专利名称：一种参麦注射液中5-羟甲基糠醛的定量测定方法
技术领域：
本发明涉及一种中药制剂中有害成分的检测及定量分析方法。具体的说，是一种对参麦 注射液中所含5-羟甲基糠醛进行检测和定量的方法。
背景技术：
5-羟甲基糠醛(5-(Hydroxymethy1)-2-furaldehyde， 5-HMF)是葡萄糖或者果糖在高温或酸 性等条件下脱水产生的一个醛类化合物，存在于焦糖、酒类、酱油、咖啡、葡萄干、乳制品、 蜂蜜、某些天然产物和杀虫剂中。研究认为5-HMF对眼、粘膜、皮肤有刺激性，能与人体蛋白 质结合产生蓄积中毒，造成动物横纹肌麻痹和内脏损害，并且具有神经毒性，且有报道称其 存在潜在的遗传及生殖毒性等；研究发现5-HMF能促进导致结肠小囊的产生，并呈剂量依赖性。 并认为5-HMF可能会产生一定程度的基因毒性，其机制为5-HMF在体内经硫化和氯化的过程产 生致突变作用。因此各国对食品、饮料和环境中的5-HMF限定都比较严格。从85年版开始我国 药典对含糖输液中5-HMF含量作了限量规定。
参麦注射液是古方"生脉散"的衍变方，由红参和麦冬两种中药材经现代工艺提取加工 而成，用于治疗气阴两虚型之休克、冠心病、病毒性心肌炎、慢性肺心病、粒细胞减少症， 为国家中药保护品种，系基本急救药品。参麦注射液已有20余年的临床应用，但对其中的活 性成分，尤其是可能引发毒副反应的化学成分一直不是很清楚。
参麦注射液里因含有大量的果糖和蔗糖，在进行制剂时不可避免产生5-羟甲基糠醛。同 时，参麦注射液产品说明书要求使用250ml葡萄糖注射液稀释使用，两者配伍使用很可能对用 药患者产生一定的不良作用。
目前，参麦注射液的质量标准尚未有制定5-羟甲基糠醛的含量限定项，也未见有关于参 麦注射液中5-羟甲基糠醛的定性和定量分析的报导，因此申请人认为，目前迫切需要发明一 种简便快捷的，并且可以定量的检测参麦注射液生产过程中和产品质量检验时对5-羟甲基糠 醛的含量测定方法，用以检测并控制5-羟甲基糠醛的含量，提高药物的质量标准，减少药物 对人体的不良作用，增加药物的安全性。
发明内容
本发明的目的是寻找一种可以应用于参麦注射液生产和产品质量控制的过程中检测5-羟 甲基糠醛及定量的方法，用以检测并控制5-羟甲基糠醛的含量，减少药物对人体的不良作用。 本发明利用高效液相色谱法建立了一种简便快捷可靠的参麦注射液中的5-羟甲基糠醛的检测 和定量的方法。
该法不仅可以用于参麦注射液成品中5-羟基糠醛的含量i!!l定，在参麦注射液的生产环节 中也可作为生产过程检测的一部分使用。
本发明的实现系通过以下步骤
本发明中的液相色谱测定采用十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；以甲醇一水为 流动相，其中甲醇的比例为5 15%，流动相的速度可为0.2 2.0ml/min:紫外检测波长为 285 ± 5 nm;柱温为30 ± 5 。C。
本发明用于定量检测参麦注射液中的5-羟甲基糠醛的HPLC方法经方法学考察，表明该方 法在大范围的进样量内与峰面积呈良好的线性关系，精密度良好，相对标准偏差(RSD)为
0. 1、，重现性良好，相对标准偏差(RSD)为0.2%。
5-羟甲基糠醛对照品(上)和参麦注射液(下)的HPLC图谱
具体实施例方式
1、 仪器与试药
Waters alliance 2695高效液相色谱仪； Waters 2489双波长紫外检测器； Sartorius MC21S型电子分析天平； 甲醇(Merck，色谱纯)； 水(蒸馏水)。
参麦注射液由正大青春宝药业有限公司提供；
5-羟甲基糠醛(批号081216)对照品由上海融禾医药科技发展有限公司提供，含量为99. 45%。
2、 方法与结果 2.1色谱条件
色谱柱Alltima C18 (4.6 X 150隱，5州)；流动相甲醇-水溶液(8: 92);检测波长,-284 nm;流速1 ml/min;柱温30 ± 5 。C。 2.2方法学考察
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2. 2. 1空白对照与阴性对照试验
取蒸馏水进行空白测定，按样品溶液的制备方法制备阴性样品溶液，相同条件下进行考察， 高效液相色谱图中5-羟甲基糠醛特征峰相应位置无干扰峰的存在。
2.2.2 5-羟甲基糠醛对照品溶液的制备
精密称取5-羟甲基糠醛对照品3. 086 mg置于100 ml容量瓶中，加蒸馏水溶解定容至刻度， 摇匀即得。
2. 2. 3供试品溶液的制备
将参麦注射液摇匀后直接取样过微孔滤膜(O. 45州)即可。 2. 2. 4系统适应性试验
对供试样品溶液和对照品溶液进样测定，所得液相色谱图中理论塔板数以被测组分5-羟甲基 糠醛计算大于9000， 5-羟甲基糠醛与相邻峰的分离度大于4.0，拖尾因子符合要求。
2. 2. 5线性范围考察
精密吸取对照品溶液l、 2、 4、 8、 12、 16和20 /^注入液相色谱仪测定，以5-羟甲基糠醛 峰面积为纵坐标(Y)，以进样量(A)为横坐标，绘制工作曲线，得回归方程为Y=7. 19X106 X-5 . 88 X 104， R2=0. 999992，表明5-羟甲基糠醛在0. 03069 0. 6138/^进样量范围内与峰 面积呈良好的线性关系。
2. 2. 6精密度试验
精密吸取同一对照品溶液12W在上述色谱条件下重复进样分析6次，结果表明该方法精密度 良好，5-羟甲基糠醛含量(雄Anl)的相对标准偏差(RSD)为O. 1%。
2. 2. 7重复性试验
精密吸取同一供试品溶液(批号0810222) 20W在上述色谱条件下重复进样分析5次，结果 表明，重现性良好，5-羟甲基糠醛含量(传/ml)的相对标准偏差(RSD)为0.2%
2. 2. 8稳定性试验
分别在Oh、 2h、 4h、 8h、 12h、 24h精密吸取同一供试品溶液(批号0810222) 20 W在上述 色谱条件下进样分析，结果表明，稳定性良好，5-羟甲基糠醛含量(/fe/ml)的相对标准偏差(RSD)为0.3% 2.2.9回收率试验
精密量取同一批(0809252)已知含量的供试参麦注射液溶液2 ml五份分别置于5个10 ml容 量瓶中，然后分别精密加入对照品溶液5 ml，加蒸馏水至刻度，摇匀，精密吸取20W在上 述色谱条件下测定，平均回收率为103.2%， RSD=0.7%，结果表明5-羟甲基糠醛回收率良好。
2. 2.10耐用性试验
精密吸取同一供试品溶液(批号0810222) 20 W在不同的色谱条件下，测定5-羟甲基 糠醛的含量，分别计算相对标准偏差(RSD)，均符合要求(RSD〈2.0%)
色谱条件分别为
1) 流动相比例的变化甲醇-水溶液(5 : 95)和甲醇-水溶液(15 : 85);
2) 柱温的变化25°C和35°C;
3) 检测波长的变化279nm和289nm;
4) 色谱柱的变化Extend-C18和Eclipse XDB-C18 ，
2.3.测定结果
直接取五个批次的参麦注射液，过微孔滤膜(0.45/m)后，每次精密量取20W注入高效液相 色谱仪，在上述色谱条件下测定，记录色谱峰面积，计算含量，结果见表l.
表l参麦注射液中5-羟甲基糠醛含量
批次含量(/^/ml)平均含量(堆/ml)
081110115. 0215. 2715. 14
090120113.8313. 8513. 84
090212110. 8610. 6910.77
090328112.8612. 8412.85
090519215.0315. 1115. 0权利要求
1.一种参麦注射液中5-羟甲基糠醛的定量测定方法。其特征在于1)参麦注射液直接进样，无需预处理；2)用十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以甲醇-水为流动相；流动相中甲醇的比例为5-15％；3)取5-羟甲基糠醛作对照品适量配成对照品溶液，采用反相液相色谱分别对对照品和样品溶液进行分析，紫外检测，紫外检测的波长为284±5nm，按外标法以峰面积计算样品中5-羟甲基糠醛的含量。
2. 根据权利要求1所述的参麦注射液中的5-羟甲基糠醛的定量测定方法，其特征在于1) 参麦注射液直接进样，无需预处理；2) 用十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以甲醇一水为流动相；流动相中甲醇的比例为8%;3) 取5-羟甲基糠醛作对照品适量配成对照品溶液，采用反相液相色谱分别对对照品和样品溶 液进行分析，紫外检测，紫外检测的波长为284mn，按外标法以峰面积计算样品中5-羟甲基 糠醛的含量。
全文摘要
本发明涉及一种对参麦注射液中所含5-羟甲基糠醛的定量测定方法。5-羟甲基糠醛会对人体造成一定的毒副作用，对其进行含量控制有利于提高参麦注射液的质量。含量测定步骤包括配置5-羟甲基糠醛对照品溶液，样品和对照品溶液在液相色谱条件下测定并计算5-羟基糠醛的含量，色谱条件为以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以甲醇-水为流动相；流动相中甲醇的比例为5-15％，紫外检测的波长为284±5nm。该法快捷、准确、重现性好，适合在参麦注射液整个生产流程中使用。
文档编号G01N30/02GK101620207SQ20091010093
公开日2010年1月6日 申请日期2009年8月10日 优先权日2009年8月10日
发明者鹤 冯, 凌益平, 张建兵, 张晓丽, 朱大元, 牧 李, 潘迎锋, 王木兰, 许正宇, 谭俊杰, 谭昌恒 申请人:正大青春宝药业有限公司