版二部附录V D)测定。
色谱条件与系统适用性试验用氨基硅烷键合硅胶为填充剂；柱温30'C;乙腈-磷酸盐 缓冲液(p服.O)(取磷酸二氢钠二水合物0.624g，磷酸氢二钠十二水合物0. 350g，加水溶解 并稀释至1000ml。) (75: 25)为流动相，检测波长为200nm，灵敏度为0. 0025AUSF。理论板 数按伏格列波糖峰计算应不低于6000，伏格列波糖峰与相邻杂质峰之间的分离度应符合要求。
测定法取本品10片(约相当于伏格列波糖2. Omg)，精密加入流动相10ml，浸泡并时 时充分振摇30分钟，使伏格列波糖溶解，放置，取上清液经0. 45pm滤膜滤过，取续滤液作 为供试品溶液；精密量取供试品溶液lml，置于50ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀， 作为自身对照溶液。精密量取自身对照溶液20(V1，注入液相色谱仪，调节仪器检测灵敏度， 使主成分峰高约为满量程的15% 25%。再精密量取供试品溶液20(V1，注入液相色谱仪，记 录色谱图至供试品主峰保留时间的2倍，供试品溶液的色谱图中，各杂质峰面积之和不得大 于对照溶液主峰面积(2.0%)。 实施例2:有关物质的测定
照高效液相色谱法(中国药典2005年版二部附录V D)测定。
色谱条件与系统适用性试验用氨基硅烷键合硅胶为填充剂；柱温3(TC;乙腈-磷酸盐 缓冲液(pH6.0)(取磷酸二氢钠二水合物0.624g，磷酸氢二钠十二水合物0. 350g，加水溶解 并稀释至1000ml。) (75: 25)为流动相，检测波长为195ran，灵敏度为0, 0050AUSF。理论板 数按伏格列波糖峰计算应不低于6000，伏格列波糖峰与相邻杂质峰之间的分离度应符合要求。
测定法取本品IO片(约相当于伏格列波糖2.0mg)，精密加入流动相10ml，浸泡并时 时充分振摇30分钟，使伏格列波糖溶解，放置，取上清液经0.化nni滤膜滤过，取续滤液作 为供试品溶液；精密量取供试品溶液lml，置于50ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀， 作为自身对照溶液。精密量取自身对照溶液20(^1，注入液相色谱仪，调节仪器检测灵敏度， 使主成分峰高约为满量程的15% 25%。再精密量取供试品溶液20(^1，注入液相色谱仪，记 录色谱图至供试品主峰保留时间的2倍，供试品溶液的色谱图中，各杂质峰面积之和不得大 于对照溶液主峰面积(2.0%)。 实施例3:含量的测定
照高效液相色谱法(中国药典2005年版二部附录VD)测定。
色谱条件与系统适用性试验乙腈-磷酸盐缓冲液(PH6.0)(取磷酸二氢钠二水合物 0.624g，磷酸氢二钠十二水合物0. 350g，加水溶解并稀释至1000ml。) (75: 25)为流动相，
6检测波长为200nm，灵敏度为0. 0025AUSF。理论板数按伏格列波糖峰计算应不低于6000，伏 格列波糖峰与辅料峰之间的分离度应符合要求。
测定法取伏格列波糖对照品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每lml中约含 O.Olmg的溶液，精密量取200W注入液相色谱仪，记录色谱图；另取本品30片，精密称定， 研细，精密称取适量(约相当于伏格列波糖lmg)，置100ml量瓶中，加流动相约40ml，浸泡 并时时充分振摇30分钟，使伏格列波糖溶解，并用流动相稀释至刻度，摇匀，放置，取上清 液经0.45^un滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。 实施例4:含量的测定
照高效液相色谱法(中国药典2005年版二部附录VD)测定。
色谱条件与系统适用性试验乙腈-磷酸盐缓冲液(PH6.0)(取磷酸二氢钠二水合物 0.624g，磷酸氢二钠十二水合物0. 350g，加水溶解并稀释至1000ml。) (75: 25)为流动相， 检测波长为195nm，灵敏度为0. 0050AUSF。理论板数按伏格列波糖峰计算应不低于6000，伏 格列波糖峰与辅料峰之间的分离度应符合要求。
测定法取伏格列波糖对照品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每lml中约含 O.Olmg的溶液，精密量取200W注入液相色谱仪，记录色谱图；另取本品30片，精密称定， 研细，精密称取适量(约相当于伏格列波糖lmg)，置100ml量瓶中，加流动相约40ml，浸泡 并时时充分振摇30分钟，使伏格列波糖溶解，并用流动相稀释至刻度，摇匀，放置，取上清 液经0.45pm滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。 实施例5:片剂溶出度的测定
照高效液相色谱法(中国药典2005年版二部附录V D)测定。
色谱条件与系统适用性试验用氨基硅烷键合硅胶为填充剂；柱温30'C;乙腈-磷酸盐 缓冲液(P服.O)(取磷酸二氢钠二水合物0.624g，磷酸氢二钠十二水合物0. 350g，加水溶解 并稀释至1000ml。) (75: 25)为流动相，检测波长为195nm，灵敏度为0. 0025AUSF。理论板 数按伏格列波糖峰计算应不低于6000，伏格列波糖峰与辅料峰之间的分离度应符合要求。
取本品2片，照溶出度测定法(中国药典2005年版二部附录XC第三法)，以水100ml 为溶剂，转速为每分钟50转，依法操作，经30分钟时，取溶液适量，经0.45iam滤膜滤过， 精密量取续虑液3ml，置于10ml的容量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀即得样品溶液，精密 量取样品溶液20(^1，注入液相色谱仪，记录色谱图。另取伏格列波糖对照品适量，精密称 定，用流动相溶解并稀释制成每lml中约含伏格列波糖1.2pg的溶液，作为对照品溶液，同 法测定。按外标法以峰面积计算出每片的溶出量，限度为标示量的80%，应符合规定。
权利要求
1. 降糖药—伏格列波糖及其制剂的一种高效液相的分析测定方法，其特征在于采用紫外检测器，用适合的流动相，适当的色谱柱，对伏格列波糖及其制剂的有关物质、含量、制剂的溶出度等项目进行测定。
2. 根据权利要求l，降糖药一伏格列波糖及其制剂的一种高效液相的分析测定方法，其特征 在于采用的紫外检测波长范围为190nm 210nm，最佳范围为195nm 200nm。
3. 根据权利要求l，降糖药一伏格列波糖及其制剂的一种高效液相的分析测定方法，其特征 在于采用的流动相包含但不限于以下一种或几种混合液甲醇、磷酸盐缓冲液、乙腈、醋 酸盐缓冲盐、离子对试剂(如辛垸磺酸钠、庚烷磺酸钠)、碳酸盐缓冲液等，其中磷酸盐 缓冲液包含但不限于以下一种试剂水溶液或几种试剂的混合水溶液磷酸二氢钠、磷酸二 氢钠水合物、磷酸氢二钠、磷酸氢二钠水合物、磷酸氢二钾、磷酸氢二钾水合物、磷酸二 氢钾、磷酸二氢钾水合物等。。
4. 根据权利要求3，降糖药一伏格列波糖及其制剂的一种高效液相的分析测定方法，其特征 在于采用的流动相最佳为乙腈和磷酸盐缓冲液的混合液，乙腈和磷酸盐缓冲液的配比范围 为30: 70 90: 10;乙腈和磷酸盐缓冲液的最佳配比为75: 25。。
5. 根据权利要求10，降糖药一伏格列波糖及其制剂的一种高效液相的分析测定方法，其特 征在于采用的磷酸盐缓冲液的PH范围为4. 0 8. 0，最佳pH范围为5. 5 6. 5。
6. 根据权利要求10，降糖药一伏格列波糖及其制剂的一种高效液相的分析测定方法，其特 征在于采用的磷酸盐缓冲液最佳配比方法为取磷酸二氢钠二水合物0.624g，磷酸氢二 钠十二水合物0. 350g，加水溶解并稀释至1000ml中，溶液的pH约为6. 0。
7. 根据权利要求1，降糖药一伏格列波糖及其制剂的一种高效液相的分析测定方法，其特 征在于采用的色谱柱包含但不限于以下一种氨基键合硅胶柱、氰基键合硅胶柱、烷基键 合硅胶柱、磺酸型聚苯乙烯与二乙烯苯共聚体阳离子交换树脂柱等，色谱柱最佳为氨基键 合硅胶柱。
8. 根据权利要求1、 2、 4、 7、 8，降糖药一伏格列波糖及其制剂的一种高效液相的分析测 定方法，其特征在于色谱适用性条件为以氨基硅烷键合硅胶柱为色谱柱，以乙腈-磷酸 盐缓冲液(75: 25)为流动相，检测波长为195nm 200nm，灵敏度为0.0025AUFS。所 得结果的理论踏板数以伏格列波糖峰计不低于7000。伏格列波糖峰和各辅料峰及杂质峰 分离度良好。
9. 根据权利要求1，降糖药一伏格列波糖及其制剂的一种高效液相的分析测定方法，其特 征在于制剂做溶出度检测时采用的溶剂为包含但不限于以下一种或几种混合液水、磷酸 盐缓冲液、碳酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液等，最佳溶剂为水。
10.根据权利要求9，降糖药一伏格列波糖及其制剂的一种高效液相的分析测定方法，其特 征在于制剂做溶出度检测时的方法为采用小杯法，取本品2片或2粒，加水100ral，转 速为50转，经30分钟取样，滤过，精密量取3ml置10ml量瓶中，用乙腈稀释至刻度， 摇匀，量取200ul注入高效液相色谱仪，色谱条件同权利要求18，按外标法计算伏格列 波糖的溶出量。溶出限度不低于标示量的80%。
全文摘要
降糖药—伏格列波糖及其制剂的一种高效液相的分析测定方法，其特征在于采用紫外监测器，用适合的流动相，对伏格列波糖的有关物质、含量、制剂的溶出度等项目进行测定。同时公开了该方法。应用该方法进行测定，方法简单、精密度高，稳定性好，重现性好，进行分析测定的时间短。
文档编号G01N30/74GK101458239SQ20071017950
公开日2009年6月17日 申请日期2007年12月14日 优先权日2007年12月14日
发明者王翰斌, 刚 陈 申请人:北京琥珀光华医药科技开发有限公司