专利名称：评估肝毒性的工具和方法
评估肝毒性的工具和方法本发明涉及化合物风险分级的毒理学评估领域。具体来说，本发明涉及诊断肝毒 性的方法。其还涉及测定化合物能否在受试者中诱导这种肝毒性的方法和鉴别用于治疗 肝毒性的药物的方法。而且，本发明涉及包含至少5种代谢产物的特征值的数据集(data collection)、包含所述数据集的数据存储介质以及诊断肝毒性的系统和设备(device)。最 后，本发明还涉及代谢产物组或用于其测定的工具(means)在制备用于诊断受试者肝毒性 的诊断设备或组合物中的用途。肝毒性，也称为肝脏毒性，指的是化学诱导的或化学驱动的肝细胞损害。肝脏在体 内各种内源或外源化学品的代谢中起核心作用。由于肝脏为核心代谢器官，所以肝脏对来 源于毒性物质或它们的代谢产物的毒性尤其敏感。在肝脏暴露于其下的化合物中，存在主动施用的化合物例如药物或食物中含有的 营养化合物以及从环境中不可避免地摄入的化合物。毒性化合物也被称为肝毒素。许多肝毒素可以由肝脏以两步过程进行化学修饰。第一步通常包括化合物的功 能化。在第二步中，将功能化的化合物结合以便允许例如经由胆汁排泄。一些肝毒素仅可 能被结合。在功能化(主要是氧化)过程中，涉及特殊的氧化酶，即细胞色素P450(CYP) 酶。一些肝毒素直接或间接影响CYP酶，并因此干扰它们自身或其它肝毒素的生理解 毒。(Jaeschke 2002，毒理科学(Toxicol Sci. )65(2) :166-76 ;Sturgill 1997，临床化学 (Clin. Chem. )43(8) :1512-1526)。由于各种病症、疾病或医学状态包括肝细胞坏死、肝炎、脂肪变性、肝硬化、磷脂质 病(phospholipoidosis)、胆汁淤积、胆管炎、肝静脉血栓形成、肝肿瘤，肝毒性在受试者中 可能变得明显(参见例如，Grunhagen 2003，Z. Gastroenterol. 41 (6) :565-578)。作为肝 毒素施用的结果观察到的最常见的病症为诱导的肝细胞坏死或纤维化。其可能伴随丙氨 酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶和Y-谷氨酰转移酶的水平增加以及晚期急性肝功能衰竭。诱 导所述坏死的典型肝毒素为四氯化碳。肝炎为伴有炎症细胞浸润肝脏的炎性疾病。它可 能是例如由病毒例如甲型、乙型和丙型肝炎病毒(HPV)引起的，或者由暴露于化合物或药 物(例如Halothan、双氯芬酸或阿司匹林)引起的，或者为受损的胆汁产生或流动的结果。 胆汁淤积的特征在于受损的胆汁流动。它可能是例如由避孕丸、蛋白同化留类或或别嘌呤 醇类引起的。脂肪变性伴随导致微泡性或大泡性脂肪肝的甘油三酯积聚。脂肪变性的一种 特殊类型为磷脂质病。引起脂肪变性的化合物为例如阿司匹林、酮洛芬或四环素。还已报 告血管性损害为肝毒素暴露的结果。这些损害包括例如肝静脉血栓形成。而且，肝毒素可 能致使出现肝肿瘤例如肉芽肿或赘生性(neoplastic)肿瘤(包括肝细胞癌、血管肉瘤和 肝脏腺瘤)。赘生性肿瘤可能例如是由氯乙烯诱导产生的(参见例如，Weber 2003，Crit. Rev.Toxicol. 33(2) :105-36 ；Chitturi 2002, Semin Liver Dis. 22(2) :169-83 ；Scheen 2001, Diabetes Metab. 27(3) :305-313 ；Rikans 2000, J Biochem Mol Toxicol. 14(2) 110-117 ；Fromenty 1995，Pharmacol. Ther. 67(1) 101-154 ；Kaplowitzl986, Ann Intern. Med. 104(6) :826-839)。由于肝毒素可能的作用的多样性，肝毒性的评估是相当复杂的过程。现行方法通常包括临床检查(例如超生检查)、病理学检查和组织病理学检查以及生物化学分析。当 前分析的主要生化标记物为丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶、碱性磷酸酶和胆红素。然而， 这些生物标记物的调节是相当复杂的，变化有时甚至可以在进展相当良好的阶段发生。组 织病理学评估的主要缺点为它们是侵袭性的，即使是当与临床病理学测量结合时，它们的 可靠性也较差，因为它们部分上是基于实施检查的毒理学家的个人解释。而且，根据现行 临床测量方法很难将作为肝毒素-诱导的肝毒性(例如药物诱导的肝毒性)的结果出现的 前述疾病和病症与其它疾病或病症的原因区分开(Gunawan 2004, Drug Metab. Rev. 36 (2) 301-312)。药物诱导的肝毒性的技术评价的阐述在⑶ER/CBER工业指南草案(⑶ER/CBER Draft Guidance for Industry):药物诱导的肝损伤上市前的临床评价，2007年10月以 及在EMEA(CHMP)指南草案对药物诱导的肝毒性的非临床指南，2008年1月M日(Doc RefEMEA/CHMP/SWP/1150115/2006)中进行描述。如果考虑到到目前为止肝毒性为药物退出市场的最常见的原因，则肝毒性的重 要性可能变得明显。而且，在欧洲共同体中任何产业中使用的化合物例如现在将需要符 合 REACH(化学品注册、评价和授权(Registration，Evaluation and Authorisation of Chemicals))。应理解，应将化合物诱导肝毒性的潜在性认为是化合物的高危险性，并且因 此，仅当遵守高安全标准时所述化合物才可用于有限的应用。目前尚无以有效和可靠的方式评估化合物的毒理学性质(特别是肝毒性)的灵敏 和特异的方法，然而，这样的方法将是非常受欢迎的。因此，可以将本发明隐含的技术问题视为提供符合前述需要的工具和方法。所述 技术问题被在权利要求书中表征且在下文进行描述的实施方案解决。因此，本发明涉及诊断肝毒性的方法，该方法包括(a)在疑似患有肝毒性的雄性受试者的测试样品中测定至少一种(优选5种) 下列分析物的量4-羟苯基丙酮酸、棕榈酸(C16:0)、亚油酸(C18:顺式[9，12]2)、花生 四烯酸(C20:顺式_[5，8，11，14]4)、二十二碳六烯酸(C22:顺式[4，7，10，13，16，19]6)、 α-生育酚、胆固醇、磷酸甘油酯、二十四烷酸(以4:0)、十七酸(C17:0)、二十三烷酸 (C23:0)、肌醇(my0-h0Sit0l)-2-单磷酸酯、山嵛酸(C22:0)、4_羟基二氢神经鞘氨醇、神 经酸(C24:l)、二十碳三烯酸(C20:3)、3_磷酸甘油(Glycerol-3-Phosphate)、磷脂酰胆 碱(C18:2，C20:4)、神经酰胺(dl8:l，CM: 1)、神经酰胺(dl8:2，以4:0)、鞘磷脂(dl8:l， C16 0)、1，2- 二油酰基-sn-甘油基-3-磷脂酰基-L-丝氨酸、磷脂酰胆碱(C18 0/C22 6)、 亚油酸(C18:顺式[9，12]2)、溶血甘油磷酰胆碱(Iysoglyceroophosphorylcholines) (18:1 Lyso PC)或磷脂酰胆碱，或者在疑似患有肝毒性的雌性受试者的测试样品中测定 至少一种并优选至少5种下列分析物的量3-磷酸甘油、辅酶Q9、葡萄糖、甘油、棕榈酸 (C16:0)、硬脂酸(C18:0)、花生四烯酸(C20:顺式-[5，8，11，14]4)、二十二碳六烯酸(C22: 顺式W，7，10，13，16，19]6)、胆固醇、磷酸甘油酯、二十四烷酸(以4:0)、十七酸(C17:0)、花 生酸(C20:0)、二十三烷酸(C23:0)、磷酸酯(phosphate)、山嵛酸(C22 0)、4_羟基二氢神 经鞘氨醇、神经酸(CM:1)、14-甲基十六烷酸、二十碳三烯酸(C20:3)、ID28x493,5-甲氧 基鞘氨醇、赤式-鞘氨醇、苏氨酸、葡萄糖、神经酰胺(dl8:l，CM: 1)、二酰基甘油酯(DAG) (C18:l, C18:2)、三酰基甘油酯(TAG)、1，2-二油酰基-sn-甘油基-3-磷脂酰基-L-丝氨酸、亚油酸(C18:顺式[9,12] 或磷脂酰胆碱，和(b)将在步骤(a)中测定的量与参比值进行比较，据此诊断肝毒性。ID28x493指的是由GCMS单离子监测在色谱保留时间为17. 39分钟处测定表观m/ ζ为91Da的一种脂质分子，该脂质分子可从大鼠脂质血浆部分中得到。更优选地，所述脂质 分子的GCMS谱可在附图
中找到。上述分析物中的一些为分子类别。这些分析物包括例如指所有类型的磷脂酰胆 碱类化合物(phosphateidylcholines)的“磷脂酰胆碱”，指所有类型的TAG的“三酰基甘 油酯”。然而，某些类型的磷脂酰胆碱为特别优选的，并因此就它们的脂肪酸基团进一步说 明，例如“磷脂酰胆碱(C18 0/C22 6) ”。更具体地说，这些术语优选具有下列意思。本文中所用意义的术语“18:1 Lyso PC”指的是分子种类，优选地，其特征在 于含有C18:l脂肪酸单元的溶血甘油磷酰胆碱的和参数(sumparameter)。离子化种类 (spezies)的质荷比(m/z)为522. 4Da(+/"0. 3Da)。优选的裂解图在下文图3中显示。本文中所用意义的术语“磷脂酰胆碱(C18:2，C20:4)”指的是分子种类，优选 地，其特征在于含有C16:0脂肪酸单元和C22:6脂肪酸单元的组合或C18:2脂肪酸单元 和C20:4脂肪酸单元的组合的甘油磷酰胆碱的和参数。离子化种类的质荷比(m/z)为 806. 6Da(+/"0. 3Da)。优选的裂解图在下文图4中显示。本文中所用的术语“神经酰胺(dl8:l，C24:l)”指的是分子种类，优选地，其特征 在于含有dl8:1长链碱单元和C24:1脂肪酸单元的组合或dl8:2长链碱单元和C24:0脂肪 酸单元的组合的神经酰胺类的和参数。离子化种类的质荷比(m/z)为648. 6Da(+/"0. 3Da)。 优选的裂解图在下文图5中显示。本文中所用的术语“DAG(C18:1，C18 2) ”指的是分子种类，优选地，其特征在于含 有C18:1脂肪酸单元和C18:2脂肪酸单元的组合的二酰基甘油的和参数。离子化种类的质 荷比(m/z)为 641. 6Da(+/-0. 3Da)。本文中所用的术语“神经酰胺(dl8:l，C24:0)”指的是分子种类，优选地，其特征 在于含有dl8:1长链碱单元和C24:0脂肪酸单元的组合的神经酰胺类的和参数。离子化种 类的质荷比(m/z)为650. SDa(+/-0. 3Da)。优选的裂解图在下文图6中显示。本文中所用的术语“TAG”指的是分子种类，优选地，其特征在于三酰基甘油的和参 数。离子化种类的质荷比(m/z) ^ 547. 6Da(+/"0. 3Da) 0本文中所用的术语“鞘磷脂(dl8:l，C16:0)”指的是分子种类，优选地，其特征在 于含有dl8:1长链碱单元和C16:0脂肪酸单元的组合的鞘磷脂类的和参数。离子化种类的 质荷比(m/z)为703. 6Da(+/"0. 3Da)。优选的裂解图在下文图7中显示。本文中所用的术语“磷脂酰胆碱”指的是分子种类，优选地，其特征在于甘油磷酰 胆碱的和参数。离子化种类的质荷比(m/z)为780. SDa(+/-0. 3Da)。本文中所用的术语“ 1，2- 二油酰基-sn-甘油基_3_磷脂酰基-L-丝氨酸”指的是 分子种类，优选地，其特征在于含有总碳数为36和总双键数为1的脂肪酸单元的甘油磷酰 胆碱的和参数。离子化种类的质荷比(m/z)为788.6Da(+/-0.3Da)。本文中所用的术语“磷脂酰胆碱(C18:0/C22:6) ”指的是分子种类，优选地，其特征 在于含有C18:0脂肪酸单元和C22:6脂肪酸单元的组合的甘油磷酰胆碱的和参数。离子化种类的质荷比(m/z)为834. 6Da(+/"0. 3Da)。优选的裂解图在下文图8中显示。根据本发明提到的表述“用于诊断的方法”意指该方法基本上由前述步骤组成或 可能还包括其他步骤。然而，应理解，在优选的实施方案中，所述方法为在活体外进行的方 法，即不是在人体或动物体上实施的方法。本文所用的诊断指的是评估受试者患有疾病的 可能性。如本领域技术人员所理解的，这种评估，尽管优选对100%的待诊断受试者是正确 的，但通常不可能是100%正确的。然而，该术语要求统计学上显著份额的受试者能够被鉴 定为患有疾病或具有患病预兆。份额是否具有统计学上显著性能够由本领域技术人员使用 各种熟知的统计评价工具(例如置信区间的测定、P-值测定、魏尔希检验(WELCH-test)、 曼-怀二氏检验(Mann-Whitney test)等)立即测定。具体内容可见于Dowdy和Wearden， 研究统计学(Statisticsfor Research)，John Wiley & Sons，纽约 1983 中。优选的置信区 间为至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%。ρ-值优选为0. 2、 0. 1、0· 05。根据本发明的诊断包括相关疾病或其症状的监控、确认和分类。监控涉及记录已 诊断的疾病例如用来分析疾病的进展、特定治疗对疾病进展的影响或者在疾病期间或在成 功治疗疾病后出现的并发症。确认涉及加强或证实对已使用其它指示物或标记物进行的诊 断。分类涉及根据症状的强度或类型将诊断分到不同的种类中。与肝毒性有关的一些 疾病或状况可能伴随着其它代谢变化。优选地，对于胆汁淤积，根据本发明已发现除了前述 分析物外，在下表中叙述的血清中的胆汁酸的量也增加了。表在肝毒性诱导的胆汁淤积期间增加的胆汁酸
权利要求
1.诊断肝毒性的方法，该方法包括(a)在疑似患有肝毒性的雄性受试者的测试样品中测定至少5种下列分析物的量 4-羟苯基丙酮酸、棕榈酸(C16:0)、亚油酸(C18:顺式[9，12]2)、花生四烯酸(C20:顺 式-[5，8，11，14]4)、二十二碳六烯酸(C22:顺式 W，7，10，13，16，19] 6)、α-生育酚、胆固 醇、磷酸甘油酯、二十四烷酸(以4:0)、十七酸(C17:0)、二十三烷酸(C23:0)、肌醇-2-单磷 酸酯、山嵛酸(C22:0)、4-羟基二氢神经鞘氨醇、神经酸(C24:l)、二十碳三烯酸(C20:3)、 3-磷酸甘油、磷脂酰胆碱(C18:2, C20:4)、神经酰胺(dl8:l, CM: 1)、神经酰胺(dl8:2, C24:0)、鞘磷脂(dl8:l, C16:0)、l，2-二油酰基-sn-甘油基-3-磷脂酰基-L-丝氨酸、 磷脂酰胆碱(C18:0/C22:6)、亚油酸(C18:顺式[9,12] 2) ,18 ILyso PC或磷脂酰胆碱， 或者在疑似患有肝毒性的雌性受试者的测试样品中测定至少下列分析物的量3-磷酸甘 油、辅酶Q9、葡萄糖、甘油、棕榈酸(C16:0)、硬脂酸(C18:0)、花生四烯酸(C20:顺式-[5， 8，11，14]4)、二十二碳六烯酸(C22:顺式W，7，10，13，16，19]6)、胆固醇、磷酸甘油酯、 二十四烷酸(以4:0)、十七酸(C17:0)、花生酸(C20:0)、二十三烷酸(C23:0)、磷酸酯、山嵛 酸(C22:0)、4-羟基二氢神经鞘氨醇、神经酸(CM:1)、14-甲基十六烷酸、二十碳三烯酸 (C20:3), ID28x493,5-甲氧基鞘氨醇、赤式-鞘氨醇、苏氨酸、葡萄糖、神经酰胺(dl8:l, C24:l)、二酰基甘油酯(DAG) (C18:l，C18 2)、三酰基甘油酯(TAG)、1，2-二油酰基-sn-甘 油基-3-磷脂酰基-L-丝氨酸、亚油酸(C18:顺式[9,12] 或磷脂酰胆碱，和(b)将在步骤(a)中测定的量与参考值进行比较，据此诊断肝毒性。
2.权利要求1所述的方法，其中所述的受试者已经与疑似能够诱导肝毒性的化合物接触。
3.测定化合物能否在受试者中诱导肝毒性的方法，该方法包括(a)在已经与疑似能够诱导肝毒性的化合物接触的雄性受试者的样品中测定至少 5种下列分析物的量4-羟苯基丙酮酸、棕榈酸(C16:0)、亚油酸(C18:顺式[9，12]2)、 花生四烯酸(C20:顺式-[5，8，11，14]4)、二十二碳六烯酸(C22:顺式W，7，10，13，16， 19] 6), α-生育酚、胆固醇、磷酸甘油酯、二十四烷酸(以4:0)、十七酸(C17:0)、二十三烷 酸(C23:0)、肌醇-2-单磷酸酯、山嵛酸(C22:0)、4-羟基二氢神经鞘氨醇、神经酸(C24:l), 二十碳三烯酸(C20:3)、3-磷酸甘油、磷脂酰胆碱(C18:2，C20:4)、神经酰胺(dl8:l， C24:l)、神经酰胺(dl8:2，以4:0)、鞘磷脂(dl8:l，C16 0)、1，2-二 油酰基-sn-甘油 基-3-磷脂酰基-L-丝氨酸、磷脂酰胆碱(C18:0/C22:6)、亚油酸(C18:顺式[9，12]2)、 18:lLyso PC或磷脂酰胆碱，或者在已经与疑似能够诱导肝毒性的化合物接触的雌性的 测试样品中测定至少5种下列分析物的量3-磷酸甘油、辅酶Q9、葡萄糖、甘油、棕榈酸 (C16:0)、硬脂酸(C18:0)、花生四烯酸(C20:顺式-[5，8，11，14]4)、二十二碳六烯酸(C22: 顺式W，7，10，13，16，19]6)、胆固醇、磷酸甘油酯、二十四烷酸(以4:0)、十七酸(C17:0)、 花生酸(C20:0)、二十三烷酸(C23:0)、磷酸酯、山嵛酸(C22:0)、4-羟基二氢神经鞘氨醇、 神经酸(C24:1),14-甲基十六烷酸、二十碳三烯酸(C20:3)、ID28x493,5-甲氧基鞘氨醇、 赤式-鞘氨醇、苏氨酸、葡萄糖、神经酰胺(dl8:l,以4:1)、二酰基甘油酯(DAG) (C18:l, C18 2)、三酰基甘油酯(TAG) ,1,2- 二油酰基-sn-甘油基_3_磷脂酰基-L-丝氨酸、亚油酸 (C18:顺式[9,12] 或磷脂酰胆碱；和(b)将在步骤(a)中测定的量与参考值进行比较，据此测定化合物诱导肝毒性的能力。
4.权利要求2或权利要求3所述的方法，其中所述的化合物为至少一种选自下列的化 合物棉隆、二甲基甲酰胺、四氢呋喃、醋酸环丙孕酮、四氢呋喃、醋酸环丙孕酮、毒杀芬或对 乙酰氨基酚。
5.权利要求1-4中任意一项所述的方法，其中所述的参考值来源于(i)患有肝毒性的 受试者或(ii)已经与至少一种选自下列的化合物接触的受试者棉隆、二甲基甲酰胺、四 氢呋喃、醋酸环丙孕酮、四氢呋喃、醋酸环丙孕酮、毒杀芬或对乙酰氨基酚。
6.权利要求5所述的方法，其中测试样品中与参考值基本上相同的分析物的量指示肝毒性。
7.权利要求1-4中任意一项所述的方法，其中所述的参考值来源于(i)已知未患有 肝毒性的受试者或(ii)未与至少一种选自下列的化合物接触的受试者棉隆、二甲基甲酰 胺、四氢呋喃、醋酸环丙孕酮、四氢呋喃、醋酸环丙孕酮、毒杀芬或对乙酰氨基酚。
8.权利要求1-4中任意一项所述的方法，其中所述的参考值为对一群受试者的分析物 的计算参考值。
9.权利要求7或权利要求8所述的方法，其中测试样品中与参考值相比有差异的分析 物的量指示肝毒性。
10.权利要求7-9中任意一项所述的方法，其中肝毒性的指示为与参考值相比分析 物的量具有如下所示差异(i)在雄性样品中4-羟苯基丙酮酸、棕榈酸(C16:0)、亚油酸 (C18:顺式[9，12]2)、花生四烯酸(C20:顺式-[5，8，11，14]4)、二十二碳六烯酸(C22:顺 式W，7，10，13，16，19]6)、α -生育酚、胆固醇、磷酸甘油酯、二十四烷酸(以4:0)、十七酸 (C17:0)、二十三烷酸(C23:0)、肌醇-2-单磷酸酯、山嵛酸(C22:0)、4-羟基二氢神经鞘氨 醇、神经酸(C24:l)、二十碳三烯酸(C20:3)、3-磷酸甘油、磷脂酰胆碱(C18:2, C20:4)、神 经酰胺(dl8:l，CM: 1)、神经酰胺(dl8:2，以4:0)、鞘磷脂(dl8:l，C16:0)、1，2-二油酰 基-sn-甘油基-3-磷脂酰基-L-丝氨酸、磷脂酰胆碱(C18:0/C22:6)、亚油酸(C18:顺 式[9，12]2)、18:lLySO PC或磷脂酰胆碱，所有这些化合物的量均增加和(ii)在雌性受试 者的样品中3-磷酸甘油、辅酶Q9、葡萄糖、甘油、棕榈酸(C16:0)、硬脂酸(C18:0)、花生 四烯酸(C20:顺式_[5，8，11，14]4)、二十二碳六烯酸(C22:顺式 W，7，10，13，16，19]6)、 胆固醇、磷酸甘油酯、二十四烷酸(以4:0)、十七酸(C17:0)、花生酸(C20:0)、二十三烷酸 (C23:0)、磷酸酯、山嵛酸(C22:0)、4-羟基二氢神经鞘氨醇、神经酸(C24:1),14-甲基十六 烷酸、二十碳三烯酸(C20:3)、I拟8x493、5-甲氧基鞘氨醇、赤式-鞘氨醇、苏氨酸、葡萄糖、 神经酰胺(dl8:l，C24:l)、二酰基甘油酯0八6)((18:1，(18:2)、三酰基甘油酯(TAG No 1)、 1，2-二油酰基-sn-甘油基-3-磷脂酰基-L-丝氨酸、亚油酸(C18:顺式[9，12]2)或磷脂 酰胆碱，所有这些化合物的量均增加。
11.鉴别用于治疗肝毒性的物质的方法，该方法包括下列步骤(a)在已经与疑似能够治疗肝毒性的候选物质接触的患有肝毒性的雄性受试者的样 品中测定至少5种下列分析物的量4-羟苯基丙酮酸、棕榈酸(C16:0)、亚油酸(C18:顺 式[9，12]2)、花生四烯酸(C20:顺式_[5，8，11，14]4)、二十二碳六烯酸(C22:顺式[4，7， 10，13，16，19]6)、α-生育酚、胆固醇、磷酸甘油酯、二十四烷酸(以4:0)、十七酸(C17:0)、 二十三烷酸(C23:0)、肌醇-2-单磷酸酯、山嵛酸(C22:0)、4-羟基二氢神经鞘氨醇、神经 酸(C24:l)、二十碳三烯酸(C20:3)、3-磷酸甘油、磷脂酰胆碱(C18:2, C20:4)、神经酰胺(dl8:l，CM: 1)、神经酰胺(dl8:2，以4:0)、鞘磷脂(dl8:l，C160)、1，2-二油酰基-sn-甘 油基-3-磷脂酰基-L-丝氨酸、磷脂酰胆碱(C18:0/C22:6)、亚油酸(C18:顺式[9，12]2)、 18:1 Lyso PC或磷脂酰胆碱，或者在已经与疑似能够治疗肝毒性的候选物质接触的患有肝 毒性的雌性受试者的样品中测定至少5种下列分析物的量3-磷酸甘油、辅酶Q9、葡萄糖、 甘油、棕榈酸(C16:0)、硬脂酸(C18:0)、花生四烯酸(C20:顺式-[5，8，11，14]4)、二十二碳 六烯酸(C22:顺式W，7，10，13，16，19]6)、胆固醇、磷酸甘油酯、二十四烷酸(以4:0)、十七 酸(C17:0)、花生酸(C20:0)、二十三烷酸(C23:0)、磷酸酯、山嵛酸(C22 0)、4_羟基二氢神 经鞘氨醇、神经酸(CM:1)、14-甲基十六烷酸、二十碳三烯酸(C20:3)、I拟8x493、5-甲氧 基鞘氨醇、赤式-鞘氨醇、苏氨酸、葡萄糖、神经酰胺(dl8:l，CM: 1)、二酰基甘油酯(DAG) (C18:1，C18:2)、三酰基甘油酯(TAG No 1)、1，2-二油酰基-sn-甘油基-3-磷脂酰基-L-丝 氨酸、亚油酸(C18:顺式[9,12] 或磷脂酰胆碱；和(b)将在步骤(a)中测定的量与参考值进行比较，据此鉴别能够治疗肝毒性的物质。
12.权利要求11所述的方法，其中所述的参考值来源于(i)患有肝毒性的受试者或 ( )已经与至少一种选自下列的化合物接触的受试者棉隆、二甲基甲酰胺、四氢呋喃、醋 酸环丙孕酮、四氢呋喃、醋酸环丙孕酮、毒杀芬或对乙酰氨基酚。
13.权利要求12所述的方法，其中测试样品中与参考值相比有差异的分析物的量指示 物质能够治疗肝毒性。
14.权利要求11-13中任意一项所述的方法，其中能够治疗肝毒性的物质的指示为与 参考值相比分析物的量具有如下所示差异(i)在雄性样品中4-羟苯基丙酮酸、棕榈酸 (C16:0)、亚油酸(C18:顺式[9，12]2)、花生四烯酸(C20:顺式-[5，8，11，14]4)、二十二 碳六烯酸(C22:顺式W，7，10，13，16，19]6)、α -生育酚、胆固醇、磷酸甘油酯、二十四烷 酸(以4:0)、十七酸(C17:0)、二十三烷酸(C23:0)、肌醇-2-单磷酸酯、山嵛酸(C22:0)、 4-羟基二氢神经鞘氨醇、神经酸(CM: 1)、二十碳三烯酸(C20:3)、3-磷酸甘油、磷脂酰胆 碱(C18:2，C20:4)、神经酰胺(dl8:l，CM: 1)、神经酰胺(dl8:2，以4:0)、鞘磷脂(dl8:l， C16 0)、1，2- 二油酰基-sn-甘油基-3-磷脂酰基-L-丝氨酸、磷脂酰胆碱(C18 0/C22 6)、 亚油酸(C18:顺式[9，12]2)、18:1 Lyso PC或磷脂酰胆碱，所有这些化合物的量均降低和 ( )在雌性受试者的样品中3-磷酸甘油、辅酶Q9、葡萄糖、甘油、棕榈酸(C16:0)、硬脂酸 (C18:0)、花生四烯酸(C20:顺式_[5，8，11，14]4)、二十二碳六烯酸(C22:顺式W，7，10， 13，16，19]6)、胆固醇、磷酸甘油酯、二十四烷酸(以4:0)、十七酸(C17:0)、花生酸(C20:0)、 二十三烷酸(C23:0)、磷酸酯、山嵛酸(C22:0)、4-羟基二氢神经鞘氨醇、神经酸(C24:l), 14-甲基十六烷酸、二十碳三烯酸(C20:;3)、ID28X493、5-甲氧基鞘氨醇、赤式-鞘氨醇、苏氨 酸、葡萄糖、神经酰胺(dl8:l, CM: 1)、二酰基甘油酯(DAG) (C18:l, C182)、三酰基甘油酯 (TAG No 1)、1，2-二油酰基-sn-甘油基-3-磷脂酰基-L-丝氨酸、亚油酸(C18:顺式[9， 12] 2)或磷脂酰胆碱，所有这些化合物的量均降低。
15.权利要求11所述的方法，其中所述的参考值来源于(i)已知未患有肝毒性的受试 者或(ii)未与至少一种选自下列的化合物接触的受试者棉隆、二甲基甲酰胺、四氢呋喃、 醋酸环丙孕酮、四氢呋喃、醋酸环丙孕酮、毒杀芬或对乙酰氨基酚。
16.权利要求11所述的方法，其中所述的参考值为对一群受试者中的分析物的计算的 参考值。
17.权利要求15或权利要求16所述的方法，其中测试样品中与参考值基本上相同的分 析物的量指示物质能够治疗肝毒性。
18.权利要求1-21中任意一项所述的方法，其中所述的肝毒性包括至少一种选自下列 的病症或疾病肝细胞坏死、肝炎、脂肪变性、肝硬化、磷脂质病、胆汁淤积、胆管炎、肝静脉 血栓形成、肝肿瘤。
19.权利要求1-18中任意一项所述的方法，其中所述的测定分析物组包括质谱法 (MS)。
20.权利要求19所述的方法，其中所述的质谱法为液相色谱(LC)-MS或气相色谱 (GC)-MS0
21.权利要求1-20中任意一项所述的方法，其中所述的样品为所述受试者的体液样
22.权利要求21所述的方法，其中所述的体液为血液。
23.权利要求1-22中任意一项所述的方法，其中所述的受试者为哺乳动物。
24.一种数据集，该数据集包含至少5种下列分析物4-羟苯基丙酮酸、棕榈酸 (C16:0)、亚油酸(C18:顺式[9，12]2)、花生四烯酸(C20:顺式-[5，8，11，14]4)、二十二 碳六烯酸(C22:顺式W，7，10，13，16，19]6)、α -生育酚、胆固醇、磷酸甘油酯、二十四烷 酸(以4:0)、十七酸(C17:0)、二十三烷酸(C23:0)、肌醇-2-单磷酸酯、山嵛酸(C22:0)、 4-羟基二氢神经鞘氨醇、神经酸(CM: 1)、二十碳三烯酸(C20:3)、3-磷酸甘油、磷脂酰胆 碱(C18:2，C20:4)、神经酰胺(dl8:l，CM: 1)、神经酰胺(dl8:2，以4:0)、鞘磷脂(dl8:l， C16 0)、1，2- 二油酰基-sn-甘油基-3-磷脂酰基-L-丝氨酸、磷脂酰胆碱(C18 0/C22 6)、 亚油酸(C18:顺式[9,12]2)U8:lLyso PC或磷脂酰胆碱的特征值和/或至少下列分析物 3-磷酸甘油、辅酶Q9、葡萄糖、甘油、棕榈酸(C16:0)、硬脂酸(C18:0)、花生四烯酸(C20: 顺式-[5，8，11，14]4)、二十二碳六烯酸(C22:顺式W，7，10，13，16，19] 6)、胆固醇、磷酸 甘油酯、二十四烷酸(以4:0)、十七酸(C17:0)、花生酸(C20:0)、二十三烷酸(C23:0)、磷 酸酯、山嵛酸(C22:0)、4-羟基二氢神经鞘氨醇、神经酸(CM:1)、14-甲基十六烷酸、二十 碳三烯酸(C20:3)、I拟8x493、5-甲氧基鞘氨醇、赤式-鞘氨醇、苏氨酸、葡萄糖、神经酰胺 (dl8:l，C24:l)、二酰基甘油酯 0八6)((18:1，(18:2)、三酰基甘油酯(TAG No 1)、1，2_ 二油 酰基-sn-甘油基-3-磷脂酰基-L-丝氨酸、亚油酸(C18:顺式[9，12]2)或磷脂酰胆碱的 特征值。
25.包含权利要求23所述的数据集的数据存储介质。
26.—种系统，其包含(a)与(b)工作上连接的用于比较样品的代谢产物的特征值的工具(b)权利要求25所述的数据存储介质。
27.权利要求沈所述的系统，该系统进一步包含用于测定样品中分析物的特征值的工具。
28.—种诊断组合物，其包含至少5种下列分析物4-羟苯基丙酮酸、棕榈酸(C16:0)、 亚油酸(C18:顺式[9，12]2)、花生四烯酸(C20:顺式-[5，8，11，14]4)、二十二碳六烯酸 (C22:顺式W，7，10，13，16，19]6)、α -生育酚、胆固醇、磷酸甘油酯、二十四烷酸(以4:0)、 十七酸(C17:0)、二十三烷酸(C23:0)、肌醇-2-单磷酸酯、山嵛酸(C22:0)、4-羟基二氢神经鞘氨醇、神经酸(C24:l)、二十碳三烯酸(C20:3)、3-磷酸甘油、磷脂酰胆碱(C18:2, C20:4)、神经酰胺(dl8:l，CM: 1)、神经酰胺(dl8:2，以4:0)、鞘磷脂(dl8:l，C16:0)、l， 2-二油酰基-sn-甘油基-3-磷脂酰基-L-丝氨酸、磷脂酰胆碱(C18:0/C22:6)、亚油酸 (C18:顺式[9,12]2)U8:lLyso PC或磷脂酰胆碱和/或至少5种下列分析物3_磷酸甘 油、辅酶Q9、葡萄糖、甘油、棕榈酸(C16:0)、硬脂酸(C18:0)、花生四烯酸(C20:顺式-[5， 8，11，14]4)、二十二碳六烯酸(C22:顺式W，7，10，13，16，19]6)、胆固醇、磷酸甘油酯、 二十四烷酸(以4:0)、十七酸(C17:0)、花生酸(C20:0)、二十三烷酸(C23:0)、磷酸酯、山嵛 酸(C22:0)、4-羟基二氢神经鞘氨醇、神经酸(CM:1)、14-甲基十六烷酸、二十碳三烯酸 (C20:3), ID28x493,5-甲氧基鞘氨醇、赤式-鞘氨醇、苏氨酸、葡萄糖、神经酰胺(dl8:l, C24:l)、二酰基甘油酯(DAG) (C18:l，C18:2)、三酰基甘油酯(TAG No 1)、1，2_ 二油酰 基-sn-甘油基-3-磷脂酰基-L-丝氨酸、亚油酸(C18:顺式[9,12] 或磷脂酰胆碱或用 于其测定的工具。
29.—种诊断设备，其包含(a)工具，该工具用于测定至少5种下列分析物4-羟苯基丙酮酸、棕榈酸(C16:0)、 亚油酸(C18:顺式[9，12]2)、花生四烯酸(C20:顺式-[5，8，11，14]4)、二十二碳六烯酸 (C22:顺式W，7，10，13，16，19]6)、α -生育酚、胆固醇、磷酸甘油酯、二十四烷酸(以4:0)、 十七酸(C17:0)、二十三烷酸(C23:0)、肌醇-2-单磷酸酯、山嵛酸(C22:0)、4-羟基二氢 神经鞘氨醇、神经酸(C24:l)、二十碳三烯酸(C20:3)、3-磷酸甘油、磷脂酰胆碱(C18:2, C20:4)、神经酰胺(dl8:l，CM: 1)、神经酰胺(dl8:2，以4:0)、鞘磷脂(dl8:l，C16:0)、l，2-二油酰基-sn-甘油基-3-磷脂酰基-L-丝氨酸、磷脂酰胆碱(C18:0/C22:6)、亚油酸 (C18:顺式[9，12] 2)、18: ILyso PC或磷脂酰胆碱的特征值和/或至少5种下列分析物3-磷酸甘油、辅酶Q9、葡萄糖、甘油、棕榈酸(C16:0)、硬脂酸(C18:0)、花生四烯酸(C20: 顺式-[5，8，11，14]4)、二十二碳六烯酸(C22:顺式W，7，10，13，16，19] 6)、胆固醇、磷酸 甘油酯、二十四烷酸(以4:0)、十七酸(C17:0)、花生酸(C20:0)、二十三烷酸(C23:0)、磷 酸酯、山嵛酸(C22:0)、4-羟基二氢神经鞘氨醇、神经酸(CM:1)、14-甲基十六烷酸、二十 碳三烯酸(C20:3)、I拟8x493、5-甲氧基鞘氨醇、赤式-鞘氨醇、苏氨酸、葡萄糖、神经酰胺 (dl8:l，C24:l)、二酰基甘油酯 0八6)((18:1，(18:2)、三酰基甘油酯(TAG No 1)、1，2_ 二油 酰基-sn-甘油基-3-磷脂酰基-L-丝氨酸、亚油酸(C18:顺式[9，12]2)或磷脂酰胆碱的 特征值；和(b)基于由(a)中的工具测定的特征值用来诊断肝毒性的工具。
30.至少5种下列分析物4-羟苯基丙酮酸、棕榈酸(C16:0)、亚油酸(C18:顺式[9， 12]2)、花生四烯酸(C20:顺式-[5，8，11，14]4)、二十二碳六烯酸(C22:顺式W，7，10， 13，16，19]6)、α-生育酚、胆固醇、磷酸甘油酯、二十四烷酸(以4:0)、十七酸(C17:0)、 二十三烷酸(C23:0)、肌醇-2-单磷酸酯、山嵛酸(C22:0)、4-羟基二氢神经鞘氨醇、神经 酸(C24:l)、二十碳三烯酸(C20:3)、3-磷酸甘油、磷脂酰胆碱(C18:2, C20:4)、神经酰胺 (dl8:l，CM: 1)、神经酰胺(dl8:2，以4:0)、鞘磷脂(dl8:l，C160)、1，2-二油酰基-sn-甘 油基-3-磷脂酰基-L-丝氨酸、磷脂酰胆碱(C18:0/C22:6)、亚油酸(C18:顺式[9，12] 2)、 18:1 Lyso PC或磷脂酰胆碱和/或至少5种下列分析物3-磷酸甘油、辅酶Q9、葡萄糖、 甘油、棕榈酸(C16:0)、硬脂酸(C18:0)、花生四烯酸(C20:顺式-[5，8，11，14]4)、二十二碳六烯酸(C22:顺式W，7，10，13，16，19]6)、胆固醇、磷酸甘油酯、二十四烷酸(以4:0)、十七 酸(C17:0)、花生酸(C20:0)、二十三烷酸(C23:0)、磷酸酯、山嵛酸(C22 0)、4_羟基二氢神 经鞘氨醇、神经酸(C24:1),14-甲基十六烷酸、二十碳三烯酸(C20:3), ID28x493,5-甲氧 基鞘氨醇、赤式-鞘氨醇、苏氨酸、葡萄糖、神经酰胺(dl8:l，CM: 1)、二酰基甘油酯(DAG) (C18:1，C18:2)、三酰基甘油酯(TAG No 1)、1，2-二油酰基-sn-甘油基-3-磷脂酰基-L-丝 氨酸、亚油酸(C18:顺式[9,12] 或磷脂酰胆碱在制备用来诊断肝毒性的诊断设备或组合 物中的用途。
31.用来测定至少5种下列分析物4-羟苯基丙酮酸、棕榈酸(C16:0)、亚油酸(C18:顺 式[9，12]2)、花生四烯酸(C20:顺式_[5，8，11，14]4)、二十二碳六烯酸(C22:顺式[4，7， 10，13，16，19]6)、α-生育酚、胆固醇、磷酸甘油酯、二十四烷酸(以4:0)、十七酸(C17:0)、 二十三烷酸(C23:0)、肌醇-2-单磷酸酯、山嵛酸(C22:0)、4-羟基二氢神经鞘氨醇、神经 酸(C24:l)、二十碳三烯酸(C20:3)、3-磷酸甘油、磷脂酰胆碱(C18:2, C20:4)、神经酰胺 (dl8:l，CM: 1)、神经酰胺(dl8:2，以4:0)、鞘磷脂(dl8:l，C160)、1，2-二油酰基-sn-甘 油基-3-磷脂酰基-L-丝氨酸、磷脂酰胆碱(C18:0/C22:6)、亚油酸(C18:顺式[9，12]2)、 18:1 Lyso PC或磷脂酰胆碱和/或至少5种下列分析物3-磷酸甘油、辅酶Q9、葡萄糖、 甘油、棕榈酸(C16:0)、硬脂酸(C18:0)、花生四烯酸(C20:顺式-[5，8，11，14]4)、二十二碳 六烯酸(C22:顺式W，7，10，13，16，19]6)、胆固醇、磷酸甘油酯、二十四烷酸(以4:0)、十七 酸(C17:0)、花生酸(C20:0)、二十三烷酸(C23:0)、磷酸酯、山嵛酸(C22 0)、4_羟基二氢神 经鞘氨醇、神经酸(C24:1),14-甲基十六烷酸、二十碳三烯酸(C20:3), ID28x493,5-甲氧 基鞘氨醇、赤式-鞘氨醇、苏氨酸、葡萄糖、神经酰胺(dl8:l，CM: 1)、二酰基甘油酯(DAG) (C18:1，C18:2)、三酰基甘油酯(TAG No 1)、1，2-二油酰基-sn-甘油基-3-磷脂酰基-L-丝 氨酸、亚油酸(C18:顺式[9,12] 或磷脂酰胆碱的工具在制备用来诊断肝毒性的诊断设备 或组合物中的用途。
全文摘要
本发明涉及化合物风险分级的毒理学评估领域。具体来说，本发明涉及诊断肝毒性的方法。其还涉及测定化合物能否在受试者中诱导所述肝毒性的方法和鉴别用来治疗肝毒性的药物的方法。而且，本发明涉及包含至少5种代谢产物的特征值的数据集、包含所述数据集的数据存储介质以及用于诊断肝毒性的系统和设备。最后，本发明还涉及代谢产物组或用于其测定的工具在制备用来诊断受试者肝毒性的诊断设备或组合物中的用途。对于每种性别，公开了不同的代谢组模式，即不同组别的分析物。肝毒性标记物主要选自游离脂肪酸，但还包括各种磷脂酰胆碱、羟苯基丙酮酸、α-生育酚、胆固醇、肌醇-2-单磷酸酯、4-羟基二氢神经鞘氨醇、神经酰胺(d18:1，C24:1)、神经酰胺(d18:2，C24:0)、鞘磷脂(d18:1，C16:0)、1，2-二油酰基-sn-甘油基-3-磷脂酰基-L-丝氨酸、18:1Lyso磷脂酰胆碱、辅酶Q9、葡萄糖、甘油、磷酸甘油酯、磷酸酯、5-甲氧基鞘氨醇、赤式-鞘氨醇、苏氨酸、二酰基甘油酯和三酰基甘油酯。
文档编号G01N33/82GK102105792SQ200980129314
公开日2011年6月22日 申请日期2009年5月26日 优先权日2008年5月28日
发明者A·普奥考汀, 拉文兹韦 B·范, E·法比安, E·莱博尔德, 巴勒莫 库尼亚 G·科埃略, H·坎普, J·C·威尔莫, M·M·赫罗尔德, R·洛塞, T·B·沃克, V·施特劳斯, W·梅勒特 申请人:巴斯夫欧洲公司