专利名称：缬沙坦中杂质e的研究及控制方法
技术领域：
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本发明涉及一种药物检测方法，特别涉及抗高血压药物缬沙坦中的杂质
VLSI-E的研究及控制方法。
缬沙坦(valsartan，化学式见I )，化学名N-(1-氧戊基)-N-[4- [2-(1H-四唑-5-基)苯基]苄基]-L-纈氨酸，是一种血管紧张素II的1型(AT》受体拮抗 剂，具有全新的降压机制，降压平稳、疗效强、作用时间长、患者耐受性好。
关于缬沙坦的文献相当丰富，主要集中在合成路线和晶型上，例如关于缬沙 坦合成路线的专利有US5399578、 US7199M4、 W02006067216、 W02008007391 、 W02004026847、 CNOO115355等；关于缬沙坦晶型的专利有US7105557、 WO 2003089417、 W02004087681、 US20060270723等；在缬沙坦的杂质控制方面，本 公司专利CN101367772对有关物质做出了如下的限定VLSI-A不超过1.0%; VLSI-B和VLSI-D分别不得超过0. 2%和0. 1%，其它单个未知杂质不得超过0.1 %，总杂质(不包括VLSI-A)不超过0.3X，符合美国药典的要求。但VLSI-E在 美国药典等药品标准中并未有专门的论述和规定限度。VLSI-E化学名为N-(1-氧戊基)-N-[4-[2-(1H-四唑-5-基)苯基]苄基]-L-异亮氨酸，结构式如下所示:
背景技术：
:<formula>formula see original document page 5</formula>
按照ICH要求原料药单个杂质量超过0. 05%需要报告，单个杂质量超过0. 1% 需要进行够确证，单个杂质量超过0.15%需要有安全性数据支持。专利 W02004094392采用控制缬氨酸或缬氨酸衍生物(缬氨酸的盐、缬氨酸酯和缬氨酸 醚等)中异亮氨酸及异亮氨酸衍生物的方法进行控制VLSI-E的含量；通过气相色 谱法控制缬氨酸酯中的异亮氨酸酯的含量小于0.1%,从而达到控制缬沙坦中的 VLSI-E小于0. 1%。但是由于缬氨酸酯为油状物，在运输和贮藏过程中不方便， 工业上往往将其制备为成盐物，如缬氨酸甲酯盐酸盐、缬氨酸乙酯盐酸盐。由于 成盐后其杂质控制成为一个难题；缬氨酸酯失去了挥发性，不能采用气相色谱检 测其中的异亮氨酸酯的含量；无紫外吸收不能采用高效液相紫外检测法，蒸发光 等检测器灵敏度低达不到检测要求。本发明采用脱盐的方法对缬氨酸酯成盐物和 其中杂质异亮氨酸酯成盐物进行脱盐，将其转化为具有挥发性的缬氨酸酯和异亮 氨酸酯，进一步采用气相的方法对缬氨酸成盐物中的异亮氨酸酯成盐物的量进行 控制，达到控制缬沙坦中VLSI-E的含量的目的。
发明内容
本发明采用以下合成路线合成缬沙坦<formula>formula see original document page 6</formula>
控制VLSI-E的含量不超过终产物重量的0. 1%是本合成的目的，为此本发明对初 始原料进行限定，用异亮氨酸酯成盐物的含量不大于0. 23%的缬氨酸酯成盐物为 上述合成路线的起始原料，根据上述合成路线进行合成，得到缬沙坦，其杂质 VLSI-E的含量不超过0.1%,可达到本发明的目的。 含量不大于0. 23%的异亮氨酸酯成盐物用以下方法得到，
(1) 准备一批或多批的缬氨酸酯的成盐物，如缬氨酸酯盐酸盐；
(2) 采用脱盐的方法处理后，测定(l)中缬氨酸酯成盐物中异亮氨酸酯
成盐物的含量；如测定异亮氨酸酯盐酸盐的含量；
(3) 在步骤(2)的基础上选择异亮氨酸酯成盐物的含量不大于0. 23%的
缬氨酸酯成盐物作为起始原料；如异亮氨酸酯盐酸盐的含量不大 于0. 23%的缬氨酸酯盐酸盐；
(4) 采用步骤(3)中的缬氨酸酯成盐物合成缬沙坦，如采用异亮氨酸酯
盐酸盐的含量不大于0. 23%的缬氨酸酯盐酸盐。 VLSI-E是缬沙坦的异亮氨酸衍生物，在合成步骤中，由缬氨酸酯盐酸盐中 的杂质异亮氨酸酯盐酸盐引起，所以控制杂质VLSI-E含量的关键是控制缬氨酸 酯盐酸盐的的质量。根据这条路线，结合ICH的要求，对有VLSI-E做出了如下的限定VLSI-E 不超过O. 1%。我们定向合成出了 VLSI-E，并进行了结构确证。按照USP标准要 求的色谱条件，在HPLC图谱中VLSI-E的相对保留时间分别为1.29。
以上缬氨酸酯成盐物可以为缬氨酸甲酯成盐物、缬氨酸乙酯成盐物、缬氨酸 苯甲酸酯成盐物等脂肪醇酯成盐物和芳香醇酯成盐物。我们优选缬氨酸甲酯盐酸 盐作为原料合成缬沙坦。缬氨酸甲酯盐酸盐在水溶液中溶解后加入氢氧化钠中和 盐酸后，采用气相色谱法测定其中异亮氨酸甲酯盐酸盐的含量；缬沙坦中VLSI-E 的含量采用HPLC面积归一化法测定含量；气相和HPLC方法见附表1。结果数据 见表1:
表1异亮氨酸甲酯盐酸盐量与VLSI-E含量结果对应表
批次异亮氨酸甲酯盐酸盐杂质E含量
10. 03%未检出
20. 13%*未检出
30. 15%0. 06%
40. 16%0. 06%
50. 23%*0. 10%
60. 33%*0. 21%
70. 53%*0.41%
*为在批次1的基础上定量加入0. 10%, 0.20%, 0.30%, 0.50%的异亮氨酸甲酯盐酸盐。
上表，可以确定杂质异亮氨酸甲酯盐酸盐的量与缬沙坦成品中杂质E的量呈 比例关系。当异亮氨酸甲酯盐酸盐的含量在0.23%时，缬沙坦中的杂质E的量为 0.10%;异亮氨酸甲酯盐酸盐的含量为0.16%的，缬沙坦中杂质E的量为0.06L 因此，我们选择异亮氨酸甲酯盐酸盐的含量不大于0. 23%的缬氨酸甲酯盐酸盐作 为起始原料，优选不大于0.15%的缬氨酸甲酯盐酸盐作为起始原料。
具体实施方式
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以下通过实施例进一步说明本发明，但不作为本发明的限制。 实施例l.缬沙坦的制备
在1000nd三口烧瓶中加入118g N-[(2'-氰基联苯-4-基)甲基]-(L)-缬氨 酸甲酯和400ml甲苯、44g碳酸氢钠，搅拌，冷却至OX:。滴加52ml戊酰氯，保
7持温度小于l(TC。加毕，室温搅拌10小时；TLC和HPLC表明反应完成。加入 100mlX2水，搅拌O. 5小时，分走水相；甲苯相用50mllN盐酸、50ml5X碳酸 氢钠和50mlX2盐水洗，用40g无水硫酸钠干燥。过滤，滤液旋蒸得到浅黄色油 状物，即为N-[(2'-氰基联苯-4-基)甲基]-N-戊酰基-(L)-缬氨酸甲酯。
在2000ml三口烧瓶中加入三丁基氯化锡135ml、叠氮化钠40g、二甲苯400ml 和N-[(2'-氰基联苯-4-基)甲基]-N-戊酰基-(L)-缬氨酸甲酯，升温至14(TC反 应24 30小时。冷却室温，加入560glOX的氢氧化钾溶液30 35。C下搅拌8 16小时，反应完成后，分走二甲苯层，加入200ml 二甲苯和200ml异丙醚洗涤。 水层加入42g亚硝酸钠，用浓盐酸缓慢调PH为2 2. 5，搅拌。用500mlX2乙 酸乙酯萃取，合并乙酸乙酯层，用盐水洗，无水硫酸钠干燥后减压回收溶剂，得 到U5g黄色粘稠油状物即为缬沙坦粗品。
实例2.缬沙坦的精制
将得到的缬沙坦粗品加到460ml乙酸乙酯中，加热至完全溶解。冷却至室温 后，继续冷却至0。C保存2小时，过滤，滤饼用少量冷的乙酸乙酯洗涤。烘干， 得到80g缬沙坦一次结晶产品。将缬沙坦一次结晶产品加到400ml乙酸乙酯中， 加热至溶解，搅拌冷却至室温，过滤，滤饼用少量乙酸乙酯洗涤，晾干，得到 60g缬沙坦二次结晶产品，HPLC纯度〉99. 7%。
实例3. VLSI-E的制备
在250ml三口烧瓶中加入12. 5g碳酸钾和85mL乙腈，加入L-异亮氨酸甲酯 盐酸盐5. lg，加入VLS-02 16.7g，加热至50 55'C。反应7. 5 h，过滤，滤液 减压旋蒸。油状物溶于70mL甲苯中，加入4. lg碳酸氢钠，滴加4.6ml戊酰氯。 加完后室温搅拌3 4h。甲苯层用30mlX2盐水洗，无水硫酸钠干燥后，旋干得 到21g油。将上述油状物溶于90ral甲醇中，滴加lml盐酸。加完后室温搅拌3 4h。过滤，滤液减压旋干得到14. 4g油。上述油状物中加入60ml甲苯，加入5. 6g 氢氧化钾溶于90ml水的溶液。加完后控制温度30 35。C搅拌5. 5h，分去甲苯层； 水层用盐酸(约7ml)调节pH至2 3，过滤。固体用乙酸乙酯重结晶得到白色 固体约4. 3g，即为VLSI-E。
实例4缬氨酸甲酯盐酸盐中异亮氨酸甲酯盐酸盐测定的样品处理方法1 取L-异亮氨酸甲酯盐酸盐1000mg，置10.0ml容量瓶中，加约5ml水溶解；量取氢氧化钠(2.5mol/L)溶液2.0ml，缓缓加入容量瓶中，水定容，摇匀，0.2/im
水膜过滤；即得。取0.2Ad气相色谱进样分析。
实例5缬氨酸甲酯盐酸盐中异亮氨酸甲酯盐酸盐测定的样品处理方法2 取L-异亮氨酸甲酯盐酸盐1000mg，置10.0ml离心管中，精密加7.0ml 二氯
甲垸溶解；精密逐滴滴加三乙胺3.0ml，摇匀，3000转离心15min， 0.2]Lim有机
膜过滤；即得。取0.2pd气相色谱进样分析。
附缬沙坦的有关物质色谱条件
色谱柱(Ll)Nucleosil 100-10 C18，25cmX4. 6面，lOixra;
流动相水-乙腈-冰醋酸(500: 500: 1);
检测波长225nm;
流速每分钟1.0ral; 柱温30。C;
进样量10nl。
附2.纈氨酸甲酯盐酸盐中异亮氨酸甲酯盐酸盐的GC测定方法 色谱柱HP-5， 50mX0. 320咖X1.05um; 载气氮气；
检测器FID;
流速每分钟1.5ml;
柱温IOO'C，保持2分钟，1(TC/tnin升温至20(TC，保持5分钟；； 进样量0.2ul。
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权利要求
1、一种缬沙坦制备方法，包括以下步骤，其特征在于，用异亮氨酸酯成盐物的含量不大于0.23％的缬氨酸酯成盐物为起始原料，产物中VLSI-E的含量不超过0.1％。
2、 权力要求1的制备方法，其特征在于，含量不大于0. 23%的异亮氨酸酯成盐 物用以下方法得到，(1) 准备一批或多批的缬氨酸酯的成盐物；(2) 采用脱盐的方法处理后，测定(l)中缬氨酸酯成盐物中异亮氨酸酯 成盐物的含量；(3) 在步骤(2)的基础上选择异亮氨酸酯成盐物的含量不大于0.23% 的缬氨酸酯成盐物作为起始原料；
3、 根据权利要求书1所述的方法，其特征在于缬氨酸酯成盐物可以为盐酸盐、 硫酸盐等无机成盐物，也可为苯磺酸盐等有机成盐物。
4、 根据权利要求书1所述方法，缬氨酸酯成盐物为化学结构上一切可能的缬氨 酸酯成盐物，如脂肪醇酯成盐物、芳香醇酯成盐物等。
5、 根据权利要求书3和4所述的缬氨酸酯成盐物，其特征在于缬氨酸酯成盐物中异亮氨酸酯成盐物的含量不大于0. 23%。
6、 根据权利要求书3、 4和5所述，其特征在于，优选缬氨酸甲酯盐酸盐作为起 始原料。
7、 根据权利要求书3、 4和5所述，其特征在于，缬氨酸酯成盐物中异亮氨酸酯 成盐物的含量优选小于0. 15%。
8、 根据权利要求书1所述方法，合成的工艺方法为采用缬氨酸酯成盐物为原料 的合成工艺方法；不限于本专利说明书中描述和采用的方法。
9、 根据权利要求书4和6所述，缬氨酸酯成盐物中异亮氨酸酯成盐物的质量控 制方法首先采用脱盐的方法得到游离的缬氨酸酯和异亮氨酸酯，再采用气相色谱 的分析方法。
10、 根据权利要求说明书9所述，缬氨酸酯成盐物中异亮氨酸酯成盐物测定中， 样品处理采用的脱盐方法可以采用无机碱(氢氧化钠、碳酸钠等)或有机碱(三乙 胺等)中和成盐物的酸，生成游离的缬氨酸酯和异亮氨酸酯。
全文摘要
本发明涉及一种缬沙坦中杂质E的研究及控制方法，该方法对合成的初始原料进行限定，用异亮氨酸酯成盐物的含量不大于0.23％的缬氨酸酯成盐物为合成的起始原料，得到缬沙坦，其杂质VLSI-E的含量不超过0.1％，可达到本发明的目的。
文档编号G01N30/00GK101560190SQ20091008519
公开日2009年10月21日 申请日期2009年6月1日 优先权日2009年6月1日
发明者刘蕴秀, 琰 杨, 殷毅静, 王文峰, 蒋玲敏, 江 邹 申请人:北京赛科药业有限责任公司